黄芪甲苷对肥胖型多囊卵巢综合征大鼠胰岛素抵抗及MAPK/ERK通路的影响

目的研究黄芪甲苷对肥胖型多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠胰岛素抵抗(IR)的改善作用,并分析对其卵巢MAPK/ERK通路的影响。方法来曲唑联合高脂高糖饮食法构建肥胖PCOS大鼠模型,随机分为模型组、二甲双胍(135 mg/kg)组和低、高剂量黄芪甲苷(25、50 mg/kg)组,每组8只,另设对照组,连续灌胃给药21 d后,记录体质量,计算卵巢指数,测定空腹血糖(FBG)、血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、促卵泡激素(FSH)、睾酮(T)、雌二醇(E_(2))、促黄体生成素(LH)及空腹胰岛素(FINS)水平,计算HOMA-IR和LH/FSH值,HE染色观察卵巢组织形态,Western blot法检测卵巢组织MAPK/ERK通路相关蛋白表达,免疫荧光法检测卵巢组织血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠卵巢形态呈多囊样病态改变,体质量、卵巢指数、血清TG、TC、LH、FSH、T、FINS、FBG水平、LH/FSH和HOMA-IR值、卵巢组织p-ERK1/2/ERK1/2、p-MEK1/2/MEK1/2、p-Raf/Raf、VEGF蛋白表达升高(P<0.01),血清E_(2)水平降低(P<0.01);与模型组比较,黄芪甲苷各剂量组和二甲双胍组大鼠卵巢多囊样病变明显缓解,体质量、卵巢指数、血清TG、TC、LH、FSH、T、FINS、FBG水平、LH/FSH和HOMA-IR值、卵巢组织p-ERK1/2/ERK1/2、p-MEK1/2/MEK1/2、p-Raf/Raf、VEGF蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),血清E_(2)水平升高(P<0.05,P<0.01)。结论黄芪甲苷可拮抗肥胖PCOS大鼠IR,改善激素水平,减轻其卵巢病变,该作用可能与抑制MAPK/ERK通路活化有关。

基于MAPK/ERK通路探讨益肾调经丸对大鼠多囊卵巢综合征的作用和机制研究

目的:探讨益肾调经丸对大鼠多囊卵巢综合征模型的作用及其机制。方法:70只雌性SD大鼠随机分为正常组、模型组、空白对照组、达英35组和益肾调经丸低、中、高剂量组,每组10只。采用来曲唑+高脂饲料造模,造模成功后,各治疗组和空白对照组使用相应剂量的药物灌胃28 d。ELISA法检测血清睾酮(T)、促卵泡素(FSH)、促黄体生成素(LH)水平,计算LH/FSH;观察卵巢形态改变;HE染色法观察卵巢镜下观;Real-time PCR法检测卵巢组织中CYP17A1、CYP19A1 mRNA表达;Western blot检测p-ERK1/2的蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠卵巢可见多囊样改变,血清T、LH水平升高,FSH降低,LH/FSH升高,卵巢呈多囊样改变,卵巢组织中CYP17A1 mRNA表达升高,CYP19A1 mRNA表达降低,p-ERK1/2蛋白表达升高(P<0.05);与模型组对比,空白对照组各检测指标无明显变化,各给药组大鼠卵巢多囊样改变缓解,血清T、LH水平降低,FSH升高(P<0.05),卵巢多囊样改变减轻,卵巢组织中CYP17A1 mRNA表达降低,CYP19A1 mRNA表达升高(P<0.05),治疗组p-ERK1/2蛋白表达水平有不同程度改善,其中益肾调经丸各治疗组的改善比较差异有统计学意义(P<0.05),达英35组的变化比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:益肾调经丸能够改善PCOS大鼠性激素水平,减轻卵巢多囊样改变。益肾调经丸可能是通过MAPK/ERK信号通路降低CYP17A1、上调CYP19A1表达,降低雄激素水平,从而改善PCOS大鼠卵巢多囊样改变及高雄激素状态。

益肺宣肺降浊方通过EGFR调节PI3K/Akt-MAPK/Erk通路改善血管性痴呆大鼠的记忆

目的 探讨益肺宣肺降浊方通过表皮生长因子受体(Objective Epidermal growth factor receptor, EGFR)调节PI3K/Akt-MAPK/Erk通路改善对血管性痴呆(VaD)的作用及机制。方法 建立大脑中动脉栓塞法(Middle Cerebral Artery Occlusion, MCAO)大鼠血管性痴呆模型;给予益肺宣肺降浊方联合PTEN、EGFR和MAPK抑制剂,进行行为学实验,并运用Western Blot、免疫荧光、电镜透射等技术检测益肺宣肺降浊方对VaD可能通过PI3K/Akt和MAPK/Erk信号通路作用机制进行探索。结果 益肺宣肺降浊方呈剂量依赖性改善VaD大鼠的记忆能力及脑海马组织的病理、降低神经元凋亡。上调EGFR激活PI3K/Akt信号通路与MAPK/Erk信号通活性。结论 益肺宣肺降浊方对VaD大鼠的作用可能通过VEGF受体EGFR调节PI3K/Akt信号通路与MAPK/Erk信号通活性,以及PI3K/Akt与raf1-MAPK/Erk的串扰作用,增强Erk1/2磷酸化,进而促进神经细胞存活、神经元形态,最终达到修复记忆能力,治疗血管性痴呆的作用。

MAPK/ERK通路及泛素连接酶c-Cbl调控埃克替尼抑制肺癌HCC827细胞增殖和诱导细胞凋亡的研究

目的:研究MAPK/ERK通路及泛素连接酶c-Cbl调控埃克替尼抑制HCC827细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用机制。方法:采用MTT法检测HCC827对埃克替尼的敏感性,Annexin V-PI流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测相关蛋白表达,SPSS 18.0进行统计学分析。结果:埃克替尼处理HCC827细胞24h的IC50为155.6μmol/L。埃克替尼诱导HCC827细胞早期凋亡并具有剂量依赖性。Western blot结果显示埃克替尼可诱导p-EGFR和p-ERK下调并引起c-Cbl下调。结论:埃克替尼能够明显抑制HCC827细胞增殖,诱导细胞早期凋亡。其机制可能与c-Cbl参与的p-EGFR和p-ERK蛋白表达水平下调,从而抑制细胞增殖通路活化有关。

miR-431-5p通过MAPK/ERK通路促进食管鳞癌细胞增殖和迁移

为了检测miR-431-5p在食管鳞癌(Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)中的表达,探讨其功能,利用TCGA公共数据库分析miR-431-5p在食管癌中的表达,通过RT-qPCR检测miR-431-5p在组织和细胞中表达;再利用miR-431-5p模拟物和抑制剂,通过CCK-8实验、细胞划痕和Transwell实验以及蛋白免疫印迹实验,检测miR-431-5p对ESCC细胞增殖、侵袭和迁移的影响以及分子作用机制。结果显示:miR-431-5p在食管癌中高表达;转染miR-431-5p模拟物后,KYSE30细胞增殖率、迁移率和侵袭率分别增加了24.19%,30.86%和50.29%(P<0.05);而转染miR-431-5p抑制剂后,TE-11细胞数量、迁移率分别降低了21.43%和9.52%(P<0.05);miR-431-5p模拟物增加KYSE30细胞p-ERK表达量11.68%;miR-431-5p抑制剂降低TE-11细胞p-ERK表达量45.73%。研究结果表明:miR-431-5p通过MAPK/ERK通路促进ESCC细胞的增殖、侵袭和迁移。该研究为开发食管鳞癌治疗的有效靶点提供实验依据。

丙型肝炎病毒核心蛋白通过MAPK/ERK通路调节c-Fos诱导致癌作用研究进展

丙型肝炎病毒核心蛋白是一种多功能结构蛋白,并且在丙型肝炎病毒致癌过程中具有重要作用。核心蛋白能够与MAPK/ERK通路中的多种相关蛋白或转录因子发生直接或间接的相互作用,从而增强c-Fos表达或激活其活性,最终促进肝细胞癌的发生。

柴朴汤对哮喘大鼠肺组织MAL/MAPK/ERK通路的影响

目的探讨柴朴汤是否通过调控T细胞成熟相关蛋白(MAL)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)通路对哮喘大鼠发挥治疗作用。方法健康SD大鼠40只,随机分为4组,哮喘组、柴朴汤组、使用柴朴汤+MAPK/ERK通路抑制剂(PD98059)(柴抑组)、对照组,每组10只。按照文献复制哮喘大鼠模型,使用柴朴汤及PD98059进行干预,采用RT-PCR检测肺组织中MAL m RNA的表达情况,免疫组织化学检测肺组织中MAL、p-ERK1/2、IL-4蛋白的表达。结果哮喘组MAL mRNA和蛋白表达水平最低,p-ERK1/2及IL-4的蛋白表达水平最高,与对照组比较,差异有统计学意义(P <0.05)。与哮喘组比较,柴朴汤组、柴抑组MAL mRNA和蛋白表达水平增高,p-ERK1/2及IL-4蛋白表达水平降低(P <0.05)。但柴朴汤组和柴抑组MAL mRNA和蛋白比较无差异(P>0.05),而柴抑组的p-ERK1/2及IL-4的蛋白表达低于柴朴汤组(P<0.05)。结论 (1) MAL/MAPK/ERK通路参与了哮喘病理发展过程。(2)柴朴汤可通过上调MAL的表达,抑制MAPK/ERK通路,减少炎症反应,进而延缓哮喘病变。

右美托咪定通过MAPK/ERK通路对癫痫大鼠学习记忆能力及神经细胞凋亡的影响

目的研究右美托咪定(Dex)通过MAPK/ERK通路对癫痫大鼠学习记忆能力及神经细胞凋亡的影响。方法24只SD大鼠按数字表法随机分为对照组、癫痫组、癫痫+Dex组,后2组采用戊四氮点燃的方法建立癫痫模型,癫痫+Dex组给予Dex腹腔注射干预,对照组和癫痫组腹腔注射等剂量0.9%氯化钠溶液。采用Morris水迷宫检测逃避潜伏期、穿越平台次数及平台现象游泳时间,采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测凋亡基因B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)的表达水平,采用免疫印迹法(Western blotting)检测磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)、p-p38、磷酸化C-Jun氨基末端激酶(p-JNK)的表达水平。结果与对照组比较,癫痫组大鼠的逃避潜伏期延长,平台现象游泳时间缩短,穿越平台次数及海马中Bcl-2、p-ERK的表达减少,海马中Bax、Caspase-3、p-p38、p-JNK的表达增加,差异有统计学意义(P<0.05);与癫痫组比较,癫痫+Dex组大鼠的逃避潜伏期缩短,平台现象游泳时间延长,穿越平台次数及海马中Bcl-2、p-ERK的表达增加,海马中Bax、Caspase-3的表达减少,差异有统计学意义(P<0.05),海马中p-p38、p-JNK的表达无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。结论Dex用于癫痫大鼠的干预能够改善学习记忆功能并抑制海马中细胞凋亡,激活MAPK/ERK通路是可能的分子机制。

利拉鲁肽通过PI3K/Akt和MAPK/ERK通路促进心肌微血管内皮细胞的增殖和迁移

目的研究胰高血糖素样肽-1类似物利拉鲁肽对原代大鼠心肌微血管内皮细胞（CMECs）增殖和迁移的影响及其机制。方法使用双酶消化法体外分离培养SD大鼠心肌微血管内皮细胞,差速贴壁法进行纯化,CD31和Ⅷ因子抗体进行免疫细胞化学染色鉴定。采用不同浓度利拉鲁肽（0~1000 nmol/L）干预1代细胞,MTT绘制细胞生长曲线,Western blot检测利拉鲁肽对PI3K/Akt和MAPK/ERK通路的激活作用,Brd U荧光标记法和划痕实验观察药物作用下细胞增殖和迁移能力,并使用相应的通路阻断剂LY294002和PD98059来进一步证实。结果体外分离原代CMECs,CD31及Ⅷ因子免疫荧光染色示双阳性率大于95%,MTT示细胞于种植48 h后进入对数生长期,利拉鲁肽以浓度依赖方式促进CMECs的体外增殖,100 nmol/L为其最适生长浓度（P〈0.05）。予以100 nmol/L利拉鲁肽预干预细胞24 h后,Western blot显示胞内Akt和ERK磷酸化水平与正常细胞组相比有明显升高（P〈0.05）,加入相应通路阻断剂LY294002和PD98059,其磷酸化水平相较于利拉鲁肽组明显降低（P〈0.05）。Brd U和划痕实验均说明利拉鲁肽能促进CMECs的增殖和迁移能力（P〈0.05）,使用LY294002和PD98059预处理后,增殖迁移能力均显著低于利拉鲁肽组（P〈0.05）。结论利拉鲁肽是通过激活胞内PI3K/Akt和MAPK/ERK通路从而促进原代大鼠心肌微血管内皮细胞的增殖和迁移。

姜黄素通过阻滞MAPK/ERK通路抑制人子宫内膜癌HEC-1-B细胞的侵袭转移

目的阐明MAPK/ERK信号传导途径在姜黄素抑制子宫内膜癌细胞侵袭转移中的作用及其机制。方法不同浓度(0,10,20和30μmol/L)姜黄素干预HEC-1B细胞后,用Western blot检测细胞中ERK1/2、p-ERK1/2、MEK1、p-MEK1及上皮间质转化(epithelial-mesenehymal transition,EMT)相关蛋白(E-cadhrein、Vimentin、Twist和Snail)的表达;利用pc DNA3.1(+)-MEK1表达载体和pc DNA3.1(+)空载体稳定转染细胞后过表达MEK1;利用Transwell侵袭实验检测姜黄素及ERK抑制剂U0126对HEC-1-B细胞的侵袭能力的效应;利用real-time PCR法检测姜黄素对EMT相关分子(CDH1、CDH2、FN1、Snail 1、Twist 1、Vimentin、ZEB1和ZEB2)的mRNA水平的影响。结果与空白对照组相比,姜黄素(≥20μmol/L)能够显著抑制HEC-1-B细胞中ERK1/2的活化,且呈浓度依赖性(P<0.01)。外源性过表达MEK1可以削弱姜黄素对HEC-1-B细胞的抗侵袭作用。单独使用U0126或姜黄素均可显著降低HEC-1-B细胞侵袭力(P<0.01或P<0.05)。此外,联合使用U1026能够增强姜黄素的侵袭抑制作用。进一步的Western blot和real-time PCR结果表明,姜黄素通过阻滞ERK信号转导通路,抑制EMT的发生。结论姜黄素通过阻滞MAPK/ERK信号转导通路抑制子宫内膜癌细胞的侵袭转移,这将为临床肿瘤转移和复发的治疗提供理论依据。

MAPK/ERK通路相关蛋白在肺癌组织中的表达及其与肺叶切除术患者预后关系

目的MAPK/ERK通路相关蛋白在肺癌组织中的表达及其在肺叶切除术肺癌患者预后评估中的作用鲜有报道。文章旨在分析MAPK/ERK通路相关蛋白细胞外信息调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)蛋白及其磷酸化(p-ERK1/2)蛋白在肺癌组织中的表达情况,并探讨其与肺叶切除术患者临床预后的关系。方法回顾性收集2014年1月至2016年10月于武汉市第三医院胸外科行全胸腔镜肺叶切除术治疗的62例肺癌患者的肺癌组织标本及同一患者距癌变组织>5 cm的癌旁组织标本各62份。采用免疫组化法检测患者肺癌组织及癌旁组织中ERK1/2、p-ERK1/2表达阳性率,采用χ^(2)检验分析肺癌组织中ERK1/2、p-ERK1/2与患者临床病理特征的关系。随访至2021年10月,共57例患者获得随访。采用Kaplan-Meier生存分析法分析ERK1/2、p-ERK1/2表达与患者预后的关系,并拟合Cox模型评价不同指标与患者预后的关系。结果ERK1/2、p-ERK1/2在肺癌组织中主要定位于肿瘤细胞的细胞膜和细胞浆中,阳性肿瘤细胞弥漫分布;ERK1/2在癌旁正常组织中表达较少,p-ERK1/2在癌旁正常组织中呈阴性表达。肺癌组织中ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达阳性率均高于癌旁组织(P<0.05)。ERK1/2在不同分化程度、淋巴结有无转移患者中表达阳性率差异有统计学意义(P<0.05);p-ERK1/2在不同分化程度、临床病理分期、淋巴结有无转移患者中表达阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线及log-rank分析显示,ERK1/2、p-ERK1/2表达阳性患者与其表达阴性患者术后累积生存率比较,差异有统计学意义(P=0.021、0.018)。多因素Cox比例风险模型显示,肿瘤分化程度低[HR:1.887(1.149~2.684)]、淋巴结转移[HR:2.348(1.109~3.527)]、p-ERK1/2表达阳性[HR:3.258(1.236~5.148)]是影响肺癌患者预后的风险因素(P<0.05)。结论MAPK/ERK通路相关蛋白ERK1/2、p-ERK1/2在肺癌组织中呈现高表达,其中p-ERK1/2表达与肺癌患者预后关系密切,可作为评判肺癌患者预后的重要指标。

MAPK/ERK通路基因遗传变异和膝关节骨性关节炎遗传易感性的关联研究

目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节蛋白激酶(MAPK/ERK)通路基因遗传变异与中国汉族人群膝关节骨性关节炎(knee osteoarthritis,KOA)发病风险的相关性。方法:采用病例对照研究设计,纳入278例膝关节骨性关节炎和年龄、性别匹配的289例健康对照,应用Regulome DB数据库筛选MAPK/ERK通路4个基因(MEK1/2和ERK1/2)的潜在功能位点,使用Sequenom Mass ARRAY平台对得到的5个位点进行基因分型。随后使用单因素和多因素Logistic回归模型分析遗传变异与骨性关节炎之间的关联及其强度。结果:单因素分析结果显示,丝裂原活化蛋白激酶激酶2(mitogen-activated protein kinase kinase 2,MEK2)基因的多态性位点rs350911与KOA发病风险在隐性模型(TT vs.TC+CC)中具有统计学关联(OR=2.62,95%CI:1.70~4.02,P<0.01)。基于多因素模型调整年龄、性别、体重指数(body mass index,BMI)等因素后,rs350911仍与KOA发病风险相关联(OR=2.72,95%CI:1.75~4.22,P<0.01)。分层分析显示MEK2的rs350911等位基因效应在男性,BMI<25 kg/m2,低K-L分级(1-2级)组中显著关联(P<0.05),且在性别分层时异质性检验有统计学意义(P=0.01),提示该位点对KOA的作用存在性别差异,与性别存在基因环境交互作用。结论:MEK2 rs350911与中国汉族人群膝关节骨性关节炎发病风险增加有关,有望为膝关节骨性关节炎的诊断和治疗提供新靶点。

下调CRNDE基因表达对MAPK/ERK通路中相关基因的影响

目的 探讨下调LncRNA CRNDE基因表达对MAPK/ERK通路及转录因子中相关基因的影响。方法 将CRNDE基因干扰siRNA 转染人胶质瘤 U251细胞系,并同时设置空白组及对照组,利用实时PCR检测细胞系中MAPK/ERK通路及转录因子中相关基因表达量的变化。结果 与空白组及对照组相比,转染组(si783、si809)中相关基因NF-κB、MEK2、ERK1、ERK2、c-Myc、Raf-1表达量均明显下降(均P <0.05),具有统计学意义。结论 CRNDE可能通过调节MAPK/ERK通路中及转录因子中一系列相关基因表达,增加胶质瘤细胞的增殖和迁移能力,同时抑制细胞凋亡。

MAPK/ERK通路影响人胃癌细胞对奥沙利铂敏感性的机制研究

目的:探讨MAPK/ERK通路对人胃癌细胞奥沙利铂敏感性的影响,并进一步探讨其机制。方法:采用MTT法测定奥沙利铂对人胃癌BGC823和SGC7901细胞的增殖抑制影响;MAPK/ERK特异性抑制剂PD98059预处理上述两种细胞后,测定奥沙利铂的药物敏感性。Western blot方法检测胃癌细胞中p-ERK、ERK及谷胱甘肽-S-转移酶π(glutathione S-transferasesπ,GST-π)蛋白表达。应用SPSS 13.0软件包进行统计学分析。结果:1mg/L-100mg/L奥沙利铂分别作用BGC823和SGC7901细胞,48h的IC50分别为24.26mg/L和18.44 mg/L;20μmol/L的PD98059预处理BGC823和SGC7901细胞,再加入奥沙利铂继续培养48h,IC50分别降至12.42mg/L和7.97mg/L,表明对奥沙利铂的敏感性显著提高。进一步检测发现PD98059处理BGC823和SGC7901细胞24h后,p-ERK蛋白表达明显下调,GST-π蛋白亦显著下调。结论:PD98059通过抑制MAPK/ERK通路,下调GST-π蛋白表达,显著提高人胃癌细胞对奥沙利铂的药物敏感性。

基于MAPK/ERK通路探讨清热化瘀汤对子宫内膜异位症的作用机制

目的:观察清热化瘀汤治疗子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)的疗效及其对原激活蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)/细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)通路的影响。方法:选择EMs患者122例,根据随机数字法分为观察组和对照组,每组61例。对照组予以米非司酮治疗,观察组在对照组治疗的基础上予以清热化瘀汤治疗。比较两组临床疗效,中医证候、痛经、月经量评分,盆腔包块体积,子宫血流动力学[搏动指数(pulsatility index,PI),阻力指数(resistance index,RI),收缩末期最大血流速度(systole,S)/舒张期对最大血流速度(diastolic phase,D)],促卵泡成熟激素(follicle-stimulating hormone,FSH)、黄体生成激素(luteinizing hormone,LH)、雌二醇(estradiol,E2)和孕酮(progesterone,P)、MAPK,ERK及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)水平的变化。结果:观察组总有效率为93.44%(57/61),明显高于对照组[78.69%(48/61)](P<0.05)。治疗后两组中医证候、痛经、月经量评分,盆腔包块体积,PI、RI、S/D、FSH、LH、E2、P、MAPK、ERK和VEGF水平均较治疗前明显降低(P<0.05),而观察组降低幅度较对照组更为明显(P<0.05)。结论:清热化瘀汤治疗EMs疗效显著,可缓解痛经症状,改善子宫血液循环,纠正激素紊乱,其机理与抑制MAPK/ERK通路的活性有关。

基于PI3K/AKT和MAPK/ERK通路探讨左归丸治疗多囊卵巢综合征机制的实验研究

目的探讨左归丸作用于PI3K/AKT和MAPK/ERK通路防治多囊卵巢综合征的具体环节及可能相关机制。方法未成年21日龄健康SD大鼠50只,随机选取10只为正常对照组;造模成功后随机分为PCOS组、左归丸组、达英35组,每组10只。采用放免法检测空腹葡萄糖(FBG)和胰岛素(FINS),计算稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),ELISA检测血清T、LH、FSH,HE染色观察模型组卵巢组织,免疫组化法检测AKT和p-ERK1的表达。结果模型组较正常对照组FINS、HOMA-IR明显升高,使用达英35组后,FINS显著降低,左归丸组较模型组FINS、HOMA-IR均明显降低,具有统计学意义(P <0.05)。与正常对照组相比,模型组LH、T、LH/FSH表达增多,E2表达减少(P <0.05),达英35、左归丸组LH、T、LH/FSH水平降低,FSH、E2水平升高(P <0.05)。结论左归丸可以通过上调卵巢局部组织中PI3K/AKT通路中相关重要因子的基因表达,抑制MAPK/ERK通路中相关重要因子的基因表达,改善多囊卵巢综合征大鼠的胰岛素抵抗和卵巢形态。

小檗碱通过P38MAPK/ERK通路抑制阴茎海绵体细胞凋亡以增强糖尿病大鼠勃起功能

目的 探讨小檗碱对糖尿病勃起功能障碍(DMED)大鼠影响及作用机制。方法 将60只SD大鼠随机分为正常组、DMEM组和小檗碱组,每组20只。除正常组外,其余各组以腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病大鼠模型,造模成功后,采用阿朴吗啡诱导阴茎勃起实验(APO)以筛选DMED大鼠模型。成模后,小檗碱组每日予以200 mg/kg的小檗碱进行灌胃,正常组和DMED组分别灌以等量生理盐水。给药4周后测定大鼠阴茎海绵体内压(ICP)和平均动脉压(MAP)以评估各组大鼠勃起功能;HE染色观察大鼠阴茎海绵体组织的病理变化;Masson染色检测阴茎海绵体组织的纤维化水平;Tunel染色检测阴茎海绵体组织细胞凋亡,Western blot检测海绵体组织中Bcl-2、Bax、Caspase-3以及p38MAPK/ERK通路相关蛋白p38MAPK(p38MAPK/p-p38MAPK)和ERK1/2(p-ERK1/2/ERK1/2)磷酸化水平。结果 与正常组比较,DMED组和小檗碱组最大ICP、MAP值和Bcl-2蛋白表达均显著降低(P<0.05),阴茎海绵体组织细胞凋亡指数、Bax、Caspase-3、p38MAPK/p-p38MAPK和p-ERK1/2/ERK1/2表达水平均显著升高(P<0.05);与DMED组相比,小檗碱组最大ICP、MAP值和Bcl-2蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);阴茎海绵体组织细胞凋亡指数、Bax、Caspase-3、38MAPK/p-p38MAP和p-ERK1/2/ERK1/2表达均显著下降(P<0.05)。结论 小檗碱能改善糖尿病大鼠阴茎海绵体纤维化并增强勃起功能,其机制可能是通过p38MAPK/ERK通路抑制阴茎海绵体细胞凋亡实现的。

基于MAPK/ERK通路研究芍药汤对溃疡性结肠炎黏膜损伤修复作用机制

[目的]探讨芍药汤通过有丝分裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(mitogen-activated protein kinase/extracellular signalregulated kinase,MAPK/ERK)通路对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)结肠黏膜损伤的修复作用和机制。[方法]经结肠缓慢推注5%三硝基苯磺酸(trinitrobenzene sulfonic acid,TNBS)0.09 mL+无水乙醇0.06 mL,复制大鼠UC模型,将48只无特定病原体(specific pathogen free,SPF)SD大鼠随机分为正常组,模型组,芍药汤高、中、低剂量组与美沙拉嗪组。各组灌胃干预,评价疾病活动指数(disease activity index,DAI),观察组织病理变化并进行组织学活动指数(histological activity index,HAI)评分;以实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,Real-time qPCR)及免疫印迹法检测结肠组织中屏障保护相关指标的mRNA及蛋白表达水平。建立脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)小肠上皮细胞IEC-6损伤模型,以噻唑蓝比色法(dimethylthiahiazo,MTT)筛选药物最佳干预浓度,将细胞分为空白组、LPS组和芍药汤组,划痕实验观察细胞迁移率;免疫印迹法检测细胞闭锁小带蛋白-1(zonula occludens-1,ZO-1)蛋白表达水平。[结果]体内实验显示,与正常组比较,模型组大鼠肠黏膜结构缺失,黏膜下层和固有层可见明显的炎性细胞浸润;DAI、HAI评分显著升高(P<0.01),紧密连接蛋白-2(claudin-2)、磷酸化p38MAPK(phosphorylatedp38MAPK,p-p38MAPK)、磷酸化ERK1/2(phosphorylated-ERK1/2,p-ERK1/2)蛋白表达显著下调(P<0.001,P<0.01,P<0.001);肠三叶因子(intestinal trefoil factor,ITF)的mRNA表达显著降低(P<0.05),缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)蛋白与mRNA表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,芍药汤各组病理损伤明显改善,DAI、HAI评分明显降低(P<0.05,P<0.01),芍药汤各组claudin-2、p-p38 MAPK、p-ERK1/2蛋白表达水平显著上调(P<0.05,P<0.01,P<0.001),ITF mRNA表达量显著上调(P<0.01);HIF-1α蛋白与mRNA表达水平显著下调(P<0.01)。体外实验显示,与空白组比较,LPS可明显抑制IEC-6细胞迁移(P<0.01),下调ZO-1蛋白表达(P<0.05)。与LPS组比较,芍药汤组细胞迁移率明显上升(P<0.05,P<0.01),ZO-1蛋白表达明显上调(P<0.05)。[结论]芍药汤对UC大鼠结肠黏膜损伤具有修复作用,其机制可能与激活MAPK/ERK通路,上调claudin-2、ZO-1,下调HIF-1α蛋白表达,促进肠黏膜上皮细胞迁移有关。

川黄连调控MAPK/ERK通路对口腔溃疡大鼠微循环及Th1/Th2细胞因子的作用

目的探究川黄连Coptis chinensis Franch.调控丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/胞外信号调节激酶(ERK)通路对口腔溃疡大鼠微循环及Th1/Th2细胞水平的作用。方法将大鼠随机分为对照组、模型组、西瓜霜(200 mg·kg^(-1))组和川黄连20、40、80 mg·kg^(-1)组,每组10只。除对照组外,采用40%冰醋酸灼烧法制备口腔溃疡模型,各给药组涂抹给药,每2天给药1次,连续给药7 d。比较各组大鼠口腔溃疡面积;腹主动脉取血检测微循环指标[微量毛细管法测定红细胞压积(HCT),试剂盒法检测血清纤维蛋白原(FIB)水平,椎板式黏度计测定血浆黏度];ELISA法检测血清中炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、IL-8和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平及血清中Th1/Th2细胞相关因子γ-干扰素(IFN-γ)、IL-10水平;HE染色观察溃疡黏膜组织病理学变化;Western blotting检测黏膜组织中ERK1/2、p-ERK1/2、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达。结果与模型组比较,川黄连20、40、80 mg·kg^(-1)组口腔溃疡面积均显著减少(P<0.05),黏膜上皮细胞溶解、炎症反应、组织坏死等病理学改变明显减轻;HCT、FIB、血浆黏度均显著降低(P<0.05);血清中炎症因子IL-6、IL-8、TNF-α水平均显著降低(P<0.05);血清中IFN-γ和IFN-γ/IL-10水平显著降低,IL-10水平明显升高(P<0.05);ERK1/2、p-ERK1/2、p38MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达均显著降低(P<0.05),且川黄连80 mg·kg^(-1)作用最明显。结论川黄连可改善口腔溃疡大鼠微循环,维持Th1/Th2细胞在体内平衡状态,其作用机制可能与抑制MAPK/ERK通路相关。

基于ERK/p38 MAPK信号通路探究解毒活血汤治疗Ⅲ型前列腺炎的作用机制

目的探究解毒活血汤调控ERK/p38 MAPK信号通路治疗Ⅲ型前列腺炎的作用机制。方法采用去势手术+苯甲酸雌二醇(EB)诱导慢性前列腺炎大鼠模型。36只SD大鼠随机分为空白组(生理盐水,4 mL·kg^(-1))、模型组(生理盐水,4 mL·kg^(-1))、阳性药物对照组(前列康片混悬液,4 mL·kg^(-1))、解毒活血汤低(4 mL·kg^(-1))、中(8mL·kg^(-1))、高剂量组(12 mL·kg^(-1)),每组6只,所有实验动物连续给药30 d。苏木精-伊红(HE)染色观察各组大鼠组织病理学变化;免疫组化法、RT-PCR、Western Blot技术检测相关炎症因子及蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,慢性前列腺炎大鼠前列腺组织增生及水肿明显、炎症浸润增加,而阳性药物对照组及解毒活血汤各剂量组大鼠前列腺组织病变减轻或消失、炎症浸润减少,且与解毒活血汤剂量成正比;免疫组化表示模型组p38、P-p38、STAT3、P-STAT3表达较高,阳性药物对照组、不同剂量解毒活血汤组的p38、P-p38、STAT3、P-STAT3表达呈下降趋势,且均低于模型组。RT-PCR结果显示阳性药物对照组及解毒活血汤低、中、高剂量组均能降低大鼠前列腺组织中TNF-α、IL-2、IL-6的表达水平;Western Blot检测提示大鼠疾病发生进展过程中p38、P-p38、P-ERK1/2、STAT3、P-STAT3呈高表达状态,解毒活血汤能够降低其表达,从而降低相关炎症因子的过度激活。结论解毒活血汤能够抑制ERK/p38 MAPK信号通路的过度激活,从而降低IL-2、IL-6、TNF-α等炎症因子的表达,以改善前列腺组织炎症反应。