丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的研究进展

丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK)信号通路是广泛存在于各种细胞中的一条信号转导途径 ,由一组级联活化的丝 苏氨酸蛋白激酶组成 ,对于细胞周期的运行和基因表达具有重要调控作用。MAPK包括多个成员 ,活化后向核内迁移 ,磷酸化包括转录因子在内的核蛋白和膜受体 ,实现对基因转录和其他事件的调节。MAPK激酶 (MAPKK)是MAPK的上游激活分子 ,催化MAPK的Tyr和Thr残基双特异性磷酸化。Mos是脊椎动物生殖细胞中特有的MAPKKK ,通过MAPKK MAPK途径活化成熟促进因子 ,启动卵母细胞成熟发育并维持中期阻滞。MAPK的下游分子包括MAPK活化的蛋白激酶 (MAPKAPK)、核转录因子、热休克蛋白和细胞质磷脂酶A2 等 。

磷酸化的蛋白激酶p44/42MAPK在成年大鼠脑内的分布

目的 研究活化形式的 p44 / 42 MAPK在成年正常大鼠脑内的分布。 方法 免疫组织化学方法(ABC法 )。 结果 磷酸化的 p44 / 42 MAPK在正常大鼠脑内有广泛的表达 ,出现在许多核团 ,特别是在岛皮质、感觉运动及视、听皮质、扣带前皮质、海马尾侧的内嗅区、内侧杏仁核、皮质杏仁核和中介核、视上核、视交叉上核、A14区、下丘脑室旁核大细胞部、弓状核、前腹侧视前核、下丘脑后区、顶盖前区、室周灰质腹外侧柱、蓝斑、臂旁外侧核、小脑 Purkinje细胞、A5区、旁巨细胞外侧核、吻侧 (C1区 )和尾侧 (A1区 )延髓腹外侧网状结构等。阳性结构主要见于神经元的胞浆、胞核和突起内 ,在部分脑膜细胞和少突胶质细胞内也有表达。 结论 活化的 p44 / 42 MAPK在脑内的广泛存在提示其作为重要的信号转导分子在正常状态下的脑功能活动中可能起重要作用。

小麦TaMAPK2激酶基因的原核表达及多克隆抗体制备

MAPK蛋白激酶是一类重要的植物胁迫信号调控因子。为了研究小麦MAPK基因的功能,本试验克隆了小麦MAPK蛋白激酶基因TaMAPK2。为了制备TaMAPK2基因的多克隆抗体,TaMAPK2的非保守区段的DNA序列anti-MAPK2被构建到原核表达载体pET-28a-(+)上,表达融合蛋白His-antiMAPK2。在终浓度为1mmol/L IPTG诱导1h的条件下,融合蛋白His-antiMAPK2表达量达到最大。通过蛋白标记亲和层析柱(HisTrapTMHP)得到纯化的His-antiMAPK2融合蛋白。利用新西兰大白兔制备了TaMAPK2基因的多克隆抗体,ELISA竞争抑制法检测抗体效价检测,效价为1:80000,能满足后续试验要求的效价值,为进一步分析TaMAPK2的蛋白定位、表达等提供基础。

高氧对幼鼠肺组织细胞凋亡及p38 MAPK丝裂原活化蛋白激酶的影响

目的探讨高氧对幼鼠肺组织细胞凋亡及p38 MAPK丝裂原活化蛋白激酶表达的影响。方法幼年Wistar大鼠90%氧气暴露建立高氧肺损伤模型,行肺组织病理学检查,应用TUNEL法检测肺组织的细胞凋亡,Western blot法检测p38 MAPK表达。结果高氧暴露3d可见肺组织水肿、出血、炎症细胞浸润等急性肺损伤改变。高氧3d组的肺凋亡指数较空气对照组明显增加,凋亡发生的主要部位为肺泡、支气管上皮及血管内皮细胞。Western blot结果显示高氧暴露1d,肺组织的p38MAPK活性迅速升高,于第2天达到高峰,第3天活性有所下降,但仍高于空气对照组。结论高氧暴露可以诱导肺组织发生细胞凋亡;高氧可以激活p38MAPK通路,参与高氧性肺损伤的调控;活化的p38MAPK可能参与了高氧诱导的肺组织细胞凋亡的调控。

促分裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号传导通路的研究进展

MAPK信号传导通路在真核生物细胞的生长和分化、细胞周期调节和细胞凋亡过程中发挥着重要的作用。生物化学研究和分子生物学鉴定表明:在酵母和哺乳动物细胞中MAPK信号传导通路都有一个保守的三组分激活模件,该模件内的激酶引发了一系列的磷酸化级联反应。了解MAPK信号传导通路的组成成分、调控方式和作用机制,有助于对因信号传导通路的调节失控而引起的疾病进行预防和治疗。

肺缺血再灌注损伤时丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)活性的变化及意义

目的探讨肺缺血再灌注损伤时丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)活性的变化规律及意义。方法取健康Sprague-Dawley大鼠建立在体肺缺血再灌注模型,左肺门夹闭30min,复灌0、10、30、60、90、120min,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织中3种丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs):ERK(extracellular signal regulated protein kinase,ERK1/2)J、NK(c-Jun NH2-terminal protein kinase,JNK)和p38 MAPK在假手术对照(Sham)组、缺血30min和缺血后再灌注不同时间点的活性变化。结果与假手术对照组相比,ERK、JNK的活性随缺血和再灌注时间的延长而逐渐升高直到复灌120min。p38的活性只在缺血及缺血早期激活而在复灌30min后活性恢复至假手术对照组水平。缺血/再灌注各时点组间ERK、P38、JNK蛋白水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论3种丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)在肺缺血再灌介导细胞凋亡中发挥不同的作用。

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂对人精子活动力的影响

丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）属于丝/苏氨酸蛋白激酶,有报道[1]其家族成员细胞外信号调节激酶（extracellular-signal regulated protein kinase,ERK）和p38MAPK定位于精子尾部中段,参与精子活动力的调节;17-β雌二醇可通过PI3K/Akt通路激活ERK,增加精子活动力,

p38蛋白激酶(p38 MAPK)在癫大鼠脑内的表达

目的观察p38蛋白激酶(p38mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)在癫大鼠脑内的表达情况。方法健康雄性SD大鼠随机分成正常对照组(n=8)和癫组(n=8)。采用戊四氮腹腔注射建立癫模型,大鼠点燃后的惊厥行为按照Racine的标准进行观察评分,采用Western blot和免疫荧光法比较两组大鼠脑内p38MAPK的表达情况。结果癫组大鼠脑内p38MAPK在皮层和海马的表达均显著高于正常对照组(P<0.01)。结论 p38MAPK在癫大鼠脑内表达上调。

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在动脉粥样硬化中的意义

动脉粥样硬化是多种心脑血管疾病共同的主要病理基础,严重危害人类的健康。尽管目前AS的发病机制尚不完全清楚,但一般认为其发病的机制与氧化应激、炎性反应、剪切力、高糖等相关,其中炎性反应和氧化应激在AS病变进展中是两个重要的因素。研究表明,MAPKs信号转导通路在细胞内具有生物进化的高度保守性,

磷酸化的MAPK作用激酶1表达与鼻咽癌发生发展及预后的关系

目的探讨磷酸化的MAPK作用激酶1(pMnK1)表达与鼻咽癌病人发生发展及预后的关系。方法选取2015年1月至2017年7月南阳市中心医院收集的90例鼻咽癌病理学标本、90例经病理学检查证实鼻部慢性炎症的鼻黏膜组织(对照组),应用免疫组化染色分析检测pMnk1蛋白表达,并按照年龄、性别、组织学类型、临床分期、淋巴结转移情况进行分组分析,分析pMnk1蛋白阳性与阴性表达的鼻咽癌病人2年生存率及预后。结果鼻咽癌组的pMnK1蛋白阳性率74.44%高于对照组的26.67%,差异有统计学意义(P<0.05);不同TNM分期、淋巴结转移的鼻咽癌组的pMnK1蛋白阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05);经2年随访,pMnK1蛋白阳性的鼻咽癌病人失访4例、阴性病人失访1例,pMnK1蛋白阳性的鼻咽癌病人2年生存率61.90%与阴性病人的77.27%,差异无统计学意义(P>0.05);pMnK1蛋白阳性的鼻咽癌病人的生存时间20.0个月短于阴性组23.0个月,差异有统计学意义[Log-rank(Mantel-Cox)=3.285,P<0.05]。结论鼻咽癌组织中pMnK1蛋白呈高表达,并且与肿瘤的发生发展及不良预后关系密切。

未知酪氨酸激酶对骨髓瘤细胞中 IL- 6诱导 Ras/MAPK/NF- IL- 6途径活化的调节作用(英文)

目的研究两条主要的 IL- 6信号转导途径—— JAK/STAT和 Ras/MAPK/NF- IL- 6在人骨髓瘤细胞系 KM-3中的诱导活化情况和调控机制。方法首先分别采用凝胶阻滞电泳 (EMSA)和免疫沉淀 (IP)方法检测参与 IL- 6信号转导功能的转录因子 (STAT3、NF- IL- 6 )和蛋白激酶 (JAK1、MAPK)在 KM- 3细胞中的诱导活化情况。然后采用特异性酪氨酸蛋白激酶抑制剂 Genistein作用于 KM- 3细胞 ,观察酪氨酸磷酸化作用对 KM- 3细胞中 IL- 6信号转导功能的影响。结果 IL- 6刺激后 ,KM- 3细胞中只出现了 Ras/MAPK/NF- IL- 6信号转导途径的诱导激活 ,而 JAK/STAT途径则不参与 IL- 6在 KM- 3细胞中的信号转导功能。Genistein的作用可明显抑制 Ras/MAPK/NF- IL- 6途径的活化。结论一种目前尚无法确定的非 JAK1酪氨酸蛋白激酶可参与并调节 Ras/MAPK/NF- IL- 6信号转导途径在 KM- 3细胞中的诱导活化。

MAPK通路主要激酶抑制剂对亚洲带绦虫感染乳猪肝细胞生长抑制率和凋亡率的影响

目的了解MAPK特异性抑制剂干预后亚洲带绦虫感染乳猪肝细胞MAPK信号通路相关基因表达、细胞活力和细胞凋亡的变化。方法采集亚洲带绦虫成虫标本并收集虫卵制作悬液。将乳猪随机分为感染组、三种抑制剂干预组和正常对照组,感染组和抑制剂干预组均以定量虫卵15万个/头灌胃感染,灌胃后将抑制剂干预组乳猪分别腹腔注射U0126、SB203580和SP600125 1 mg/kg,隔天1次,连续7次。感染后第15 d麻醉处死各组乳猪获取肝脏。采用cck-8法和流式细胞仪分别检测肝细胞生长抑制率和肝细胞凋亡率,并用RT-PCR技术检测肝细胞ERK1、p38和JNK1基因mRNA的相对表达量。结果感染组和U0126、SB203580、SP600125干预组肝细胞生长抑制率分别为(23.1±1.26)%、(12.59±1.2)%、(16.48±0.7)%、(18.3±0.75)%,U0126组与感染组相比(t=9.223,P<0.05)、SB203580组与感染组相比为(t=11.532,P<0.05)、SP600125组与感染组相比(t=6.775,P<0.05),各干预组均较感染组的生长抑制率明显降低。与感染组相比,U0126干预组的肝细胞凋亡率与感染组相比增高(t=-5.934,P<0.001),SB203580干预组与感染组相比则降低(t=3.821,P<0.01),SP600125干预组与感染组相比(t=-1.545,P>0.05)无显著性差异。与感染组相比,U0126干预组(t=3.462,P<0.05)ERK1 mRNA表达量下调;SB203580干预组(t=3.267,P<0.05)p38 mRNA表达量下调;SP600125干预组(t=3.363,P<0.001)JNK1 mRNA的表达量下调。结论亚洲带绦虫感染乳猪后,MAPK特异性抑制剂可以通过影响乳猪肝细胞MAPK相关基因的mRNA水平减轻肝细胞的生长抑制和凋亡。

有丝分裂原激动蛋白激酶(MAPK)信号级联与肾脏疾病

有丝分裂原活化蛋白激酶 (mitogen activatedproteinkinase ,MAPK)是一种胞浆内广泛分布的含有丝氨酸 苏氨酸残基的蛋白质激酶 ,它通过转录因子磷酸化而改变基因的表达水平 ,参与多种胞内信息传递过程。

香鱼(Plecoglossus altivelis)脾脏酪氨酸激酶SYK的鉴定及其介导的MAPK信号通路研究

脾脏酪氨酸激酶(SYK)是一种非受体型酪氨酸激酶(non-receptor tyrosine kinase,NRTK)。在哺乳动物中,SYK是重要的细胞信号通路接头分子,其在免疫细胞活化,胞外刺激的信号转导和病原体识别等多种生命过程中扮演重要角色,然而在鱼类中却鲜有报道。本研究以香鱼(Plecoglossus altivelis)为研究对象,探讨了其SYK(PaSYK)在应对病原微生物感染及在活化免疫信号通路中的作用。我们克隆获得了香鱼SYK的cDNA序列,并利用多重序列比对、构建进化树等生物信息学方法分析PaSYK的进化地位;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法分析PaSYK在健康组织及鳗弧菌(Vibrio anguillarum)感染后的表达变化;亚细胞定位检测PaSYK在HEK293T细胞的分布情况;在香鱼头肾单核/巨噬细胞(Monocyte/macrophage,MO/MΦ)中过表达PaSYK,研究其对炎症细胞因子表达的调控作用并在HEK293T细胞及香鱼头肾MO/MΦ中研究PaSYK对MAPK信号通路的活化作用。多重序列比对结果显示,SYK的蛋白质序列和结构域在进化过程中是高度保守的。系统进化树结果表明,PaSYK与河鳟的亲缘关系密切。RT-qPCR结果表明,SYK基因mRNA在检测的所有组织中均有表达,鳗弧菌感染后免疫相关组织中PaSYK表达量均上调。此外,PaSYK能显著诱导香鱼头肾MO/MΦ中促炎因子TNF-α和IL-1β的表达,但对抑炎因子TGF-β和IL-10的表达起到略微的抑制作用。Western blot结果证明PaSYK可以激活MAPK信号通路。综上所述,SYK分子在进化上高度保守,香鱼SYK与其哺乳动物中的同源物具有保守的功能,均能活化MAPK信号通路并在炎症反应中发挥作用。

丙酮酸通过抑制p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)磷酸化减轻低氧对PC12细胞的损伤

目的观察丙酮酸对低氧诱导神经细胞损伤的保护作用及机制。方法采用丙酮酸处理PC12细胞,10 m L/L O2的低氧环境暴露12、24、48 h。MTT法观察细胞增殖情况,检测胱天蛋白酶3(caspase-3)活性观察细胞凋亡情况,ELISA检测白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平,Western blot法检测p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)、磷酸化的p38MAPK(p-p38MAPK)蛋白水平。结果低氧暴露24、48 h,抑制PC12细胞增殖,caspase-3活性增强,IL-1β、IL-6、TNF-α和p-p38MAPK水平增高;丙酮酸处理可显著增加PC12细胞增殖,减少细胞凋亡,降低IL-1β、IL-6、TNF-α水平,抑制p38MAPK的磷酸化水平。结论丙酮酸通过抑制p38MAPK的磷酸化而抑制低氧暴露引起PC12细胞炎症因子的表达,对低氧暴露导致的神经元损伤起保护作用。

MAPK在植物响应逆境胁迫中的作用

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)是一类高度保守的丝氨酸/苏氨酸(Ser/Thr)蛋白激酶,广泛存在于真核生物中级联反应途径。植物MAPK具有相对保守的11个亚结构域,均为Ser/Thr蛋白激酶发挥其催化作用所必需的元件,其表达受活性氧、一氧化氮、激素等调控。MAPK可磷酸化多种底物,包括转录因子、蛋白激酶和细胞骨架相关蛋白等,在调控植物响应逆境(盐分、干旱、极端温度、重金属等)胁迫中起重要作用。本研究对植物MAPK家族的发现、分类与结构、调控机制及其响应各种非生物胁迫等方面的研究成果加以综述,并对未来研究方向进行展望,以期为农作物抗逆性遗传改良提供理论依据和基因资源。

肝细胞癌中EGFR-P38 MAPK途径通过miR-675-5p上调PD-L1并通过己糖激酶2下调HLA-ABC

背景与目的免疫治疗已成为极具前景的癌症治疗策略。全面了解肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)免疫调控将有助于HCC免疫治疗的发展。表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)信号在HCC中常被激活,并在肿瘤发生中发挥重要作用。然而,EGFR信号在HCC免疫中的作用还知之甚少。本研究旨在研究HCC细胞中EGFR信号对程序性死亡配体1(programmed death-ligand 1,PD-L1)以及人类白细胞Ⅰ类抗原(human leukocyte antigen class-Ⅰ,HLA-Ⅰ)表达的影响及其作用机制。方法采用免疫组化法检测HCC标本中磷酸化EGFR(phosphorylated EGFR,p-EGFR)、PD-L1和HLA-I(HLA-ABC)的表达水平,分析它们之间的相关性。采用实时定量PCR、Western blotting和流式细胞检测EGFR活化的HCC细胞中PD-L1和HLA-ABC的表达水平,采用T细胞介导的裂解检测HCC细胞中PD-L1和HLA-ABC异常表达对免疫抑制的作用。另外,采用动物实验、荧光素酶报告基因分析和基因功能获得及缺失实验研究EGFR活化诱导的PD-L1上调和HLA-ABC下调的作用机制。结果在HCC中p-EGFR与PD-L1表达呈正相关,与HLA-ABC表达呈负相关。在HCC细胞中,EGF激活EGFR上调PD-L1表达的同时下调HLA-ABC表达,这一作用在体外和体内实验中均可被EGFR抑制剂吉非替尼消除。机制如下,P38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)活性增强可下调微小RNA-675-5p(microRNA-675-5p,miR-675-5p),并上调糖酵解相关酶己糖激酶2(hexokinase 2,HK2);miR-675-5p下调可增加PD-L1 mRNA稳定性并引起PD-L1积累,这一作用可能是通过与PD-L1的3’非翻译区(3’-untranslated region,3’-UTR)结合实现的,而HK2上调可促进有氧糖酵解并介导HLA-ABC下调。结论在HCC细胞中,EGFR-P38 MAPK途径可通过miR-675-5p上调PD-L1表达,通过HK2下调HLA-ABC表达。我们的研究揭示了一个新的可引起HCC免疫抑制的信号网络,提示EGFR信号可作为HCC免疫治疗的潜在靶点。

MAPK相互作用蛋白激酶1对心肌细胞炎症的作用

目的于在体水平和离体水平研究MAPK相互作用蛋白激酶1对心肌细胞炎症的作用。方法应用MAPK相互作用蛋白激酶1基因敲除小鼠和C57 BL/6野生型小鼠,行主动脉缩窄术,于术后4周取材。应用免疫荧光染色,检测心肌组织中P-NF-κBp65在心肌细胞中的核转位。应用Western blot法检测心肌组织中P-NF-κBp65和TNF-α。应用Mnk1 sh RNA腺病毒转染技术,降低H9c2细胞中Mnk1的表达,给予血管紧张素Ⅱ刺激48h。应用免疫荧光染色,检测H9c2细胞中P-NF-κBp65的核转位。应用RT-PCR检测H9c2细胞中TNF-αm RNA的表达。结果在体实验表明,主动脉缩窄术后4周,与野生型小鼠相比,MAPK相互作用蛋白激酶1基因敲除小鼠心肌组织中P-NF-κBp65在心肌细胞中的核转位明显增多,TNF-α和P-NF-κBp65的蛋白表达明显增加。离体实验表明,MAPK相互作用蛋白激酶1表达降低的H9c2细胞中P-NF-κBp65的核转位明显增多,TNF-αm RNA的表达明显增加。结论 MAPK相互作用蛋白激酶1基因缺失促进压力负荷诱导的小鼠心肌组织炎症,其表达降低可促进血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞炎症。

消饮化瘀方调节P38MAPK表达治疗慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化

目的 通过调节P38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的表达,观察消饮化瘀方对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心肌纤维化的影响。方法 72只SD大鼠随机分为空白组和A组,A组腹腔注射盐酸阿霉素6 w复制CHF模型。复制成功后将A组随机分为模型组、中药低剂量组(7 g/kg)、中药中剂量组(14 g/kg)、中药高剂量组(28 g/kg)及美托洛尔组(10 mg/kg),分别灌胃给予相应的药物,共干预4 w。苏木素-伊红(HE)染色观察心肌组织的形态学变化,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测心肌组织中羟脯氨酸(Hyp)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)的含量,Western印迹检测心肌组织P38MAPK蛋白表达,实时荧光定量PCR检测心肌组织中P38MAPK mRNA表达水平。结果 与空白组相比,模型组Hyp、ColⅠ、ColⅢ、P38MAPK蛋白及mRNA表达水平明显高于空白组(P<0.01)。治疗后,与模型组相比,各治疗组ColⅠ、P38MAPK蛋白及mRNA表达水平均显著降低(P<0.01,P<0.05);美托洛尔组和中药高剂量组Hyp含量显著降低(P<0.01,P<0.05);美托洛尔组、中药中剂量组及中药高剂量组ColⅢ含量均显著降低(P<0.01)。结论 消饮化瘀方能降低CHF模型大鼠心肌组织P38MAPK蛋白及mRNA表达水平,减少心肌Hyp、ColⅠ、ColⅢ含量,有效改善心肌纤维化。