MAPK磷酸酯酶-1通过抑制JNK和p38的磷酸化调节SH-SY5Y神经母细胞瘤的凋亡

目的研究MKP-1在SH-SY5Y神经母细胞瘤中的抗凋亡。方法建立稳定表达MKP-1的SH-SY5Y细胞,用H2O2诱导细胞凋亡,并通过Western blotting比较分析MKP-1的表达对JNK和p38磷酸化的调节。结果①H2O2诱导SH-SY5Y细胞表达MKP-1,同时导致JNK和p38的去磷酸化;②在稳定表达MKP-1的SH-SY5Y细胞中,MKP-1可以抑制JNK和p38的磷酸化。③稳定表达MKP-1的SH-SY5Y细胞抵抗H2O2诱导细胞凋亡的能力比对照细胞提高了1倍左右。结论MKP-1对神经细胞的凋亡具有重要的调节作用,提示MKP-1作为调节ERK、JNK和p38蛋白激酶信号途径的重要分子,可能对退行性神经系统疾病的发病机制和治疗有重要的作用。

异丙酚、人参皂苷Rg-1、蛋白磷酸酯酶-2A和氯化锂对大鼠电休克后学习记忆及海马内谷氨酸含量的影响

目的观察异丙酚、人参皂苷Rg-1、蛋白磷酸酯酶-2A(PP-2A)和氯化锂对电休克(ECT)后嗅球切除抑郁模型大鼠学习记忆和海马内谷氨酸(Glu)浓度的影响。方法按随机单位组设2个干预因素,即ECT干预(2水平:无处置、施行1疗程ECT)和药物干预(5水平:海马CA1区分别微量注射生理盐水、异丙酚、人参皂苷Rg-1、PP-2A、氯化锂,20 g/L)的所有组合(2×5析因设计)。全部ECT处置结束24 h内开始Morris水迷宫检测,高效液相色谱法检测Glu在海马内的浓度。结果单独使用异丙酚或ECT均可造成学习记忆障碍,而二者联合使用则会缓解ECT后的学习记忆障碍;人参皂苷Rg-1、PP-2A和氯化锂对学习记忆无明显影响,但与ECT合用则可改善ECT后的学习记忆;ECT干预与药物干预存在交互作用。ECT可明显增加海马中Glu浓度;异丙酚和人参皂苷Rg-1在ECT前后均可减少Glu浓度;且ECT干预与药物干预存在交互作用。PP-2A和氯化锂在ECT前后对Glu浓度无明显影响。结论 ECT可使海马Glu浓度升高,导致学习记忆障碍;异丙酚与人参皂苷Rg-1、PP-2A和氯化锂均可改善ECT后的学习记忆;前两者与降低海马中Glu浓度有关,后两者与此无关。

对氧磷酸酯酶-1Glu-Arg192位多态性与冠心病关系的研究

目的 :探讨对氧磷酸酯酶 - 1(PON- 1)基因 Glu- Arg192位多态性、血清 PON- 1活性与冠心病的关系。 方法 :用多聚酶链限制片段多态性反应技术对 12 3例冠心病 (CHD)患者 (CHD组 )及 110例正常人 (正常对照组 )的PON- 1192位进行基因分型 ,用酚乙酸酯为底物测定血清 PON- 1活性。 结果 :重庆居民 PON- 1基因 192 A、B等位基因频率在正常对照组为 0 .43、0 .5 7,CHD组为 0 .40、0 .6 0。 CHD组的PON- 1AA、AB、BB基因型的构成比与正常对照组无显著性差异 (P>0 .0 5 ) ,正常对照组 3种基因型之间血脂无显著相关 (P>0 .0 5 ) ,CHD组的 PON- 1活性 (75 .6± 2 3.5 KU/ L )比正常对照组 (10 8.4± 18.3 KU/ L )显著下降 (P<0 .0 1)。 结论 :重庆居民 PON- 1192 B等位基因与 CHD无关 ,血清 PON- 1活性与 CHD有一定的关系。

蛋白磷酸酯酶-1和-2A抑制剂对NG108-15细胞tau蛋白磷酸化的影响

Alzheimer痴呆(AD)的主要脑病理变化之一为由超磷酸化的tau蛋白组成的神经原纤维缠结(Neurofibrillary tangle,NFT)。AD的Tau蛋白异常磷酸化与蛋白磷酸酯酶(PP)-2A和-1缺陷有关。本文首先用免疫印迹法显示NG含两大组分的tau蛋白。MTT方法观察到PP-2A和PP-1抑制剂冈 田酸(Okadaic acid.OA)处理NG108-14细胞能导致细胞代谢明显下降,同时免疫印迹法显示OA能导致的NG细胞Tau蛋白磷酸化。该研究为建立AD样蛋白磷酸酯酶缺陷引起的tau蛋白磷酸化的细胞模型奠定了基础。

对氧磷酸酯酶-1与氧化修饰型低密度脂蛋白关系的研究进展

对氧磷酸酯酶-1(PON-1,Paraoxonase,EC3.1.8.1)又称芳香基二烷基磷酸酯酶,属于水解酶类。PON-1在有机磷酸代谢中具有重要作用,它能催化磷酸酯键的水解,降解有机磷酸、芳香羟基酸酯和氨基甲酸酯。

老年脑梗死患者血清对氧磷酸酯酶-1和氧化型低密度脂蛋白的关系及其在动脉粥样硬化中的作用

目的探讨老年脑梗死患者血清对氧磷酸酯酶-1(PON-1)和氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)的关系及其在动脉粥样硬化中的作用。方法通过DSA检查确诊有颈动脉狭窄的老年脑梗死患者72例作为研究对象(脑梗死组,其中轻度狭窄33例,中度狭窄24例,重度狭窄15例),以非脑血管病健康体检者38例作为对照组,用分光光度计法测定PON-1活性,用ELISA法测定ox-LDL含量,分析PON-1活性与ox-LDL及血脂各项指标的相关性。结果脑梗死组患者血清PON-1活性显著低于对照组(P<0.01),而ox-LDL含量显著高于对照组(P<0.01),各狭窄组患者PON-1活性与ox-LDL含量差异均有统计学意义(P<0.01),随颈动脉狭窄程度加重,PON-1活性呈逐渐下降的趋势,而ox-LDL含量呈上升趋势。相关分析表明PON-1活性与ox-LDL呈负相关(r=-0.6 8,P<0.01)。结论合并动脉粥样硬化的脑梗死患者PON-1活性降低,脂质过氧化增强,血管易于损伤,PON-1和ox-LDL相互作用共同参与动脉粥样硬化的发生发展。

4-苯基-1,3-硒唑衍生物的合成及其对蛋白酪氨酸磷酸酯酶-1B抑制活性

蛋白酪氨酸磷酸酯酶-1B(PTP1B)是抗糖尿病治疗的重要靶点,因此创制活性优良的PTP1B抑制剂具有重要意义。本文设计并合成了11个含1,3-硒唑和1,2,4-三唑活性组块新型结构目标分子(ZLXZ1-ZLXZ11),并利用傅里叶变换红外光谱仪(FTIR)、核磁共振波谱仪(NMR)和高分辨质谱(HRMS)等对其进行了结构表征。首先选择ZLXZ1和ZLXZ11在MOE 2015.10程序上,与PTP1B进行分子对接模拟,结果表明,在ZLXZ1分子中硒唑环上的硒原子与PTP1B中副催化位点Tyr46、Ala217、Lys120和Asp 48分别形成了π-H作用和氢键作用。在ZLXZ11分子中硒唑上的硒原子与PTP1B中Asp181、Arg221和Asp48形成了氢键作用。在分子对接模拟的基础上,测试了11个目标分子的抑制活性,结果表明,所有目标分子的抑制率均在87.02%以上,其中3个目标分子PTP1B抑制活性高于阳性参照物齐墩果酸,抑制活性优良,有望成为潜在的PTP1B抑制剂。

Fas相关磷酸酯酶-1在卵巢癌中的表达及意义

目的 探讨Fas相关磷酸酯酶 1(FAP 1)在卵巢癌发病中的作用。方法 采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白 过氧化物酶染色法 (SP法 )检测 5 2例卵巢癌及 15例卵巢良性肿瘤组织标本中FAP 1蛋白的表达水平 ,设正常卵巢组织为对照组 (10例 )。结果 FAP 1蛋白在正常卵巢中未见表达 ,良性肿瘤中的表达率为 2 6 % ,而在交界性肿瘤与恶性肿瘤中的阳性表达率分别为 6 9%和 77% ,与前两者相比差异有显著性 (P <0 .0 1) ,而后两组间无显著性差异 (P >0 .0 5 )。FAP 1的表达与卵巢癌的临床分期、病理分级相关 (FIGOⅢ～Ⅳ期高于Ⅰ～Ⅱ期 ,病理分级Ⅱ～Ⅲ级高于Ⅰ级 ,P <0 .0 5 ) ,而与组织学类型和转移性无明显相关性。结论 FAP 1在卵巢癌组织中有广泛表达 ,且在临床分期晚和病理分级高的组织中表达增高 。

蛋白酪氨酸磷酸酯酶-1B抑制剂的研究进展

蛋白酪氨酸磷酸酯酶-1B(PTP-1B)是蛋白酪氨酸磷酸酯酶(PTP)家族中最具代表性的成鼠,因其参与多种生理过程尤其是与机体对胰岛素的敏感性紧密相关,目前已经成为糖尿病和肥胖症治疗的新靶点。现从PTP简介、PTP-1B的结构、生理功能以及6类抑制剂的结构性质等方面进行综述。

丝裂原活化蛋白激酶和磷酸酯酶-1在心肌病和细胞凋亡中的作用

ERKJ、NK和p38等丝裂原活化蛋白激酶通过生长因子、激动剂或应激反应等介导生长、分化、凋亡以及细胞间相互作用等多种过程。ERKJ、NK和p38是参与心衰病理过程的主要信号元件,MKP-1是丝裂原活化蛋白激酶等的去磷酸化因子,是一种应激蛋白,在应激反应中可以抑制ERKJ、NK和p38的活性,并通过调节ERK、JNK和p38的活性,参与对心衰病理过程的调节。本文以转基因研究结果为主要线索,对丝裂原活化蛋白激酶和磷酸酯酶-1在心衰病理过程中的作用进行了综述。

人参皂苷Rb1通过JNK/p38 MAPK途径减轻Aβ_(25-35)诱导的胎鼠皮层神经元tau蛋白过度磷酸化

探讨在Aβ25-35(beta-amyloid peptide(25-35),Aβ25-35)诱导的拟阿尔茨海默病样胎鼠皮层神经元tau蛋白过度磷酸化中,人参皂苷Rb1对tau蛋白磷酸化及JNK/p38 MAPK的可能作用。应用蛋白免疫印迹和免疫细胞化学染色的方法,观察tau蛋白磷酸化和JNK(c-jun N-terminal kinase)/p38 MAPK的表达情况。凝聚态Aβ25-35(20μmol.L-1)作用于皮层神经元12 h,tau蛋白的磷酸化水平明显增高,同时JNK/p38 MAPK的总量及其活性形式——磷酸化JNK/p38 MAPK的蛋白表达水平也增加,人参皂苷Rb1可以减轻tau蛋白的磷酸化水平及JNK/p38MAPK的蛋白水平。人参皂苷Rb1可通过JNK/p38 MAPK途径减轻Aβ25-35诱导的tau蛋白过度磷酸化。

MAPK途径磷酸化在胰岛素样生长因子-1促进人骨髓瘤细胞株KM3增殖中的作用

本研究探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对人骨髓瘤细胞株KM3增殖的影响以及MAPK途径磷酸化在该过程中的作用。采用流式细胞术检测不同浓度的重组人IGF-1处理后KM3细胞周期的变化,Western blot法检测细胞内MAPK信号转导途径主要分子Erk1/2磷酸化在IGF-1刺激及PD98059特异性抑制作用下的改变,TUNEL法检测特异性阻断Erk1/2磷酸化在抑制KM3细胞增殖和诱导凋亡中的作用。结果表明,IGF-1可以显著提高S期和G2/M期的KM3细胞比率和细胞内Erk1/2分子的磷酸化水平,阻断IGF-1引起的Erk1/2磷酸化可以显著抑制KM3细胞的增殖并引起其凋亡。结论:IGF-1引起的Erk1/2分子磷酸化在KM3细胞增殖过程中起着十分重要的作用。

miR-140-3p通过靶向MAPK1影响宫颈癌细胞增殖及顺铂敏感性的研究

目的研究miR-140-3p在宫颈癌细胞增殖和对顺铂敏感性中的作用及其机制。方法采用原位杂交技术检测宫颈癌及其癌旁组织中miR-140-3p的表达水平,并分析与临床病理参数的关系。通过CCK8实验、细胞克隆形成和细胞划痕实验,比较各组宫颈癌细胞增殖和迁移的差异。在不同浓度顺铂处理下,检测各组细胞的增殖、克隆形成及死亡率变化。利用miRNA数据库预测目标基因,并通过荧光素酶报告基因实验、qRT-PCR和Western blot检测目标基因mRNA和蛋白水平,以及凋亡相关蛋白表达,以验证miR-140-3p的潜在靶点。结果宫颈癌组织中miR-140-3p表达显著低于癌旁组织(P<0.05)。上调miR-140-3p可显著抑制宫颈癌细胞的增殖、克隆形成及迁移。CCK8、细胞克隆形成和划痕实验结果表明,不同浓度顺铂处理后,miR-140-3p过表达组MAPK1的表达下降,宫颈癌细胞增殖及克隆形成下降,而细胞凋亡增加(P<0.05)。结论miR-140-3p可能通过调控MAPK1基因抑制宫颈癌细胞增殖,并增强对顺铂的敏感性。

抗奥合剂通过p38 MAPK/NF-κB信号通路和ACE2/Ang1-7/Mas轴缓解急性肺损伤研究

目的探讨抗奥合剂(KAHJ)治疗小鼠急性肺损伤(ALI)的作用及机制,为其可能作为缓解新型冠状病毒(COVID-19)感染后症状的药物提供依据。方法采用网络药理学方法预测KAHJ治疗ALI的主要活性成分、潜在靶点和相关信号通路。将C57BL/6J小鼠随机分为对照组、LPS组和LPS+KAHJ组。LPS+KAHJ组小鼠灌胃KAHJ(4.76 g·kg^(-1)·d^(-1),8.8 mL·kg^(-1)·d^(-1)),其余组小鼠灌胃生理盐水(8.8 mL·kg^(-1)·d^(-1))。14 d后,腹腔注射LPS(5 mg·kg^(-1))诱导ALI模型。收集小鼠血清和肺组织,通过组织病理学观察肺组织的病理变化。采用Western blot、qPCR、ELISA和IHC等方法评估KAHJ对ALI的改善作用。结果通过网络药理学筛选出疾病和药物共同的70个核心靶基因,并显示与多个信号通路密切相关,如MAPK、NF-κB、Apoptosis、COVID-19和肾素-血管紧张素系统(Ras)信号通路等。此外,通过实验验证发现KAHJ能改善小鼠ALI后的炎症和细胞凋亡,减少肺损伤和肺水肿,抑制肺纤维化。同时,KAHJ的作用机制与p38 MAPK和NF-κB的磷酸化以及ACE2/Ang1-7/Mas轴的调控也有着密切关系。结论KAHJ可能通过抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路和调控ACE2/Ang1-7/Mas轴缓解ALI,为缓解COVID-19感染后症状提供了补充和替代药物。

基于MAPK信号通路探讨复方芪芎颗粒对IL-1β诱导的兔骨关节炎软骨细胞的作用及其机制

目的:基于MAPK信号通路探讨复方芪芎颗粒对IL-1β诱导的兔骨关节炎软骨细胞的作用及其机制。方法:选取5只清洁级新西兰大白兔,提取兔软骨细胞培养至第2代,通过IL-1β诱导软骨细胞,建立骨关节炎软骨细胞体外模型,将其分为空白对照组、IL-1β组、双醋瑞因组、复方芪芎颗粒低浓度组、复方芪芎颗粒中浓度组、复方芪芎颗粒高浓度组。空白对照组不进行任何干预,IL-1β组采用质量浓度为10μg/L的IL-1β处理,双醋瑞因组采用10-5mol/L双醋瑞因处理,复方芪芎颗粒低、中、高浓度组分别采用10 mg/mL、20 mg/mL、30 mg/mL复方芪芎颗粒处理。干预24、48、72 h后,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测各组P38激酶、c-Jun氨基端激酶(JNK)、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、P65激酶、基质金属蛋白酶13(MMP-13)基因表达水平;干预72h后,采用Western blotting法检测各组P38、JNK、ERK、P65、MMP-13蛋白表达水平。结果:干预24、48、72 h后,IL-1β组P38 mRNA、JNK mRNA、ERK mRNA、P65 m RNA、MMP-13 mRNA相对表达量高于空白对照组(P<0.05);双醋瑞因组和复方芪芎颗粒低、中、高浓度组P38 mRNA、JNK mRNA、ERK mRNA、P65 mRNA、MMP-13 mRNA相对表达量均低于IL-1β组(P<0.05);复方芪芎颗粒高浓度组P38 mRNA、JNK mRNA、ERK m RNA、P65 mRNA、MMP-13 mRNA相对表达量低于复方芪芎颗粒低浓度组(P<0.05)。随着药物干预时长的延长,双醋瑞因组和复方芪芎颗粒低、中、高浓度组P38 mRNA、JNK mRNA、ERK mRNA、P65 m RNA、MMP-13 mRNA相对表达量均呈降低趋势(P<0.05)。干预72 h后,IL-1β组P38、JNK、ERK、P65、MMP-13蛋白相对表达量高于空白对照组(P<0.01);双醋瑞因组和复方芪芎颗粒低、中、高浓度组P38、JNK、ERK、P65、MMP-13蛋白相对表达量均低于IL-1β组(P<0.01);复方芪芎颗粒高浓度组P38、JNK、ERK、P65、MMP-13蛋白相对表达量低于复方芪芎颗粒低浓度组(P<0.01)。结论:复方芪芎颗粒对IL-1β诱导的骨关节炎软骨细胞具有保护作用,其机制可能是通过抑制MAPK信号通路实现的,且随着药物浓度的升高和干预时长的延长其对MAPK信号通路的抑制效果更加明显。

miR-126-5p靶向MAPK1对甲状腺癌顺铂耐药细胞增殖和侵袭的影响

目的:研究miR-126-5p对甲状腺癌细胞顺铂耐药性和耐药细胞增殖侵袭的影响及机制。方法:RT-qPCR检测细胞miR-126-5p和MAPK1 mRNA表达水平。将细胞分为对照组、miR-126-5p mimic组、miR-NC组、miR-126-5pmimic+pc-MAPK1组和miR-126-5pmimic+pc-NC组。CCK-8法测定细胞顺铂抗性和增殖情况,Transwell测定细胞侵袭,双荧光素酶报告验证靶向关系,免疫印迹检测MAPK1蛋白表达水平。结果:与正常组织和细胞相比,甲状腺癌组织和细胞中miR-126-5p水平显著下调;与甲状腺癌细胞系TPC-1相比,甲状腺癌顺铂耐药细胞系TPC-1/CDDP中miR-126-5p mRNA表达显著下调。TPC-1细胞、TPC-1/CDDP细胞中,与对照组相比,miR-126-5pmimic组细胞CDDP的IC50值、细胞增殖和每视野侵袭细胞数目均显著降低,miR-126-5p靶向下调MAPK1。过表达MAPK1逆转miR-126-5p过表达对细胞顺铂抗性的IC50值、细胞增殖和每视野侵袭细胞数。结论:miR-126-5p过表达通过靶向下调MAPK1增强TPC-1和TPC-1/CDDP细胞顺铂敏感性,并抑制细胞增殖和侵袭。

黄连素通过S1P2-MAPK信号通路抗糖尿病肾纤维化作用机制研究

目的观察黄连素干预后四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠肾组织、高糖培养的系膜细胞中S1P2受体表达变化情况,以及对高糖条件下S1P2受体介导的纤维连接蛋白(FN)生成和MAPK信号通路的影响。方法腹腔注射四氧嘧啶诱导糖尿病小鼠肾损伤模型。随机分成正常、糖尿病、黄连素低剂量和高剂量组。12周实验结束时比较各组小鼠血糖、肾脏肥大指数(肾重/体重)、尿素氮、血肌酐、24 h尿蛋白等肾功能相关指标的变化。应用Real-time PCR和Western blot方法分别检测肾组织中S1P2受体mRNA和蛋白水平的表达变化。Western blot检测黄连素干预后高糖培养的系膜细胞中S1P2受体、FN表达及MAPK磷酸化改变。结果黄连素有效抑制糖尿病小鼠血糖升高,明显降低血尿素氮、血肌酐、24 h尿蛋白等肾功能相关指标,下调肾脏S1P2受体mR-NA和蛋白表达。体外研究中黄连素降低高糖培养的系膜细胞S1P2受体蛋白和FN蛋白表达,还不同程度抑制MAPK(ERK1/2、p38MAPK和JNK)磷酸化水平。结论减少S1P2受体表达,抑制S1P2-MAPK(主要是ERK1/2和p38MAPK)通路介导的FN表达增加是黄连素抗糖尿病肾纤维化可能的作用机制之一。

三七注射液对阿霉素肾纤维化大鼠TGF-β_1/P38MAPK信号通路的影响

目的观察三七注射液对阿霉素肾纤维化大鼠肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)和P38 MAPK的影响。方法 120只Sprasue-Dawley大鼠随机分为5组:正常组(n=24)、假手术组(n=24)、模型组(n=24)、三七注射液组(n=24)和三七总皂苷组(n=24),12周后处死大鼠。免疫组化和Western blot观察大鼠肾组织TGF-β1和P38 MAPK蛋白的表达。结果正常组和假手术组大鼠肾小管可见极少量的TGF-β1和P38 MAPK阳性蛋白表达;而模型组大鼠肾组织TGF-β1和P38 MAPK阳性蛋白表达上调,与假手术组相比较,差异均有统计学意义(P<0.01);与模型组相比较,三七注射液组和三七总皂苷组大鼠肾组织,TGF-β1和P38 MAPK蛋白表达明显下调,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论三七注射液的肾保护作用可能与下调TGF-β1和P38 MAPK水平,抑制TGF-β1/P38 MAPK信号通路活化有关。

过表达mi R-129-5p通过靶向MAPK1抑制宫颈癌He La细胞恶性生物行为

目的:探讨miR-129-5p对宫颈癌HeLa细胞侵袭、迁移和EMT的作用及其机制。方法:选取宫颈癌HeLa细胞,利用生物信息学预测软件筛选miR-129-5p的靶基因,双荧光素酶报告基因验证miR-129-5p和MAPK1的靶向关系。将miR-129-5pmimic、miR-129-5pinhibitor和pcDNA-MAPK1单独或联合转染到HeLa细胞,用qPCR检测HeLa细胞中miR-129-5p和MAPK1的表达水平,用Transwell、划痕愈合实验分别检测HeLa细胞的侵袭、迁移能力,WB检测细胞中E-cadherin、N-cadherin、MAPK1、STAT3和Bcl-xL的表达。构建裸鼠HeLa细胞皮下移植瘤模型,观察miR-129-5p过表达对移植瘤生长的影响,WB检测移植瘤组织中EMT及MAPK1通路相关蛋白的表达。结果:miR-129-5p与MAPK1在3’UTR区存在结合位点,过表达miR-129-5p靶向抑制MAPK1(P<0.01)。与对照组相比,miR-129-5pmimic组侵袭细胞数目减少(P<0.01),划痕愈合率降低(均P<0.01);细胞中Ecadherin表达上调而N-cadherin、MAPK1、STAT3和Bcl-xL表达下调(均P<0.01);共转染MAPK1可逆转上述现象。成功建立裸鼠HeLa细胞移植瘤模型,与对照组相比,miR-128-3pmimic组肿瘤质量减轻(P<0.01);瘤组织中E-cadherin表达水平上调而N-cadherin、MAPK1、STAT3和Bcl-xL的表达下调(均P<0.01)。结论:过表达miR-129-5p通过靶向MAPK1抑制宫颈癌HeLa细胞的侵袭、迁移和EMT。