Beclin1、MAP1LC3B和mTOR在宫颈病变中的表达及临床意义

目的检测Beclin1、MAP1LC3B及mTOR在宫颈病变中的表达,并探讨其临床意义。方法采用免疫组织化学方法,检测宫颈病变中Beclin1、MAP1LC3B及mTOR的表达,并与正常宫颈组织对照。结果Beclin1在正常宫颈组、低度鳞状上皮内病变(low-grade squamous intraepithelial lesion,LSIL)组、高度鳞状上皮内病变(high-grade squamous intraepithelial lesion,HSIL)组和宫颈鳞癌组中的阳性表达率分别为95.00%、84.00%、62.00%及34.00%;MAP1LC3B的阳性表达率分别为90.00%、86.00%、54.00%及22.00%;mTOR阳性表达率分别为35.00%、44.00%、72.00%及86.00%,不同组中的表达差异均有统计学意义(P<0.01)。在宫颈癌患者中,Beclin1阳性表达与淋巴转移及临床分期相关,MAP1LC3B阳性表达与肿瘤分化相关,mTOR的阳性表达则与淋巴转移相关。MAP1LC3B与Beclin1的表达呈正相关而与mTOR的表达呈负相关。结论自噬相关基因所反应的自噬水平随着宫颈病变的进展而下降,推测自噬功能缺失可能是促使宫颈病变持续发展的原因之一。

达氏鲟自噬基因MAP1LC3B克隆及其组织表达分析

【目的】掌握达氏鲟微管相关蛋白1A/1B轻链3B基因(MAP1LC3B)的表达模式,为后续研究MAP1LC3B基因功能及揭示达氏鲟的抗病分子机制提供理论依据。【方法】采用RACE技术从达氏鲟组织中克隆MAP1LC3B基因,通过ProtParam、TMpred、Phyre2及Singal 4.1等在线软件进行生物信息学分析,同时借助实时荧光定量PCR检测MAP1LC3B基因在达氏鲟不同组织中的表达情况。【结果】达氏鲟MAP1LC3B基因cDNA序列全长2208 bp,包含378bp的开放阅读框(ORF)、202 bp的5’端非编码区(5’-UTR)和1628 bp的3’端非编码区(3’-UTR),编码125个氨基酸。MAP1LC3B氨基酸序列含有GABARAP泛素结构域、Agt7结合位点、脂化位点和维管束蛋白结合位点。达氏鲟MAP1LC3B蛋白由18种氨基酸组成,其中谷氨酸(Glu)含量最高(占9.6%)、丙氨酸(Ala)含量最低(占1.6%);蛋白分子量为14743.01 Da,理论等电点(pI)为8.92,不稳定系数为65.12,总平均亲水性为-0.484,是一种不稳定的疏水性蛋白,且不存在跨膜结构,也无信号肽序列。MAP1LC3B基因在达氏鲟鳃、脑、皮肤、头肾、前肾、脾脏、中肾、心脏和肠道等组织中均有表达,以在鳃和肠道组织中的相对表达量较高,显著高于在其他组织中的相对表达量(P<0.05)。【结论】达氏鲟MAP1LC3B基因具有较高的保守性,在鳃和肠道黏膜免疫组织中高表达,表明自噬参与达氏鲟黏膜免疫过程,调节机体免疫反应。

自噬相关基因Beclin1和MAP1LC3B在胆囊癌组织中的表达及其意义

目的检测自噬基因Beclin1、MAP1LC3B在原发性胆囊癌组织中的表达情况,探讨细胞自噬在胆囊癌发生中的作用及其临床意义。方法采用免疫组织化学SP方法,检测Beclin1、MAP1LC3B在胆囊癌组织中的表达情况,并以同期手术切除的胆囊炎性疾病组织为对照;统计Beclin1和MAP1LC3B的表达情况,并分析其与胆囊癌临床病理特征之间的关系。结果胆囊癌组和慢性胆囊炎组Beclin1的阳性表达率分别为45.7%和78.3%,MAP1LC3B的阳性表达率分别为47.8%和71.7%,两组差异有统计学意义(P<0.05)。Beclin1和MAP1LC3B在不同年龄、性别、癌组织分化程度患者中的表达水平差异无统计学意义(P>0.05),但与周围脏器侵犯情况、病理TNM分期有关(P<0.05)。Beclin1和MAP1LC3B在胆囊癌组织中的表达水平呈正相关(r=0.538,P<0.01)。结论胆囊癌组织中Beclin1和MAP1LC3B表达水平明显低于胆囊炎性疾病组织;Beclin1和MAP1LC3B的表达水平与胆囊癌侵袭能力及TNM分期有关,且两者表达呈正相关;提示Beclin1和MAP1LC3B是反映胆囊癌生物学行为的重要指标,两者之间可能存在着某种共同通路。

MAP1LC3B表达促进结直肠癌侵袭转移的体外研究

目的探讨MAP1LC3B在结直肠癌(CRC)中的表达与侵袭转移及自噬的作用机制。方法采用免疫组织化学方法检测92例结直肠癌组织中MAP1LC3B的表达情况,结合临床病理及随访资料进行分析。体外构建慢病毒pLKO.1-MAP1LC3B-siRNA干扰质粒,转染HCT-116细胞株,对照组转染空质粒;采用MTT和侵袭小室实验检测细胞增殖侵袭能力。免疫荧光观察细胞形态。定量RT-PCR和Western blot方法检测MAP1LC3B、mTOR、ATG5和HIF-1α蛋白表达水平。结果 MAP1LC3B高表达存在于82.6%(76/92)癌组织,高于癌旁组织中的阳性率11.95%(11/92),差异有统计学意义(P<0.05);MAP1LC3B蛋白高表达与肝转移、TNM分期和不良预后具有显著相关性(P<0.05);抑制MAP1LC3B表达降低HCT-116细胞侵袭能力;并促进细胞发生自吞噬;下调mTOR、ATG5和HIF-1α蛋白表达水平,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MAP1LC3B是CRC新的预后指标;MAP1LC3B调控mTOR、ATG5和HIF-1α表达介导自吞噬的作用分子机制在CRC侵袭转移中起重要作用。

自噬相关蛋白MAP1LC3B在结肠癌中表达及其临床意义的初步探讨

目的探讨自噬相关蛋白MAP1LC3B在结肠癌中的表达及其临床意义。方法对2018年1月至2020年6月在本院接受手术治疗的结肠癌患者癌组织标本40例及癌旁正常组织标本40例进行分析。采用免疫组织化学染色检测自噬相关蛋白MAP1LC3B在结肠癌组织及癌旁正常组织中的表达,分析其表达水平与患者临床病理参数的关系。结果 MAP1LC3B在结肠癌组织中的表达阳性率为72.5%,高于癌旁正常组织(30%),差异有统计学意义(P<0.05)。MAP1LC3B在结肠癌组织中表达阳性组的肝转移发生率、淋巴结转移发生率高于阴性组,差异均有统计学意义(均P<0.05);两组TNM分期、分化程度比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论自噬相关蛋白MAP1LC3B在结肠癌组织的表达高于癌旁正常组织,与结肠癌肝转移、淋巴结转移的发生有关。

PI3KI/Akt1在辐射诱导的乳腺癌细胞自噬发生中表达调控及作用机制

目的研究不同剂量X线诱导乳腺癌细胞株MCF-7自噬发生过程中Akt表达的变化以及探讨小分子干扰RNA沉默Akt基因后对自噬的影响及可能的作用机制。方法采用实时荧光定量PCR方法检测MCF-7中Akt基因表达,Western blot方法检测Akt蛋白表达;实时荧光定量PCR方法检测Akt过表达和沉默模型中MAP1LC3B基因表达。结果正常照射组MCF-7细胞量效研究表明,在4、8、16 h Akt1表达分别在24、、8Gy区间内呈剂量依赖下降变化,照射后Akt1总体表达均低于假照组(P<0.01);32 h量效结果表明,Akt1表达明显呈剂量依赖下降变化,4、8、12Gy有显著性差异(P<0.05)。时间效应研究表明,48、、12Gy时程研究Akt1表达量均于8 h降至最低,差异显著(P<0.05),照射后Akt1基因总体变化均低于假照组。正常照射组MCF-7细胞Akt1蛋白表达情况为,照射后2 h Akt1蛋白表达即有明显下降趋势,24 h达至最低值;4Gy时效研究表明,照射后0.5 h Akt1蛋白表达明显下降,8 h达至最低值;8 Gy时效研究表明,照射后Akt1蛋白表达在0.5-4 h区间内呈时间依赖下降趋势,4 h达至最低值。Akt1 siRNA模型照射组量效研究表明,MAP1LC3B表达在8、163、2 h均有不同程度升高变化,12 Gy达至最大值(P<0.05);时间效应关系表明,2、48、Gy MAP1LC3B表达在16 h3、2 h上升变化显著(P<0.05),12 Gy时效表明,8、163、2 h MAP1LC3B表达呈剂量依赖上升变化,于32 h达至最大值(P<0.05)。结论 X线可能通过抑制PI3KI/AKT转导通路活性来促进乳腺癌细胞株MCF-7发生自噬。

瞬时受体电位通道蛋白在多功能性系统萎缩中的调控作用

多系统萎缩(multiple system atrophy,MSA)是一类神经系统退行性疾病,其病理特征是胶质细胞中出现含有不溶性α突触核蛋白(α-synuclein)的胞质包涵体.研究显示,α-synuclein在多系统萎缩的发病机制中有重要作用,但其毒性的分子机制目前还不清楚.本文在前期研究氧化应激条件下α-synuclein引起细胞内钙稳态失衡,提出了以氧化应激为连接的多系统萎缩中,胶质细胞死亡的新假说的基础上,深入分析了α-synuclein过表达导致U251细胞变性死亡的分子机制.首先证明过表达α-synuclein的U251细胞出现生长速度减慢、氧化应激水平增加和钙离子瞬时受体电位通道蛋白(transient receptor potential channel-1,TRPC1)表达量升高,而且细胞存活率的变化可通过下调TRPC1的表达得以恢复,说明TRPC1在α-synuclein过表达细胞死亡中发挥了重要作用;其次,研究发现α-synuclein稳转U251细胞中出现了明显的自噬水平增加和细胞凋亡的特征,表明α-synuclein通过作用于内质网钙泵以及细胞膜上的瞬时受体电位钙通道TRPC1,破坏了细胞内的钙稳态,进而影响自噬和凋亡,增加了U251细胞对于过氧化氢的敏感性,这可能是导致多系统萎缩病人脑内胶质细胞死亡的原因.

beclin 1在辐射诱导的乳腺癌细胞自噬发生中表达的变化

目的研究不同剂量X射线诱导乳腺癌细胞株MCF-7自噬发生过程中beclin1表达的变化和作用。方法采用实时荧光定量PCR方法检测自噬相关基因MAP1LC3B表达，RT—PCR方法检测beclin1基因变化，X射线Western blot方法检测beclin 1蛋白表达。结果MAP1LC3B mRNA量效研究表明，8、16和32h量效研究均发现表达上调，8、16h在12Gy，32h在8Gy达到表达峰值，总体表现为表达升高（F=13．831、10．996、17．019，P〈0．05）；时程研究表明，2Gy时程研究发现MAP1LC3B于16h升高达至峰值（F=16．284，P〈0．01），8Gy时程研究中32h升高达至峰值（F=9．030，P〈0．05），12Gy时程研究中16h升高达至峰值（F=20．315，P〈0．05）。beclin 1 mRNA量效关系表明，照射后4h beclin 1在2、4和8Gy阶段呈剂量依赖增加趋势；8Gy时间效应关系中发现照射后beclin 1 mRNA的变化呈时间依赖性增加。16h蛋白量效关系表明，照射后beclin 1表达增加；2Gy时效关系表明照射后蛋白表达增加。结论X射线照射能够诱导乳腺癌细胞株MCF-7发生自噬，beclin 1基因上调表达的变化提示其发挥重要作用。

微管相关蛋白LC3B-Ⅱ和自噬基因Beclin 1在星形细胞肿瘤中的表达及其意义

目的探讨微管相关蛋白1轻链3B（MAP1-LC3B）和自噬相关基因BeclinJ在星形细胞肿瘤中的表达及其与星形细胞肿瘤病理和临床表现的相关性及意义。方法选择上海长征医院神经外科2006年1月至2006年12月住院手术治疗的初发性星形细胞肿瘤患者62例，其中Ⅰ级（毛细胞性星形细胞瘤）4例，Ⅱ级（星形细胞瘤）23例，Ⅲ级（间变性星形细胞瘤）12例，Ⅳ级（胶母细胞瘤）23例。免疫组织化学染色检测肿瘤标本中Beclin 1的表达，免疫印迹法检测Beclin1和MAP1-LC3B的表达并统计Beclin 1、MAP1-LC3B的表达与星形细胞肿瘤临床病理表现的关系。结果免疫组化显示I～Ⅳ级星形细胞肿瘤中Beclin1的表达随肿瘤级别的升高而降低，差异有统计学意义（氏0．05）。免疫印迹检测结果显示不同病理分级、生存期患者Beclin 1的表达差异有统计学意义（P〈0．05），不同病理分级患者MAP1-LC3B．Ⅱ表达的差异有统计学意义（P〈0．05）；相关性分析显示MAP1-LC3B-Ⅱ、Beclin1在星形细胞肿瘤中的表达与病理分级呈负相关关系（r=0．334，p=0．007；r=-0．448，P=-0．000），MAPI—LC3B-Ⅱ、Beclin1在星形细胞肿瘤中的表达与生存时间呈正相关关系（r==0．285，P=0．027；r=0．359，P=-0．005）。MAP1-LC3B．Ⅱ和Beclin1的表达之间也呈正相关关系（r=0．272．P=0．035）。结论MAP1-LC3B．Ⅱ和Beclin1在胶母细胞瘤中的表达下调，自噬活性的改变可能与星形细胞肿瘤的发生、发展相关。

咪喹莫特抑制小鼠体表黑色素瘤生长和促使肿瘤特异性放疗增敏的实验研究

目的研究咪喹莫特联合外放疗对C57BL/6小鼠黑色素瘤模型肿瘤生长的影响,并判定咪喹莫特对肿瘤特异性放疗增敏的疗效。方法建立C57BL/6小鼠(n=20)的体表黑色素瘤模型,随机分为对照组、放疗组、咪喹莫特治疗组和放疗联合咪喹莫特治疗组。测量肿瘤生长体积,观察肿瘤生长延迟效应,并采用免疫组织化学检测和生存曲线评估咪喹莫特对肿瘤放疗增敏效果。结果放疗联合咪喹莫特治疗组肿瘤生长延迟最显著,其次治疗效果依次为咪喹莫特治疗组、放疗组和对照组。4组间两两比较,差异均有显著性意义(P<0.01)。C57BL/6小鼠黑色素瘤的组织病理学检测中,发现微管相关蛋白1轻链3B(MAP1LC3B)和α-平滑肌激动蛋白(α-SMA)在放疗联合咪喹莫特治疗组呈高表达。3种不同治疗组的MAP1LC3B和α-SMA表达与对照组间比较,差异均有显著性意义(P<0.05)。C57BL/6小鼠生存表证实,放疗联合咪喹莫特治疗组生存率明显优于其他治疗组和对照组,差异有显著性意义(P<0.05)。结论咪喹莫特联合外放疗对C57BL/6小鼠黑色素瘤生长有绝对延迟效应,咪喹莫特可为新的肿瘤特异性放疗增敏诱导剂。