利用MALDI-TOF-MS技术初步探讨不同中医证型的银屑病外周血T淋巴细胞膜蛋白

目的:研究不同中医证型寻常型银屑病患者外周血T淋巴细胞膜上的差异表达蛋白,筛选特异性蛋白质标记物。方法:收集寻常型银屑病患者30例(其中血热证10例,血瘀证10例,血燥证10例)和健康对照10例的外周抗凝血;分别用磁珠分选出T淋巴细胞;提取T淋巴细胞的细胞膜蛋白;应用双向电泳/基质辅助激光解析电离飞行时间质谱联用技术(MALDI-TOF-MS),检测细胞膜蛋白的蛋白峰值。结果:寻常型银屑病组与健康对照组间差异蛋白峰为4个;血热证患者与血瘀证患者之间差异蛋白峰为1个,血热证患者与血燥证患者之间无差异蛋白峰,血瘀证患者与血燥证患者之间差异蛋白峰为1个。结论:寻常型银屑病和健康对照以及不同中医证型间外周血T淋巴细胞膜蛋白表达谱可能存在差异,但相关蛋白质的鉴定、筛选尚需更大样本量的研究。

MALDI-TOF-MS技术快速鉴定临床酵母样真菌的应用评价

目的评价基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)在快速鉴定临床分离的酵母样真菌中的应用价值。方法收集临床分离的酵母样真菌135株,分别用VITEK MS、API20C和CHROMargar显色培养同时进行鉴定与比较,χ2检验分析VITEK MS和API及显色培养基鉴定结果的准确率,以真菌内转录间隔区(ITS)基因测序作为鉴定结果的金标准,同时比较各种方法在临床使用中的优缺点。结果 VITEK MS、API20C和显色培养基鉴定的准确率分别为98.5%(133/135)、78.5%(106/135)、59.3%(80/135),经χ2检验分析,差异有统计学意义(χ2=51.996,P<0.05)。结论 MALDI-TOF-MS可将酵母样真菌快速、准确地鉴定到种。

基于2D-DIGE/MALDI-TOF-MS技术筛选奶牛低血钙症生物标志物

奶牛乳热(MF)是一种严重的营养代谢性疾病,通常被分为临床型及亚临床型低血钙症(SH)。奶牛乳热的诊断通常是应用奶牛血浆中的钙浓度进行判定的,但是在奶牛乳热整个发生发展的过程中,发病的具体机制仍是研究的盲点。在本试验中通过筛选奶牛乳热、亚临床低血钙症及健康奶牛间生物标志物进而解释可能的发生机制。选取27头奶牛作为实验动物,并根据其血浆钙浓度及有无临床症状分为乳热组(MF组)、亚临床低血钙组(SH组)和正常组(C组)。在组内每3个样品混合成为1个混合样本应用于2D-DIGE试验。结果得到110个差异蛋白质点,选取其中80个点进行MALDI-TOF-MS质谱分析,得到66个阳性结果并整合成为16种蛋白质。根据试验结果,选取A2M、HP和PON1进行Western blotting验证试验。本试验首次证实A2M、HP和PON1是奶牛乳热症3种新的生物标志物,并分析了其在乳热症发生过程中的可能作用机制。

LCM、IMB联合MALDI-TOF-MS技术在恶性卵巢上皮瘤相关标志物分离检测中的应用

目的排除混杂细胞的干扰,获取人卵巢上皮瘤细胞,分离、检测特异相关标志物。方法采用激光捕获显微切割（LCM）技术获取无间质混杂的人正常、良性、恶性卵巢上皮瘤细胞,分别提取细胞总蛋白,用免疫磁珠（IMB）技术和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）技术分离检测黑色素瘤激活因子CXCL1及IL-8（1~77 aa）、IL-8（6~77 aa）和IL-8（9~77 aa）。结果利用LCM获取的卵巢上皮细胞数量级达106~107。IMB可将CXCL1及不同亚型IL-8从卵巢正常、良性和恶性上皮瘤细胞的蛋白裂解液中分离并用于MALDI-TOF-MS检测。结论 LCM、IMB联合MALDI-TOF-MS技术可以准确有效地获取卵巢上皮癌细胞的特异标志物。

MALDI-TOF-MS技术在血液系统疾病中的应用进展

蛋白质是人类执行生命活动的直接载体,对于蛋白质的深入研究,不但有助于全面阐释生命活动的本质,而且对于研究疾病发生机制、提前预警以及诊断疾病、疗效的预后预测均具有重要意义。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术是目前蛋白质组学研究中经常用到的质谱研究技术之一,已经广泛应用于临床研究。现就其在血液系统疾病中的应用进展进行总结。

应用MALDI-TOF-MS技术分析转移和非转移黑色素瘤患者外周血清蛋白的差异表达

目的:应用蛋白质组学技术分析转移性和非转移性黑色素瘤患者外周血清中差异表达的蛋白质,初步探讨其对转移性黑色素瘤患者的诊断及治疗指导意义。方法:共收集101例患者外周血清,包括25例转移性黑色素瘤患者及76例对照者(31例非转移性患者和45例健康者)。从中随机抽取73例(18例转移患者,20例非转移患者和35例健康者)用于建立区分模型,其余28例(7例转移患者,11例非转移患者和10例健康者)用来对区分模型进行盲法验证。运用基质辅助激光解离飞行时间质谱技术,对外周血清蛋白质进行检测,应用Ciphergen蛋白质芯片软件对蛋白质谱进行分析。结果:黑色素瘤转移患者外周血清与对照组外周血清蛋白质谱相比,质荷比为2 598.33、3 646.79、4 605.48、8 603.10、7 756.64 m/z和9 598.82 m/z,共6个蛋白质峰呈表达有明显差异(P均=0.000),以此构建出转移性黑色素瘤的诊断模型,它的诊断敏感性为83.33%,特异性为74.55%。另外对该模型进行了盲法验证,其诊断转移性黑色素瘤的敏感性为71.43%,特异性为76.19%。结论:黑色素瘤转移患者外周血清蛋白质表达谱与对照组相比有明显变化,相对分子质量为2 598.33、3 646.79、4 605.48、8 603.10、7 756.64 m/z和9 598.82 m/z的蛋白质点可以作为黑色素瘤转移患者诊断的潜在生物学标志物。

WCX磁珠联合MALDI-TOF-MS技术在结直肠癌诊断中的应用

目的:比较结直肠癌与正常人血清蛋白质谱的变化,筛选特异性蛋白标志物,建立结直肠癌诊断分类树模型.方法:收集血清样本133例(其中结直肠癌67例,正常人66例),随机分为建模组和验证组.运用弱阳离子纳米磁珠(magnetic bead-weak cation exchange,MB-WCX)联合基质辅助激光解吸离子飞行质谱(matrix-assistedlaser desorption/ionization time-of-flight massspectrometry,MALDI-TOF-MS),建立结直肠癌与正常人血清蛋白质谱.用Flex Analysis2.4软件收集数据,应用ClinproTools2.2软件对建模组34例结直肠癌和33例正常人血清差异蛋白质谱进行定量分析,应用Genetic Algorithm算法建立结直肠癌诊断模型,应用所获取的诊断模型对验证组样本(33例结直肠癌和33例正常人)进行分类诊断,以评价诊断模型的诊断价值.结果:通过比较分析结直肠癌与正常人血清蛋白质谱,发现共有33个差异蛋白峰(P<0.05),其中在结直肠癌中表达上调25个,表达下调8个.利用其中5个差异峰(Mr分别为759,3316,4645,4248,2645Dr)建立诊断模型,获得了94.12%(32/34)敏感性和96.97%(32/33)的特异性,经独立样本双盲验证,其灵敏度为93.94%(31/33),特异度为96.97%(32/33).结论:基于磁珠分离和MALDI-TOF-MS技术能直接检测出结直肠癌患者血清差异表达蛋白,建立的诊断模型具有较高的敏感性和特异性,对提高结直肠癌的诊断具有一定的临床意义.

MALDI-TOF-MS技术在块菌、美味牛肝菌物种快速甄别中的运用

运用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS),对2种云南特色高值野生食用菌块菌和美味牛肝菌进行物种甄别鉴定。运用液氮甲酸法处理样品,获得浓度分别为0.243 mg·mL^-1和0.284 mg·mL^-1的块菌和美味牛肝菌的蛋白质提取液,经MALDI-TOF-MS采集指纹图谱,对块菌和美味牛肝菌的蛋白指纹图谱进行比对与聚类分析。结果表明,产地不同的同种野生食用菌具有相似的蛋白指纹图谱和物种特征质谱峰,而不同种类的食用菌间具有差异明显的特征蛋白指纹图谱。MALDI-TOF-MS可以用于云南出口高值特色野生食用菌块菌和美味牛肝菌的物种快速甄别。

LAMP和MALDI-TOF-MS技术在检测食品中沙门氏菌方面的应用

当前沙门氏菌国家标准检测方法(国标法)不能满足食品安全监管高效性的需求。为提升食品中沙门氏菌检测效率,本文分别采用环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)对2份未知样品A和B进行沙门氏菌检验,通过对比国标法的检测结果,评价每种检测方法的效率和准确性。结果发现,3种方法对2份样品的检验结果均为沙门氏菌阳性,说明3种检验方法均具有较好的准确性、可靠性和一致性。其中,利用国标法分离筛选出8株沙门氏菌,经血清型鉴定为肠炎沙门氏菌;MALDI-TOF-MS法鉴定为肠炎沙门氏菌种肠炎亚种I,并明确了菌株的特征性离子峰;LAMP法无法定位具体沙门氏菌种。3种方法中,LAMP操作最简单,所用时间最短(2 d),其次是MALDI-TOF-MS方法(4~5 d),国标方法所用时间最长(5~7 d)。结果表明,在检测大批量沙门氏菌样品或突发的应急检验时,采用LAMP法快速筛选、国标法验证、MALDI-TOF-MS法辅助检测的策略,可提高样品检测的准确性和效率。本文的研究结果可以为大批量样本沙门氏菌检测规程的建立提供重要技术参考。

基于MALDI-TOF-MS技术建立肺腺癌诊断预测模型及其初步验证

目的利用液体芯片结合基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF-MS),筛选肺腺癌患者与肺良性疾病和健康人血清中的差异性多肽,建立肺腺癌诊断预测模型,发现诊断肺腺癌的潜在标志物。方法收集肺腺癌患者37例和健康体检者及肺部良性疾病患者(对照组)33例,其中肺腺癌组与对照组年龄、性别匹配,将上述两组按3∶1随机分为训练组(肺腺癌患者30例,对照者26例)和测试组(肺腺癌患者7例,对照者7例)。应用液体芯片-飞行时间质谱技术以及软件ClinProTools 3.0筛选训练组中肺腺癌组与对照组血清中的差异性多肽,建立肺腺癌诊断预测模型。利用测试组中的血清标本对诊断模型进行验证,评估该模型的诊断效能。结果通过软件ClinProTools 3.0分析,得到9个具有显著差异的多肽峰(P<0.05),其中肺腺癌中表达上调的峰m/z分别为8 976.5、4 469.05、4 966.78、8 925.5、4 531.05,表达下调的峰m/z分别为3 304.44、8 594.76、3 266.82、3 195.52。根据遗传算法(GA)建立肺腺癌诊断预测模型,该模型的整体识别能力为94.49%,利用测试组对该模型进行评估,结果显示该模型的灵敏度为100.0%,特异度为85.7%。结论肺腺癌患者血清中与肺部良性疾病及健康人血清中存在差异性多肽,利用这些差异性多肽峰建立肺腺癌诊断预测模型,为肺腺癌的早期诊断提供了一种新的方法。

应用MALDI-TOF-MS技术高通量检测乙肝病毒耐药基因变异

目的建立基于MALDI-TOF-MS技术的高通量检测乙型肝炎病毒耐药基因变异的临床检测方法。方法应用MassARRAY Assay Design软件设计iPLEX引物，按iPLEX反应的操作说明进行PCR扩增、SAP反应、引物延伸、脱盐、点样，MALDI-TOF-MS采集、分析iPLEX反应物的数据，判读基因变异位点。批量检测、分析138例HBV耐药包括拉米夫定、阿德福韦、恩替卡韦单药耐药及多重耐药的慢性乙型肝炎患者血清标本。并对MALDI-TOF-MS所检测的HBV基因变异位点所在区域进行DNA测序，与MALDI-TOF-MS检测结果对比、分析。结果建立了基于MALDI-TOF-MS技术的HBV基因突变检测平台，实现了临床血清标本的高通量检测。能一次获得138份标本的HBV基因突变临床检测结果。MALDI-TOF-MS技术和DNA测序同时检测的33份标本中，有10份检测结果不一致，其中有2份MALDI-TOF-MS技术未检测到，有1例出现2个检测位点不一致。结论MALDI-TOF-MS技术灵敏度高、准确度高，可高通量、快速检测HBV基因变异，适用于HBV临床诊治及监测。

MALDI-TOF-MS技术对HBV耐药基因突变检测的价值

目的:探讨MALDI-TOF-MS技术对乙型肝炎病毒(HBV)耐药基因突变检测的价值。方法:依据HBV、HCV基因组多态性及基因突变现有研究结果,选择靶区域,筛选突变位点,MassARRAY Assay Design软件设计iPLEX引物,按iPLEX反应的操作说明进行PCR扩增、SAP反应、引物延伸、脱盐、点样,MALDI-TOF-MS采集、分析iPLEX反应物的数据,判读基因变异位点。收集本院抗病毒药物单药或多药耐药患者血清30份,将MALDI-TOF-MS技术判读基因变异位点进行DNA测序,将结果与MALDI-TOF-MS检测结果进行对比。结果:利用MALDI-TOF-MS技术一次性可检测30份血清样本的HBV基因突变,在30份样本中,5份检测结果不一致,其中2份是MALDI-TOF-MS技术未检测到的基因突变点,1份是2个检测位点不一致。结论:MALDI-TOF-MS技术具有灵敏度高、准确度高及分辨率高等特点,为生命科学等领域提供了一种强有力的分析测试手段。

双向电泳联合MALDI-TOF-MS技术在筛选食管癌铂类耐药患者中的应用研究

目的:采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术检测食管癌(EC)患者化疗敏感性血清蛋白质谱,指导临床EC患者化疗方案的选择。方法:收集2013年1月至2014年6月我院收治的EC术后复发并行含铂化疗的患者40例,按照化疗疗效分为敏感组和耐药组。将两组蛋白质双向凝胶电泳图谱用Image Master 2D platinum 5.0软件分析并匹配,筛选出两组差异斑点,并采用MALDI-TOF-MS技术检测EC患者化疗敏感性血清蛋白质谱。结果:两组差异斑点共有68个,以耐药组为参照,敏感组患者血清蛋白下调的斑点有42个,上调的斑点有26个。从这68个差异斑点中筛选出8个斑点进行质谱鉴定,通过数据库检索分析和鉴定最终确定上述斑点所对应的蛋白质名称分别为Kininogen-1,Alpha-2-HS-glycoprotein,Fibrinogen beta chain,Clusterin,Retinol-binding protein 4,Beta-2-glycoprotein 1,Ig kappa chain C region,Complement C4-A。结论:基于铂类化疗的EC敏感患者和耐药患者间存在差异表达蛋白。

2023年度奶牛产业与技术发展报告

本文从生产现状、市场与贸易、加工与消费、技术研发等角度对2023年中国奶业发展进行了分析,同时指出中国与奶业发达国家产业素质的差距点,为中国奶业发展提出技术和政策建议。

光谱技术在果品无损检测中的应用研究进展

介绍了常用的果品无损检测方法,包括电子鼻法、X射线计算机断层成像法、机械方法、磁共振(核磁共振)成像光谱学法、拉曼光谱学法、近红外光谱技术等;重点综述了高光谱成像技术在无损检测水果结构特性、生化成分和安全性等方面的研究进展,以期为水果品质的无损检测研究提供参考。

合作研发与技术交易谁更有利于技术融合:以人工智能多层专利网络为例

技术融合能够显著提高企业创新能力,是产业融合的基础。合作研发和技术交易是常见的技术创新模式。为探究不同创新模式下的技术融合影响因素,以人工智能产业为例构建组织-技术多层网络模型,从技术异质性和创新能力异质性两个维度探究不同创新模式下组织合作伙伴异质性对技术融合的影响。研究表明,在合作研发模式下,技术异质性、创新能力异质性有利于技术融合;在技术交易模式下,创新能力异质性有利于技术融合,技术异质性不利于技术融合。

船舶模块化建造关键技术研究

随着科学技术的进步和船舶需求量的增长,船舶建造模式逐步进入了以中间产品为导向的模块化建造模式。相比原传统的建造模式,模块化建造模式下增加了大量中间模块舾装及建造的环节,既包含了区域或功能模块的组装成型、进舱安装,又包括大型分段或总段模块的结构建造、预舾装以及合拢的整体过程。船舶模块化建造技术更为复杂。模块化建造技术是实现模块化造船的前提,本文在分析船舶模块主要类型的基础上,研究了船舶模块化建造流程及其关键技术和措施,为提高模块化造船水平提供参考。

国际关系演变的技术政治解释——以美国对华技术博弈为分析视角

传统国际关系研究常常忽视技术在国际关系中的重要影响,仅将技术看作是经济和军事的天然附属。历经数十年的高速发展,技术特别是颠覆性技术深刻嵌入社会政治经济各领域,技术的“杠杆和重塑作用”不断增强,进而重构全球技术竞争模式,引发国际关系的深层次演变。当下,技术竞争呈现出参与门槛高、竞争对抗意识浓、产业链和价值链战略地位空前突出等特点。同时,新技术本身所呈现的颠覆性、快速迭代性和涌现性等特征愈发受到关注。美国对华在新技术领域的“切割和封锁”策略,在瓦解全球技术共享生态的同时,迫使技术竞争的双方主动和被动地进入更激烈的博弈状态,导致全球治理出现新难题,进而给国际关系与国际秩序带来更多不确定性。

基于BIM和物联网技术的智慧工地平台在LNG码头施工中的应用

针对LNG(液化天然气)码头工程施工中存在的安全风险系数大、人员管控要求高、安装难度高、工期进度紧等问题,开展基于BIM和物联网技术在智慧工地平台的研究与应用。通过采用建立BIM技术与物联网技术融合的智慧工地管理方法,深化创建施工BIM模型,结合相应的智能化设备,实现模型与现场数据接入和集成的应用,解决了施工过程管控难、数据信息源集成多、劳务人员现场管理难等典型LNG码头工程施工问题。通过将BIM技术与智慧工地平台在施工阶段融合应用,有效提升了LNG码头工程建设项目的施工质量和技术管理水平。研究旨在为LNG码头领域的工程建设提供有益的经验和借鉴,推动智慧工地平台在该领域的应用和发展。

突破“卡脖子”技术:知识开发模式对企业关键核心技术及其衍生技术的影响

在新一轮科技革命与百年未有之大变局下,我国企业正面临由贸易之争转变为科技实力之争带来的“卡脖子”技术困境。基于突破“卡脖子”技术的现实问题,以中国上市公司发明专利为数据集,分析企业知识开发模式对关键核心技术及其衍生技术的影响。结果表明,内部创新模式与外部创新模式均对企业关键核心技术及其衍生技术突破具有促进作用,但相比之下,外部模式产生的影响更加显著。进一步研究发现,市场竞争强度在知识开发与衍生技术之间起促进作用;选择外部知识开发模式不仅有利于衍生技术数量增长,而且有助于专利质量提高;衍生技术的成果转化会反馈新的关键核心技术突破。研究结论对我国企业高效选择创新路径,实现“卡脖子”技术突破具有重要参考价值。