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MAPK1与NRAS基因多态性与云南汉族人群宫颈上皮内瘤变的相关性
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作者 牛志鑫 汤丽华 +3 位作者 史磊 洪超 姚宇峰 严志凌 《昆明医科大学学报》 CAS 2024年第5期8-15,共8页
目的探讨在云南汉族人群中NRAS基因与MAPK1基因rs14804和rs9340多态性位点与宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)易感性的相关性。方法随机选取2017年5月至2019年10月昆明医科大学第三附属医院416例CIN患者和983例... 目的探讨在云南汉族人群中NRAS基因与MAPK1基因rs14804和rs9340多态性位点与宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)易感性的相关性。方法随机选取2017年5月至2019年10月昆明医科大学第三附属医院416例CIN患者和983例健康对照个体,通过TaqMan探针法对NRAS基因与MAPK1基因的SNPs位点(rs14804和rs9340)进行基因分型,分析2个SNPs位点与云南汉族人群CIN发生风险的相关性。结果MAPK1基因的SNP位点rs9340等位基因(P=0.008)和基因型(P=0.002)在CIN组与对照组的分布频率差异具有统计学意义,等位基因A可能与更高的CIN发生风险相关(OR=1.28,95%CI 1.07~1.54),尤其是低年龄组(≤50岁)人群的CIN风险相关(OR=1.35,95%CI 1.09~1.67)。结论MAPK1基因的SNP位点rs9340可能与云南汉族人群CIN发生风险具有相关性。 展开更多
关键词 宫颈上皮内瘤变 mapk1 NRAS 单核苷酸多态性 相关性 云南汉族人群
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基于HIF-1α/EGFR/MAPK1信号通路探讨龟鹿二仙胶对少弱精子症大鼠的保护作用
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作者 刘卓琳 冯芷莹 +5 位作者 王康宇 黄家望 时佳宁 张成 李玲 何清湖 《湖南中医药大学学报》 CAS 2024年第4期572-579,共8页
目的探讨龟鹿二仙胶调控缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)/表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)/和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase 1,MAPK1)信号通路对少弱精子症(o... 目的探讨龟鹿二仙胶调控缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)/表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)/和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase 1,MAPK1)信号通路对少弱精子症(oligoasthenozoospermia,OAS)大鼠的保护作用。方法将48只SD雄性大鼠随机分为正常组,模型对照组,龟鹿二仙胶低剂量(0.65 g/kg)组、中剂量(1.25 g/kg)组、高剂量(2.5 g/kg)组和左卡尼汀组,每组8只。除正常组外,其他组均采用腺嘌呤灌胃给药进行造模。造模成功后进行灌胃给药进行干预,连续给药4周,记录大鼠一般情况,给药4周后进行取材处理。腹主动脉采血,ELISA法检测血清睾酮(testosterone,T)、雌二醇(estradiol,E2)、促卵泡激素(follicle-stimulating hormone,FSH)、促黄体生成激素(luteinizing hormone,LH)和催乳素(prolactin,PRL);分离肾组织,计算肾指数;分离右侧附睾,运用自动精子分析仪检测各组大鼠精子浓度和精子活力;HE染色观察睾丸组织病理改变;用试剂盒检测大鼠睾丸组织活性氧(reactive oxygen species,ROS)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)水平;免疫组化检测大鼠睾丸组织HIF-1α、EGFR和MAPK1的蛋白表达。结果与模型对照组相比,不同剂量的龟鹿二仙胶均可显著增加大鼠的体质量(P<0.01),降低大鼠的肾指数(P<0.01),提高精子浓度和精子活力(P<0.01),改善大鼠的精子质量,并能有效减轻模型大鼠睾丸组织损伤程度,其中与龟鹿二仙胶低剂量组相比,龟鹿二仙胶高剂量组大鼠体质量、精子密度和精子活力均显著上升(P<0.05)。ELISA结果显示,与模型对照组相比,不同剂量龟鹿二仙胶能显著升高T和E2水平(P<0.05),且显著降低FSH、LH和PRL水平(P<0.05)。ROS、SOD和GSH-Px检测结果显示,与模型对照组相比,龟鹿二仙胶低、中、高剂量组ROS水平显著降低(P<0.05),龟鹿二仙胶中、高剂量组和左卡尼汀组SOD和GSH-Px活性显著升高(P<0.05)。免疫组化结果显示,与模型对照组相比,龟鹿二仙胶中、高剂量组和左卡尼汀组大鼠睾丸组织HIF-1α、EGFR、MAPK1水平显著降低(P<0.05)。结论龟鹿二仙胶可能是通过HIF-1α/EGFR/MAPK1信号通路调节氧化应激来改善OAS。 展开更多
关键词 少弱精子症 龟鹿二仙胶 HIF-1α/EGFR/mapk1信号通路 精子活力 氧化应激
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miR-126-5p靶向MAPK1对甲状腺癌顺铂耐药细胞增殖和侵袭的影响
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作者 李璐 孙弟波 +3 位作者 李萍 李思宇 马海燕 张泽天 《解剖学杂志》 CAS 2024年第4期321-327,338,共8页
目的:研究miR-126-5p对甲状腺癌细胞顺铂耐药性和耐药细胞增殖侵袭的影响及机制。方法:RT-qPCR检测细胞miR-126-5p和MAPK1 mRNA表达水平。将细胞分为对照组、miR-126-5p mimic组、miR-NC组、miR-126-5pmimic+pc-MAPK1组和miR-126-5pmimi... 目的:研究miR-126-5p对甲状腺癌细胞顺铂耐药性和耐药细胞增殖侵袭的影响及机制。方法:RT-qPCR检测细胞miR-126-5p和MAPK1 mRNA表达水平。将细胞分为对照组、miR-126-5p mimic组、miR-NC组、miR-126-5pmimic+pc-MAPK1组和miR-126-5pmimic+pc-NC组。CCK-8法测定细胞顺铂抗性和增殖情况,Transwell测定细胞侵袭,双荧光素酶报告验证靶向关系,免疫印迹检测MAPK1蛋白表达水平。结果:与正常组织和细胞相比,甲状腺癌组织和细胞中miR-126-5p水平显著下调;与甲状腺癌细胞系TPC-1相比,甲状腺癌顺铂耐药细胞系TPC-1/CDDP中miR-126-5p mRNA表达显著下调。TPC-1细胞、TPC-1/CDDP细胞中,与对照组相比,miR-126-5pmimic组细胞CDDP的IC50值、细胞增殖和每视野侵袭细胞数目均显著降低,miR-126-5p靶向下调MAPK1。过表达MAPK1逆转miR-126-5p过表达对细胞顺铂抗性的IC50值、细胞增殖和每视野侵袭细胞数。结论:miR-126-5p过表达通过靶向下调MAPK1增强TPC-1和TPC-1/CDDP细胞顺铂敏感性,并抑制细胞增殖和侵袭。 展开更多
关键词 miR-126-5p mapk1 甲状腺癌 顺铂 增殖 侵袭
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Lnc ILF3-AS1通过miR-212-3p/MAPK1分子轴调控子宫内膜癌细胞恶性生物学行为的作用机制
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作者 周英 顾英 王利明 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期1349-1357,共9页
目的探讨ILF3-AS1对子宫内膜癌细胞恶性生物学行为的作用机制。方法qRT-PCR检测ILF3-AS1在子宫内膜癌组织和细胞系中的表达水平;Western blot检测MAPK1蛋白表达水平;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术、CCK-8以及Transwell分别检测AN3C... 目的探讨ILF3-AS1对子宫内膜癌细胞恶性生物学行为的作用机制。方法qRT-PCR检测ILF3-AS1在子宫内膜癌组织和细胞系中的表达水平;Western blot检测MAPK1蛋白表达水平;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术、CCK-8以及Transwell分别检测AN3CA细胞的凋亡、增殖、侵袭及迁移情况;双荧光素酶报告基因检验miR-212-3p与ILF3-AS1或MAPK1的靶向关系。结果ILF3-AS1在子宫内膜癌组织和癌细胞中高表达(均P<0.01),且在AN3CA细胞中的表达水平最高(P<0.001)。敲降ILF3-AS1或过表达miR-212-3p均显著抑制AN3CA细胞增殖(P<0.05)、侵袭(P<0.01)和迁移(P<0.001),并促进细胞凋亡(P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验结合qRT-PCR和Western blot检测结果表明,ILF3-AS1与miR-212-3p、miR-212-3p与MAPK1之间存靶向负调控作用。过表达MAKP1显著促进AN3CA细胞增殖(P<0.05)、侵袭和迁移(P<0.05或P<0.01),并抑制细胞凋亡(P<0.01)。进一步实验表明,同时过表达miR-212-3p和MAPK1和敲降ILF3-AS1+过表达MAPK1均显著逆转了过表达MAPK1对AN3CA细胞增殖、侵袭和迁移的抑制(P<0.05)以及对细胞凋亡的促进作用(P<0.01)。结论ILF3-AS1下调MAPK1,促进miR-212-3p的表达,进而促进子宫内膜癌AN3CA细胞增殖、侵袭和迁移,并抑制细胞凋亡。 展开更多
关键词 子宫内膜癌 ILF3-AS1 miR-212-3p mapk1 恶性生物学行为
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子痫前期患者外周血TNF-α、DCN和MAPK1 mRNA表达变化及临床意义探究
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作者 王玉红 吴超 《内蒙古医科大学学报》 2023年第6期626-629,641,共5页
目的 分析子痫前期(PE)患者外周血肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、核心蛋白聚糖(DCN)和中性粒细胞丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)mRNA水平及其临床意义。方法 回顾性分析临床资料,选取2020年6月至2023年6月我院收治的PE患者73例为观察对象,纳为P... 目的 分析子痫前期(PE)患者外周血肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、核心蛋白聚糖(DCN)和中性粒细胞丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)mRNA水平及其临床意义。方法 回顾性分析临床资料,选取2020年6月至2023年6月我院收治的PE患者73例为观察对象,纳为PE组;PE组根据病情严重程度分为轻度PE组及重度PE组。选取同期于我院产科产检的健康孕妇50例为健康组。比较两组临床资料,采集外周血,比较两组外周血TNF-α、DCN和中性粒细胞MAPK1 mRNA水平,采用Pearson相关性分析分析PE组外周血TNF-α、DCN和MAPK1mRNA指标的两两相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线评估外周血TNF-α、DCN和MAPK1 mRNA辅助评估PE病情严重程度。结果 两组年龄、孕周、孕前BMI等临床资料差异无统计学意义(P>0.05)。PE组外周血TNF-α、DCN和中性粒细胞MAPK1 mRNA明显高于健康组(P<0.05)。重度PE组外周血TNF-α、DCN和中性粒细胞MAPK1 mRNA明显高于轻度PE组(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,TNF-α与DCN、MAPK1 mRNA均呈明显正相关(r=0.618、0.739,P<0.05);DCN与MAPK1 mRNA均呈明显正相关(r=0.711,P <0.05)。ROC曲线显示,TNF-α、DCN、MAPK1 mRNA在诊断PE的AUC分别为0.782、0.718、0.751,三者联合诊断PE病情严重程度的AUC为0.880(P<0.05)。结论 PE患者外周血TNF-α、DCN和MAPK1 mRNA水平明显异常高表达,且TNF-α、DCN和MAPK1 mRNA水平随PE病情加重而升高,三者相互存在一定相关性,在辅助评估PE病情严重程度方面具有一定价值,定期监测有助于早期诊断PE,帮助改善母子妊娠结局。 展开更多
关键词 子痫前期 TNF-Α 核心蛋白聚糖 中性粒细胞 mapk1 mRNA
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miR-198靶向MAPK1调控宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡和侵袭 被引量:13
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作者 朱利红 段树鹏 +4 位作者 秦海霞 张秀玲 赵淑珍 李少儒 王世进 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 2018年第12期959-964,共6页
目的探究miR-198对宫颈癌细胞增殖、凋亡和侵袭的作用及其机制。方法用miR-198mimic转染HeLa细胞,qRT-PCR检测miR-198和丝裂原活化蛋白激酶1 (Mitogen-activated protein kinase1,MAPK1)的mRNA水平;荧光素酶实验检测miR-198和MAPK1的靶... 目的探究miR-198对宫颈癌细胞增殖、凋亡和侵袭的作用及其机制。方法用miR-198mimic转染HeLa细胞,qRT-PCR检测miR-198和丝裂原活化蛋白激酶1 (Mitogen-activated protein kinase1,MAPK1)的mRNA水平;荧光素酶实验检测miR-198和MAPK1的靶向关系;用pcDNA3.0-MAPK1(pc-MAPK1)和miR-198 mimic转染细胞,CCK-8检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell法检测细胞侵袭能力,Westernblot检测蛋白的表达。结果 miR-198mimic转染细胞后,miR-198表达水平明显升高,MAPK1mRNA表达水平明显降低;荧光素酶报告实验表明miR-198序列上存在MAPK1结合位点;miR-198过表达能显著降低宫颈癌细胞增殖倍数、诱导细胞凋亡,同时还能明显降低HeLa细胞侵袭能力;此外,miR-198 mimic能显著抑制MAPK1下游基因核糖体S6激酶2(Ribosomal S6 kinase 2, RSK2)、c-Myc和c-fos的蛋白表达;pc-MAPK1能明显减弱miR-198 mimic对HeLa细胞增殖、凋亡、侵袭及对MAPK1下游蛋白表达的调控作用。结论 miR-198过表达能通过靶向MAPK1抑制宫颈癌细胞的增殖和侵袭能力并诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 宫颈癌 miR-198 mapk1 凋亡 侵袭
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芸薹属物种(B.napus,B.oleracea,B.rapa)MAPK1家族的克隆、进化和表达特征 被引量:8
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作者 陆俊杏 卢坤 +7 位作者 朱斌 彭茜 陆奇丰 曲存民 殷家明 李加纳 梁颖 柴友荣 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第16期3478-3487,共10页
【目的】克隆甘蓝型油菜、甘蓝和白菜MAPK1家族,分析3个物种MAPK1转录表达器官特异性。【方法】在电子克隆的基础上,利用RACE(rapid amplification of cDNA ends)技术获得3个物种MAPK1全长cDNA序列和gDNA序列。利用实时荧光定量PCR(qRT-... 【目的】克隆甘蓝型油菜、甘蓝和白菜MAPK1家族,分析3个物种MAPK1转录表达器官特异性。【方法】在电子克隆的基础上,利用RACE(rapid amplification of cDNA ends)技术获得3个物种MAPK1全长cDNA序列和gDNA序列。利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析3个物种MAPK1家族的器官特异性表达特征。【结果】从甘蓝型油菜、甘蓝和白菜中克隆了MAPK1家族共4个成员基因BnMAPK1-1、BnMAPK1-2、BoMAPK1和BrMAPK1,它们的gDNA长度为2 512—2 525 bp,均有3个外显子和2个内含子,最长标准mRNA为1 599—1 620 bp,ORF均为1 100 bp。系统进化分析表明,甘蓝型油菜MAPK1家族来自于甘蓝和白菜MAPK1之和,其中,BnMAPK1-1对应于BoMAPK1,BnMAPK1-2则对应于BrMAPK1。qRT-PCR结果显示3个物种MAPK1在所有检测器官中均有表达,但器官特异性在种间差异显著,暗示快速进化。【结论】克隆了甘蓝型油菜、甘蓝和白菜MAPK1的全长cDNA序列和gDNA序列,支持甘蓝和白菜通过天然种间杂交形成异源四倍体物种甘蓝型油菜的假说,芸薹属MAPK1基因和蛋白在序列和结构上非常保守,但转录表达的器官特异性上进化极快,近缘种间差异显著。 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 甘蓝 白菜 克隆 进化 表达 mapk1
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硫化氢对糖尿病大鼠心肌纤维化及MAPK1/3和MMP-8表达的影响 被引量:13
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作者 李芳 曾欧 +4 位作者 罗健 吴志雄 肖婷 张晶晶 杨军 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期549-552,共4页
目的探讨气体信号分子硫化氢(H2S)对糖尿病大鼠心肌纤维化及MAPK1/3和MMP-8蛋白表达的影响。方法 40只SD大鼠随机分为4组:正常对照组、糖尿病大鼠组(STZ组)、硫化氢干预糖尿病大鼠组(STZ+H2S组)和硫化氢干预正常大鼠组(H2S组)。用腹腔... 目的探讨气体信号分子硫化氢(H2S)对糖尿病大鼠心肌纤维化及MAPK1/3和MMP-8蛋白表达的影响。方法 40只SD大鼠随机分为4组:正常对照组、糖尿病大鼠组(STZ组)、硫化氢干预糖尿病大鼠组(STZ+H2S组)和硫化氢干预正常大鼠组(H2S组)。用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)(40 mg/kg)建立糖尿病大鼠模型;对照组每天腹腔注射生理盐水;STZ+H2S组与H2S组每天腹腔注射硫氢化钠(H2S供体)溶液(100μmol/kg),8周后处死大鼠,HE染色观察心肌纤维病理形态学变化,Western blot法检测Collagen I、MAPK1/3和MMP-8蛋白的表达。结果与对照组相比,糖尿病组大鼠心肌组织胶原含量明显升高,心肌间质纤维化,Collagen I、MAPK1/3和MMP-8蛋白表达水平显著升高(P<0.05);糖尿病大鼠经硫化氢干预后大部分心肌纤维呈平行排列,结构清晰,间质有少量疏松结缔组织,Collagen I、MAPK1/3和MMP-8蛋白表达水平明显下调(P<0.05),而非糖尿病硫化氢干预组心肌纤维化程度及心肌组织Collagen I、MAPK1/3和MMP-8蛋白表达水平较对照组均无明显差异(P>0.05)。结论 H2S可改善糖尿病大鼠心肌纤维化,其机制可能与抑制MAPK1/3/MMP-8信号通路有关。 展开更多
关键词 硫化氢 糖尿病 心肌纤维化 mapk1/3 MMP-8
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过表达mi R-129-5p通过靶向MAPK1抑制宫颈癌He La细胞恶性生物行为 被引量:6
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作者 瞿小玲 曾仪 +1 位作者 姚利 蔡政 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1075-1082,共8页
目的:探讨miR-129-5p对宫颈癌HeLa细胞侵袭、迁移和EMT的作用及其机制。方法:选取宫颈癌HeLa细胞,利用生物信息学预测软件筛选miR-129-5p的靶基因,双荧光素酶报告基因验证miR-129-5p和MAPK1的靶向关系。将miR-129-5pmimic、miR-129-5pin... 目的:探讨miR-129-5p对宫颈癌HeLa细胞侵袭、迁移和EMT的作用及其机制。方法:选取宫颈癌HeLa细胞,利用生物信息学预测软件筛选miR-129-5p的靶基因,双荧光素酶报告基因验证miR-129-5p和MAPK1的靶向关系。将miR-129-5pmimic、miR-129-5pinhibitor和pcDNA-MAPK1单独或联合转染到HeLa细胞,用qPCR检测HeLa细胞中miR-129-5p和MAPK1的表达水平,用Transwell、划痕愈合实验分别检测HeLa细胞的侵袭、迁移能力,WB检测细胞中E-cadherin、N-cadherin、MAPK1、STAT3和Bcl-xL的表达。构建裸鼠HeLa细胞皮下移植瘤模型,观察miR-129-5p过表达对移植瘤生长的影响,WB检测移植瘤组织中EMT及MAPK1通路相关蛋白的表达。结果:miR-129-5p与MAPK1在3’UTR区存在结合位点,过表达miR-129-5p靶向抑制MAPK1(P<0.01)。与对照组相比,miR-129-5pmimic组侵袭细胞数目减少(P<0.01),划痕愈合率降低(均P<0.01);细胞中Ecadherin表达上调而N-cadherin、MAPK1、STAT3和Bcl-xL表达下调(均P<0.01);共转染MAPK1可逆转上述现象。成功建立裸鼠HeLa细胞移植瘤模型,与对照组相比,miR-128-3pmimic组肿瘤质量减轻(P<0.01);瘤组织中E-cadherin表达水平上调而N-cadherin、MAPK1、STAT3和Bcl-xL的表达下调(均P<0.01)。结论:过表达miR-129-5p通过靶向MAPK1抑制宫颈癌HeLa细胞的侵袭、迁移和EMT。 展开更多
关键词 宫颈癌 HELA细胞 miR-129-5p mapk1 侵袭 迁移 上皮间质转化
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辛伐他汀抑制K562细胞MAPK1、cyclin D1、E2F1、c-myc mRNA的表达 被引量:1
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作者 杨永长 传良敏 +4 位作者 黄文芳 刘华 曾娅莉 胥国强 刘文 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期241-244,共4页
目的探讨辛伐他汀抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡的分子机制。方法不同浓度辛伐他汀作用K562细胞后,MTT法检测细胞增殖情况,AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况,RT-PCR测定MAPK1、cyclinD1、E2F1、c-myc mRNA表达。结果辛伐他汀能... 目的探讨辛伐他汀抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡的分子机制。方法不同浓度辛伐他汀作用K562细胞后,MTT法检测细胞增殖情况,AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况,RT-PCR测定MAPK1、cyclinD1、E2F1、c-myc mRNA表达。结果辛伐他汀能抑制K562细胞增殖,增殖抑制效应随药物浓度增加和作用时间延长而增大(P<0.05)。与对照组比较,5、10、20μmol/L辛伐他汀作用K562细胞48h和72h后能明显增加细胞凋亡率,差异具有统计学意义(P<0.05),表明辛伐他汀能诱导K562细胞凋亡。10、20μmol/L辛伐他汀处理K562细胞72h后,MAPK1、cyclinD1、E2F1、c-mycmRNA表达水平明显降低。结论辛伐他汀可能通过调节Ras-MAPK途径抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡。 展开更多
关键词 辛伐他汀 K562细胞 mapk1 CYCLIN D1 E2F1 C-MYC
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MAPK1和eEF1B对奶牛乳腺上皮细胞泌乳调控的作用及机理研究报告 被引量:1
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作者 陆黎敏 黄建国 +1 位作者 李庆章 高学军 《科技创新导报》 2016年第8期170-170,共1页
该研究采用组织块儿培养法,成功构建了体外培养的奶牛乳腺上皮细胞模型,应用CASY细胞分析仪检测了不同浓度和作用时间下蛋氨酸和赖氨酸对奶牛乳腺上皮细胞活力的影响,利用高效液相色谱检测了β-casein的分泌情况,确定了蛋氨酸和赖氨酸... 该研究采用组织块儿培养法,成功构建了体外培养的奶牛乳腺上皮细胞模型,应用CASY细胞分析仪检测了不同浓度和作用时间下蛋氨酸和赖氨酸对奶牛乳腺上皮细胞活力的影响,利用高效液相色谱检测了β-casein的分泌情况,确定了蛋氨酸和赖氨酸最佳剂量分别为0.6 mmol/L和1.2 mmol/L,最佳作用时间为24 h。建立奶牛乳腺上皮细胞核磷酸化蛋白质组技术,应用双向电泳(2-DE)结合质谱技术(MALDI-TOF-MS)鉴定蛋氨酸和赖氨酸对奶牛乳腺上皮细胞核磷酸化蛋白质的差异影响,发现蛋氨酸处理组,mitogen-activated protein kinase 1(MAPK1)和e EF1B蛋白质表达上调;并应用荧光定量PCR和Western blotting技术验证差异蛋白在转录水平和蛋白水平上的表达,与2-DE结果一致。实验过程中构建了真核表达载体p GCMVIRES-EGFP-MAPK1、e EF1B,转染至奶牛乳腺上皮细胞中,通过G418筛选获得稳定转染的细胞株;然后通过基因沉寂和过表达等技术,减少或增加MAPK1、e EF1B的表达水平后,检测泌乳信号转导通路中重要调控蛋白的表达情况,发现蛋氨酸和赖氨酸营养素可以通过调节MAPK1、e EF1B介导m TOR信号转导通路,影响Stat5的表达,进而调节乳蛋白的表达。以上实验结果为奶牛营养基因组学的研究提供了理论依据和技术方法。 展开更多
关键词 蛋氨酸 赖氨酸 细胞核磷酸化蛋白质组 mapk1 eEF1B 奶牛乳腺上皮细胞
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肺炎链球菌溶血素诱导THP-1细胞凋亡涉及MAPK1/3信号途径
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作者 姜慧 贺潇 +10 位作者 袁军 王虹 李忱炜 董杰 崔瑾 董姗姗 周爱娥 张雪梅 胥文春 尹一兵 何於娟 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第13期1338-1341,共4页
目的探讨肺炎链球菌溶血素(pneumolysin,Ply)对人急性单核细胞白血病单核细胞株THP-1细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用及机制。方法 MTT法检测Ply对THP-1细胞的增殖抑制。瑞氏染色观察Ply对人THP-1细胞形态的影响。AnnexinV-FITC/PI双标法... 目的探讨肺炎链球菌溶血素(pneumolysin,Ply)对人急性单核细胞白血病单核细胞株THP-1细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用及机制。方法 MTT法检测Ply对THP-1细胞的增殖抑制。瑞氏染色观察Ply对人THP-1细胞形态的影响。AnnexinV-FITC/PI双标法检测细胞凋亡。琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞DNA片段化现象。免疫组化和Western blot检测MAPK1/3蛋白表达的变化。结果将人THP-1细胞分别与0.05、0.1、0.5、1、2.5、5μg/ml Ply共同孵育后,在24、48、72、96 h用MTT法检测细胞增殖抑制率,发现Ply对人THP-1细胞具有明显的增殖抑制作用,并且呈剂量和时间依赖性,IC50(24 h)为1.31μg/ml;0.05μg/ml和0.1μg/ml Ply分别处理THP-1细胞12 h后,通过瑞氏染色法观察人THP-1细胞可见凋亡小体及核碎裂象等典型的凋亡形态学改变;用0.05μg/ml Ply和0.1μg/ml Ply作用THP-1细胞12 h后细胞早期凋亡率分别为11.83%和48.45%(P<0.05);提取凋亡THP-1细胞DNA,进行琼脂糖凝胶电泳可见典型的"梯状"条带;Ply作用于人THP-1细胞后,胞内MAPK1/3蛋白表达降低(P<0.05)。结论 Ply可诱导人THP-1细胞凋亡,此作用涉及MAPK1/3信号通路的参与。 展开更多
关键词 肺炎链球菌溶血素 THP-1细胞 凋亡 mapk1/3通路
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miR-508-5p慢病毒过表达载体构建及对MAPK1/ERK信号通路靶向抑制作用的研究
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作者 白静 范维宁 +3 位作者 邢译文 张涛 周林林 徐广贤 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期34-39,共6页
目的:构建能高效表达成熟miR-508-5p小分子的慢病毒过表达载体,研究其对MAPK1/ERK信号通路靶向调控作用。方法:利用化学合成miR-508-5p茎环结构RNA,并将其克隆入线性化的pSicoR质粒中,经双酶切及测序鉴定;同时构建与miR-508-5p互补靶基... 目的:构建能高效表达成熟miR-508-5p小分子的慢病毒过表达载体,研究其对MAPK1/ERK信号通路靶向调控作用。方法:利用化学合成miR-508-5p茎环结构RNA,并将其克隆入线性化的pSicoR质粒中,经双酶切及测序鉴定;同时构建与miR-508-5p互补靶基因MAPK1的3'非翻译区,将其克隆入线性化的Report载体中。利用脂质体转染试剂将鉴定阳性的pSicoR-miR-508-5p重组质粒转染HEK-293T细胞,进一步通过Relative luciferase activity、Western blot及real-time PCR试验检测MAPK1蛋白和mRNA相对表达水平。结果:酶切及测序结果证明成功构建pSicoR-miR-508-5p及Report-MAPK1 3'-UTR重组质粒,并通过实验证实miR-508-5p过表达明显抑制MAPK1的蛋白表达水平及mRNA相对含量(P<0.05);抑制miR-508-5p的表达,又明显上调MAPK1的蛋白表达水平及mRNA相对含量(P<0.05)。结论:成功构建pSicoR-miR-508-5p慢病毒过表达载体,证实miR-508-5p直接靶标MAPK1的表达,在转录后水平对其进行负调控,为进一步研究miRNA对细胞通路和细胞周期的调控作用奠定了基础。 展开更多
关键词 miR-508-5P 细胞通路 丝裂原活化蛋白激酶(mapk1) 细胞外信号调节激酶(ERK)
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化肝煎对HSC-T6细胞TGF-β1、CTGF及MAPK1表达的影响 被引量:4
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作者 高元峰 肖望重 +2 位作者 肖岚 李珊 唐锋 《辽宁中医杂志》 CAS 2020年第7期185-188,共4页
目的探讨化肝煎含药血清对大鼠肝星状细胞HSC-T6增殖与相关基因表达的影响。方法采用正交试验法优选化肝煎含药血清的制备,并以优化后的化肝煎含药血清干预HSC-T6,MTS法检测其对HSC-T6生长的抑制作用;qPCR法检测HSC-T6细胞中转化生长因... 目的探讨化肝煎含药血清对大鼠肝星状细胞HSC-T6增殖与相关基因表达的影响。方法采用正交试验法优选化肝煎含药血清的制备,并以优化后的化肝煎含药血清干预HSC-T6,MTS法检测其对HSC-T6生长的抑制作用;qPCR法检测HSC-T6细胞中转化生长因子β1(transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、有丝分裂原活化蛋白激酶1(mitogen activated protein kinase,MAPK1)mRNA表达。结果A1B2C2为优化方案,即给正常大鼠灌胃给药,末次给药后1 h,采集血清;化肝煎含药血清体积分数为10%、20%和40%时可显著抑制HSC-T6的增殖(P<0.01、0.001),并对TGF-β1、CTGF及MAPK1 mRNA表达均表现显著抑制作用(P<0.01、0.001)。结论化肝煎含药血清能抑制HSC-T6的增殖,可能跟抑制TGF-β1、CTGF及MAPK1有关。 展开更多
关键词 化肝煎 HSC-T6 TGF-Β1 CTGF mapk1
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斑马鱼(Danio rerio)mapk1基因对tp53基因调控研究 被引量:3
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作者 包林珠 时灿 +5 位作者 卢玲儿 徐行 周泽斌 任建峰 李伟明 张庆华 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期160-168,共9页
旨在研究斑马鱼(Danio rerio)mapk1基因对tp53基因的调控作用。通过生信网站分析斑马鱼tp53启动子序列与mapk1基因CDS序列,构建斑马鱼tp53启动子荧光素酶报告基因质粒pGL3-tp53-Luc和mapk1表达质粒pCMV-Tag2B-mapk1。利用Luciferase实... 旨在研究斑马鱼(Danio rerio)mapk1基因对tp53基因的调控作用。通过生信网站分析斑马鱼tp53启动子序列与mapk1基因CDS序列,构建斑马鱼tp53启动子荧光素酶报告基因质粒pGL3-tp53-Luc和mapk1表达质粒pCMV-Tag2B-mapk1。利用Luciferase实验验证tp53启动子报告基因的活性,以及mapk1基因对tp53基因的活性影响。结果显示,斑马鱼tp53基因启动子区无CpG岛位点,包含Oct-1(TATGTAAAGC)、Sp-1(AGATCCCGCC)、c-Jun(CTGACGTCAC)、CREB(CTGACGTCAC)、CREBP1(CTGACGTCAC)、NF-kappa B1(AGGGGAATCC)和RAR-alpha1(TTGAACTTTT)共7个转录因子结合位点;斑马鱼与人和小鼠MAPK1氨基酸的一致性分别为91.33%和90.79%。pGL3-tp53-Luc在哺乳动物细胞系和鱼类细胞系中均具有很高的活性,分别是对照组的17倍和9倍。在HEK293T细胞中过表达pCMV-Tag2B-mapk1质粒后pGL3-tp53-Luc的luciferase活性是对照组的3倍左右。实验验证了斑马鱼mapk1基因可促进tp53基因的表达。 展开更多
关键词 斑马鱼 TP53 mapk1 报告基因
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miR-143-3p靶向MAPK1对人结肠癌细胞增殖,凋亡和侵袭的调节作用 被引量:11
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作者 张志谦 张广星 彭小东 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第3期292-298,共7页
目的研究miR-143-3p靶向MAPK1与人结肠癌细胞增殖、凋亡和侵袭的关系。方法qRT-PCR检测miR-143-3p mimic转染效果和MAPK1的m RNA表达水平;双荧光素酶报告实验分析miR-143-3p与MAPK1的靶向关系;蛋白质印迹检测MAPK1的蛋白表达水平,CCK-8... 目的研究miR-143-3p靶向MAPK1与人结肠癌细胞增殖、凋亡和侵袭的关系。方法qRT-PCR检测miR-143-3p mimic转染效果和MAPK1的m RNA表达水平;双荧光素酶报告实验分析miR-143-3p与MAPK1的靶向关系;蛋白质印迹检测MAPK1的蛋白表达水平,CCK-8检测细胞增殖倍数,Hoechst染色检测细胞增殖,体外侵袭实验检测细胞侵袭,蛋白质印迹检测Ki67、VEGF、MMP-2和cleaved caspase-3的表达。结果 miR-143-3p mimic抑制人结肠癌细胞SW620中MAPK1 mRNA和蛋白的表达水平;miR-143-3p mimic与MAPK1野生型报告载体共转后,荧光素酶的活性显著降低;miR-143-3p mimic转染SW620细胞后,细胞增殖、侵袭能力显著降低,凋亡细胞数目显著增加,Ki67、VEGF和MMP-2的表达水平显著降低,cl-caspase-3的表达水平显著上升;miR-143-3p mimic能缓解MAPK1高表达对SW620细胞增殖、侵袭的诱导作用和对细胞凋亡的抑制作用。结论 miR-143-3p抑制人结肠癌细胞增殖和侵袭,诱导细胞凋亡,其作用机制与靶向抑制MAPK1有关。 展开更多
关键词 结肠癌 微小RNA mapk1 增殖 凋亡 侵袭
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MAPK1基因多态性及mRNA表达与缺血性脑卒中神经功能缺损程度的相关分析 被引量:3
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作者 陈昭霞 龙建雄 +5 位作者 郭晓婧 黄焦 杨佳磊 朱路路 吴旭龙 苏莉 《内科》 2019年第2期125-128,141,共5页
目的探讨丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)基因rs6928、rs13515、rs1063311多态性及MAPK1基因mRNA表达与缺血性脑卒中(IS)患者神经功能缺损严重程度的相关性。方法采用Massarray SNP基因分型技术对MAPK1基因的rs6928、rs13515、rs1063311多... 目的探讨丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)基因rs6928、rs13515、rs1063311多态性及MAPK1基因mRNA表达与缺血性脑卒中(IS)患者神经功能缺损严重程度的相关性。方法采用Massarray SNP基因分型技术对MAPK1基因的rs6928、rs13515、rs1063311多态性进行基因分型,运用qRT-PCR实验技术测定MAPK1基因mRNA表达水平,使用NIHSS量表对IS患者进行神经功能缺损评分。结果校正性别、年龄之后,在加性模型、隐性模型中,rs6928多态性与IS患者NIHSS评分具有相关性(P <0. 05)。MAPK1基因mRNA表达水平与IS患者NIHSS评分无相关性(P> 0. 05)。结论 MAPK1基因rs6928多态性可能会影响IS患者神经功能缺损的严重程度。 展开更多
关键词 缺血性脑卒中 mapk1基因 单核苷酸多态性 MRNA表达 NIHSS评分
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miR-217靶向MAPK1抑制胃癌细胞侵袭转移作用研究 被引量:6
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作者 卢燕华 唐三元 《中国现代医药杂志》 2014年第11期21-23,共3页
目的研究mi R-217靶向MAPK1与胃癌侵袭转移的关系。方法在3个不同分化的胃癌细胞株MKN-28、SGC-7901、BGC-823中通过q RT-PCR技术检测mi R-217情况,Western blot检测MAPK1表达,Transwell实验分析mi R-217下调MAPK1表达后胃癌细胞侵袭转... 目的研究mi R-217靶向MAPK1与胃癌侵袭转移的关系。方法在3个不同分化的胃癌细胞株MKN-28、SGC-7901、BGC-823中通过q RT-PCR技术检测mi R-217情况,Western blot检测MAPK1表达,Transwell实验分析mi R-217下调MAPK1表达后胃癌细胞侵袭转移能力改变。结果低分化人胃癌细胞株中MAPK1低表达,而mi R-217高表达,中、高分化人胃癌细胞株中MAPK1高表达,而mi R-217低表达(P<0.05);SGC-7901-mi R-217mimics细胞株中mi R-217表达增高,而MAPK1表达下调(P<0.05);而SGC-7901、SGC-7901-mi R-Scramble、SGC-7901-mi R-217-PM 3个细胞株中mi R-217表达水平较低,而MAPK1表达水平较高(P>0.05)。SGC-790-mi R-217 mimics侵袭细胞计数明显低于其他3组(P<0.05),SGC-7901、SGC-7901-mi R-Scramble、SGC-7901-mi R-217-PM 3组之间侵袭细胞计数无显著性差异(P>0.05)。结论 mi R-217能靶向结合MAPK1,降低其表达水平并抑制胃癌细胞的侵袭和转移。 展开更多
关键词 非编码RNA mapk1 胃癌 侵袭转移
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Expression of MAPK1 in cervical cancer and effect of MAPK1 gene silencing on epithelial-mesenchymal transition,invasion and metastasis 被引量:13
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作者 Xiao-Wen Li Muyasier Tuergan Guzhalinuer Abulizi 《Asian Pacific Journal of Tropical Medicine》 SCIE CAS 2015年第11期915-921,共7页
Objective:To discuss the expression of mitogen-activated protein kinase 1(MAPK1) in the cervical cancer and effect of MAPK1 gene silencing on epithelial-mesenchymal transition and invasion and metastasis.Methods:Immun... Objective:To discuss the expression of mitogen-activated protein kinase 1(MAPK1) in the cervical cancer and effect of MAPK1 gene silencing on epithelial-mesenchymal transition and invasion and metastasis.Methods:Immunohistoehemistry,western blot and RT-PCR method were employed to detect the expression of MAPKl protein and mRNA in cervical cancer tissue and adjacent normal tissue.The constructed siRNA-MAPKI was transferred into human cervical cancer HeLa cells using Lipofectamine^(?)2000.MTT method was used to detect the cell vitality,transwell method to detect the cell invasion,and western blot to detect the expression of matrix metalloproteinases(MMP)-2,MMP-9,tissue inhibitor of metalloproteinase(TIMP)-1,TIMP-2,zinc finger transcription factor(Snail),epithelialmesenchymal transition related protein(EMT) E-cadherin and vimentin in cells.Results:The expression of MAPKl protein and mRNA in the cervical cancer tissue was significantly higher than the one in the adjacent normal tissue(P<0.01):after transfecting the siRNA-MAPKI into the human cervical cancer HeLa cells through liposome,compared with the control group,its cell vitality was significantly decreased(P<0.01),cell invasion was significantly decreased(P<0.01);expressed of MMP2.MMP-9,Snail and vimentin was significantly decreased(P<0.01),and expression of TIMP-1,TIMP-2 and E-cadherin was significantly increased(/J<0.01).Conclusions:Because of the high expression of MAPKl in the cervical cancer tissue,the interference in the expression of MAPK1 can significantly inhibit the invasion and metastasis of cervical cancer HeLa cells,which is related to the interference in the expression of MMPs/TIMP and Snail-mediated generation of EMT. 展开更多
关键词 mapk1 CERVICAL CANCER INVASION METASTASIS Epitheli
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miR-105-5p靶向MAPK1抑制非小细胞肺癌细胞A549的生长、运动和上皮间质转化 被引量:15
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作者 李耀杰 汤素娜 +3 位作者 王保收 王伟 杨攀娜 刘玉 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第20期2485-2490,共6页
目的:探究miR-105-5p靶向MAPK1对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞A549的生长、运动和上皮间质转化(EMT)的影响。方法:利用Lipofectamine 2000将mimic-NC、miR-105-5p mimic、MAPK1质粒分别或联合转染至各组A549细胞;qRT-PCR检测miR-105-5p和MAP... 目的:探究miR-105-5p靶向MAPK1对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞A549的生长、运动和上皮间质转化(EMT)的影响。方法:利用Lipofectamine 2000将mimic-NC、miR-105-5p mimic、MAPK1质粒分别或联合转染至各组A549细胞;qRT-PCR检测miR-105-5p和MAPK1 mRNA表达水平,利用软件预测miR-105-5p靶向关系,并利用荧光素酶实验验证;MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot检测MPAK1、Ki67、PCNA、Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9、E-cadherin及N-cadherin表达水平;皮下注射A549细胞构建肺癌移植瘤模型,30 d后移植瘤称重,并用Western blot检测MPAK1、KI67、Bax、Caspase-3、E-cadherin蛋白表达情况。结果:miR-105-5p在NSCLC A549细胞低表达,miR-105-5p与MAPK1在3′UTR区存在结合位点,过表达miR-105-5p抑制MAPK1表达;miR-105-5p过表达后,NSCLC A549细胞的增殖速度及MPAK1、Ki67、PCNA和Bcl-2表达量降低,细胞凋亡率及Bax、Caspase-3和Caspase-9表达量升高,侵袭细胞数目和伤口愈合率减少,E-cadherin表达上调、N-cadherin表达明显下调,MAPK1过表达可逆转miR-105-5p过表达引起的改变。miR-105-5p过表达明显减轻移植瘤重量,下调移植瘤细胞中MPAK1、Ki67、Bax和Caspase-3表达,上调E-cadherin表达。结论:miR-105-5p靶向MAPK1抑制NSCLC细胞A549的生长、运动和EMT。 展开更多
关键词 miR-105-5p mapk1 非小细胞肺癌 生长 运动 上皮间质转化
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