丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)属于丝/苏氨酸蛋白激酶,有报道[1]其家族成员细胞外信号调节激酶(extracellular-signal regulated protein kinase,ERK)和p38MAPK定位于精子尾部中段,参与精子活动力的调节;17-β雌二醇可通过PI3K/Akt通路...丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)属于丝/苏氨酸蛋白激酶,有报道[1]其家族成员细胞外信号调节激酶(extracellular-signal regulated protein kinase,ERK)和p38MAPK定位于精子尾部中段,参与精子活动力的调节;17-β雌二醇可通过PI3K/Akt通路激活ERK,增加精子活动力,展开更多
目的:为了研究MAPK激活蛋白激酶2(MAPK-activated protein kinase 2,MK2)细胞内定位与其功能的关系,构建了MK2不同突变体的绿色荧光蛋白融合表达载体并观察这些突变体在细胞内的定位情况。方法:将克隆在绿色荧光蛋白载体pEGFP-C2上的野...目的:为了研究MAPK激活蛋白激酶2(MAPK-activated protein kinase 2,MK2)细胞内定位与其功能的关系,构建了MK2不同突变体的绿色荧光蛋白融合表达载体并观察这些突变体在细胞内的定位情况。方法:将克隆在绿色荧光蛋白载体pEGFP-C2上的野生型MK2(WT)通过定点突变技术构建其无活性突变体MK2(320A)和活性突变体MK2(320E),转染NIH3T3细胞,并在荧光显微镜下观察其细胞内定位情况。结果:各种MK2不同突变体经测序鉴定正确后,在NIH3T3细胞中得到高量表达。融合蛋白发出的绿色荧光表明,在静息状态下,MK2(WT)主要分布于细胞核内,MK2(320E)主要分布于细胞质内,而MK2(320A)在细胞核和细胞质中都有分布。在受到紫外线(UV)刺激后,MK2(WT)和MK2(320A)移位出核,而MK2(320E)的细胞内定位则没有发生明显的改变。结论:成功构建了绿色荧光蛋白标记的MK2不同突变体并在真核细胞中进行了表达,观察到不同突变体对MK2细胞内定位的影响。展开更多
文摘丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)属于丝/苏氨酸蛋白激酶,有报道[1]其家族成员细胞外信号调节激酶(extracellular-signal regulated protein kinase,ERK)和p38MAPK定位于精子尾部中段,参与精子活动力的调节;17-β雌二醇可通过PI3K/Akt通路激活ERK,增加精子活动力,
文摘目的:为了研究MAPK激活蛋白激酶2(MAPK-activated protein kinase 2,MK2)细胞内定位与其功能的关系,构建了MK2不同突变体的绿色荧光蛋白融合表达载体并观察这些突变体在细胞内的定位情况。方法:将克隆在绿色荧光蛋白载体pEGFP-C2上的野生型MK2(WT)通过定点突变技术构建其无活性突变体MK2(320A)和活性突变体MK2(320E),转染NIH3T3细胞,并在荧光显微镜下观察其细胞内定位情况。结果:各种MK2不同突变体经测序鉴定正确后,在NIH3T3细胞中得到高量表达。融合蛋白发出的绿色荧光表明,在静息状态下,MK2(WT)主要分布于细胞核内,MK2(320E)主要分布于细胞质内,而MK2(320A)在细胞核和细胞质中都有分布。在受到紫外线(UV)刺激后,MK2(WT)和MK2(320A)移位出核,而MK2(320E)的细胞内定位则没有发生明显的改变。结论:成功构建了绿色荧光蛋白标记的MK2不同突变体并在真核细胞中进行了表达,观察到不同突变体对MK2细胞内定位的影响。