牛副结核分枝杆菌(MAP)MAP3290-1595串联蛋白的原核表达及反应原性检测报告

原核表达纯化牛副结核分枝杆菌MAP3290-1595蛋白,为检测牛副结核分枝杆菌提供了新的材料。笔者通过基因串联融合MAP3290和MAP1595基因,获得MAP3290-1595基因,并使用DNAMAN软件对MAP3290-1595基因序列进行分析;构建重组质粒pET30aMAP3290-1595,将其转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,使用IPTG诱导目的蛋白表达;使用亲和层析法对目的蛋白进行亲和纯化,从而获得MAP3290-1595蛋白;利用Western Blot方法对该蛋白进行质检。成功表达纯化出MAP3290-1595蛋白。该蛋白大小为43 k Da,浓度为0.430 mg/mL,纯度大于90%。本试验成功获得MAP3290-1595蛋白,利用Western Blot和间接ELISA法检测该蛋白的反应原性,与牛副结核阴性血清反应良好,得出该蛋白具有良好的反应原性,为建立牛副结核分支杆菌检测方法提供材料。