四黄清灵液通过MAPKs/NF-κB信号通路保护脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症反应

目的 研究中药复方四黄清灵液水提物对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症的保护作用及其作用机制。方法 把处于对数生长期的RAW264.7细胞随机分为Control、LPS组、SHQLY浓度组,采用CCK-8试剂检测SHQLY提取物对RAW264.7细胞的活性影响,酶联免疫法检测培养基上清中TNF-α和IL-6的含量,后续选取10μg和20μg两个浓度,利用DCFH-DA荧光探针法测定活性氧,Western-blot法检测P-ERK/ERK、P-p38/p38、P-JNK/JNK、P-Iκβα/Iκβα和P-NF-κB/NF-κB等蛋白表达情况,激光共聚焦显微镜观察经免疫荧光染色NF-κB入核情况。结果 SHQLY可以呈剂量依赖的抑制LPS诱导RAW264.7细胞炎症反应,可以抑制IL-6和TNF-α炎症因子的释放,抑制ROS的产生,Western-blot结果显示SHQLY通过抑制丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)和核因子(NF-κB)信号通路中磷酸化蛋白P-ERK、P-p38、P-JNK、P-IKβ-α和P-p65等蛋白磷酸化,同时抑制NF-κB转移入核。结论 SHQLY抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症,可能的抗炎机制是其抑制MAPKs/NF-κB信号通路蛋白磷酸化相关。

rfaE基因通过MAPKs/NF-κB信号通路对副猪嗜血杆菌LOS诱导猪肺泡巨噬细胞炎症反应中作用的研究

作者拟研究rfaE基因在副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)脂寡糖(LOS)刺激猪肺泡巨噬细胞(PAMs)信号通路分子的转录表达和MAPKs/NF-κB信号通路中的作用。提取HPS SC096株及其rfaE基因缺失株(ΔrfaE)和互补株(cΔrfaE)的LOS,分别用5和10μg HPS-LOS、ΔrfaE-LOS和cΔrfaE-LOS刺激PAMs,分别在不同时间点收集细胞,提取RNA和蛋白质。将提取的RNA反转录成cDNA,运用RT-PCR检测TLR4、MD2、NF-κB、MAP2 K2、ERK、P38和JNK的mRNA转录水平。测定提取蛋白质的浓度,利用Western blot方法检测NF-κB p65/phospho-NF-κB p65、IκBα、ERK1/2、JNK和p38/phospho-p38蛋白的表达量。结果表明用5和10μg HPS-LOS刺激细胞6、12和24h后,TLR4、MD2、MAP2K2、ERK、P38和JNK的mRNA转录水平均显著高于ΔrfaE-LOS刺激细胞后的以上转录因子的mRNA水平(P<0.05),但NF-κB的mRNA转录水平无显著差异。另外,用5和10μg HPS-LOS刺激细胞6和12h后,IκBα蛋白的表达量显著低于ΔrfaE-LOS刺激细胞后的IκBα蛋白的表达量(P<0.05),NF-κB p65和p38的磷酸化水平及ERK1/2和JNK蛋白的表达量显著高于ΔrfaE-LOS刺激细胞后NF-κB p65和p38的磷酸化水平及ERK1/2和JNK蛋白的表达量(P<0.05)。同时cΔrfaE-LOS刺激PAMs后TLR4、MD2、MAP2 K2、ERK、P38和JNK的mRNA转录水平以及NF-κB p65和p38的磷酸化水平和IκBα、ERK1/2和JNK蛋白水平能够恢复到HPS-LOS水平。以上试验结果证实在HPS-LOS诱导的炎症反应中,缺失rfaE基因后通过阻断MAPKs/NF-κB信号通路以减轻炎症反应。

四逆散通过MAPKs/NF-κB途径保护脂多糖致Raw264.7的细胞炎症

目的:观察四逆散(SNS)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠腹腔Raw264.7巨噬细胞炎症的保护作用,并探讨其可能的作用机制.方法:体外培养Raw264.7细胞,分为空白组,模型组,SNS低、中、高质量浓度组,光学显微镜下观察各组细胞形态变化,Elisa检测各组细胞培养基上清白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,Western-blot法检测各组细胞P-ERK/ERK、P-p38/p38、P-JNK/JNK,P-IKβ-α和P-p65表达量,免疫荧光法检测P65转核情况,激光共聚焦观察LPS与Raw264.7细胞膜binding的程度.结果:SNS可浓度依赖性地抑制LPS诱导的Raw264.7细胞分化,IL-6、TNF-α炎症因子的释放,降低丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)/核因子(NF-κB)途径中磷酸化蛋白P-ERK、P-p38、P-JNK,P-IKβ-α和P-p65含量,抑制p65转录入核,及LPS与Raw264.7细胞膜结合.结论:SNS可保护LPS诱导的Raw264.7细胞炎症,该作用可能与其抑制MAPKs/NF-κB通路磷酸化相关.

丹酚酸B通过抑制MAPKs/NF-κB信号通路减轻动脉粥样硬化模型小鼠肝脏炎症反应

目的探究丹酚酸B(salvianolic acid B,Sal B)对动脉粥样硬化模型小鼠肝脏炎症反应的影响及其作用机制。方法将32只♂LDLR-/-小鼠随机分为对照组、模型组、Sal B组、阿托伐他汀组。对照组给予普通饲料喂养,其余各组给予高脂饲料喂养12周。对照组、模型组生理盐水腹腔注射,Sal B组予以Sal B溶液腹腔注射,阿托伐他汀组以阿托伐他汀溶液灌胃12周。采用生化检测方法检测小鼠血清TC、TG、AST、ALT值。油红O染色观察小鼠主动脉窦斑块面积,HE染色法观察小鼠肝脏病理改变。RT-PCR、ELISA法检测IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA及含量,蛋白质印迹法测定小鼠肝组织VCAM、iNOS、JNK、p38、ERK1/2、IκB、NF-κB蛋白表达。结果与模型组比较,Sal B、阿托伐他汀降低小鼠血清TC、TG、AST、ALT水平(P<0.05),减小小鼠主动脉斑块面积,改善肝组织病理变化,下调小鼠IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA及含量(P<0.05),降低小鼠肝组织VCAM、iNOS蛋白水平,以及JNK、p38、ERK1/2、IκB、NF-κB蛋白磷酸化水平(P<0.05)。结论Sal B减轻动脉粥样硬化模型小鼠肝脏炎症反应,该作用可能与其抑制MAPKs/NF-κB信号通路相关。

基于TLR4/MAPKs/NF-κB信号通路探讨蠲痹汤对寒湿痹阻证类风湿关节炎模型大鼠的治疗作用及机制研究

目的:观察蠲痹汤对寒湿痹阻证模型类风湿关节炎(RA)模型大鼠的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法:将75只SPF级雄性SD大鼠,随机分为5组(n=15),正常对照组、模型组及蠲痹汤低(10 g/kg)、中(20 g/kg)、高(30 g/kg)剂量组。经左后足跖皮内注射完全弗氏佐剂(0.1 mL/只)持续刺激14 d,以建立佐剂性类风湿关节炎大鼠病理模型,后开始给予相应剂量的蠲痹汤,连续28 d。采用Elisa试剂盒检测血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10水平,免疫组化分析滑膜组织中COMP蛋白表达,Western blot检测各组大鼠COMP、TLR4、NF-κBP65、p-NF-κBP65、P38、p-P38蛋白的表达。结果:蠲痹汤能显著改善RA模型大鼠的精神状态、饮食、饮水量和滑膜组织的病理学改变,降低足肿胀率;调节血清中IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10水平;免疫组化和Western blot试验结果表明蠲痹汤能显著调节COMP、TLR4、NF-κBP65、p-NF-κBP65、P38、p-P38蛋白的表达。结论:蠲痹汤能改善类风湿关节炎,其机制与调节炎症和Toll样受体4/丝裂原活化蛋白激酶/核转录因子κB信号通路密切相关。

葫芦素E通过抑制MAPKs/NF-κB通路减轻哮喘小鼠气道炎症

目的:探讨葫芦素E对哮喘小鼠气道炎症及MAPKs和NF-κB信号通路的影响。方法:将40只健康小鼠随机分成对照组、模型组、葫芦素E低剂量组、葫芦素E高剂量组和地塞米松组。用卵清蛋白致敏法制备哮喘模型,观察各组支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞分类计数、肺组织炎症细胞浸润以及BALF中白细胞介素4(IL-4)、IL-5、IL-13及干扰素γ(IFN-γ)含量的变化;测定肺组织中磷酸化JNK(p-JNK)、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)和磷酸化NF-κB p65(p-p65)的含量。结果:与正常组比,模型组BALF中炎症细胞数量明显增加,并且MAPKs和NF-κB信号通路相关蛋白活性显著增强。我们发现高剂量葫芦素E可减轻哮喘小鼠气道炎症反应,并明显抑制MAPKs和NF-κB信号通路相关蛋白活性。病理组织学结果显示,模型组小鼠肺组织内有杯状细胞及支气管黏膜上皮细胞增生,肺泡内有炎症细胞浸润,管腔狭窄;各剂量葫芦素E处理组病理改变均较模型组显著减轻。结论:葫芦素E可以减轻哮喘小鼠气道炎症反应,其机制可能与抑制MAPKs和NF-κB信号通路有关。

基于MAPK/NF-κB信号通路探讨调气止咳方对咳嗽变异性哮喘大鼠气道炎症的影响及机制

目的基于MAPK/NF-κB信号通路探讨调气止咳方(麻黄、苦杏仁、浙贝母、黄芩、瓜蒌子等)对咳嗽变异性哮喘大鼠气道炎症的影响及机制。方法采用卵清蛋白致敏复制咳嗽变异性哮喘大鼠模型。将SD大鼠随机分组为空白组、模型组、地塞米松组(0.5 mg·kg^(-1))、孟鲁司特组(1.0 mg·kg^(-1))及调气止咳方低、中、高剂量组(9.6、19.2、38.4 g·kg^(-1)),每组10只;灌胃给药,每日1次,连续14 d。观察大鼠一般状况并记录雾化后2 min内大鼠的咳嗽次数;采用HE染色、Masson染色法观察大鼠肺组织病理变化;ELISA法检测血清白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;Western Blot法检测肺组织p38 MAPK、p-p38、NF-κB p65、p-p65蛋白表达水平;RT-qPCR法检测肺组织p38 MAPK、NF-κB p65 mRNA表达水平。结果与空白组比较,模型组大鼠的咳嗽次数显著增加(P<0.01),肺损伤病理评分及胶原纤维面积比显著升高(P<0.01);血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著升高(P<0.01);肺组织中p-p38、p-p65、p-p38/p38、p-p65/p65蛋白表达均显著上调(P<0.01),p38 MAPK、NF-κB p65 mRNA表达显著上调(P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠的咳嗽次数显著减少(P<0.01),肺损伤病理评分及胶原纤维面积比显著降低(P<0.01),血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著降低(P<0.01),肺组织中p-p38、p-p65蛋白表达及p38 MAPK、NF-κB p65 mRNA表达均明显下调(P<0.05,P<0.01);调气止咳方高剂量组大鼠肺组织中p-p38/p38、p-p65/p65蛋白表达比值均显著下调(P<0.01)。与地塞米松组和孟鲁司特组比较,调气止咳方高剂量组大鼠的咳嗽次数明显减少(P<0.05);与地塞米松组比较,调气止咳方高剂量组大鼠的血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平明显降低(P<0.01);与孟鲁司特组比较,调气止咳方高剂量组大鼠的血清IL-1β、TNF-α水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论调气止咳方能够改善卵清蛋白诱导的咳嗽变异性哮喘大鼠的咳嗽症状,减轻气道炎症细胞浸润及气道重塑,降低炎症细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平,其机制可能与调控MAPK/NF-κB信号通路有关。

游泳运动对慢性非细菌性前列腺炎大鼠p38MAPK/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨游泳运动对慢性非细菌性前列腺炎(CAP)大鼠p38MAPK/NF-κB信号通路的影响。方法:雄性SD大鼠分为运动组、CAP模型组、正常组,每组10只,注射消痔灵制备大鼠模型,运动组每天游泳运动1次,时间为50min,6d/周,共游泳运动4周,模型组和正常组不开展游泳运动;末次游泳运动结束后2h,股动脉取血处死大鼠,采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测大鼠血清p38MAPK、NF-κB p65、IL-1β、IL-4、TNF-α含量,观察三个组别大鼠前列腺组织病理学改变。结果:4周游泳运动结束后,模型组和运动组大鼠血清内p38MAPK、NF-κB p65、IL-1β、IL-4、TNF-α含量显著高于正常组(P<0.05),运动组大鼠血清内上述观察指标显著低于模型组(P<0.05);相关分析显示,CAP大鼠血清内IL-1β、IL-4、TNF-α水平与p38MAPK、NF-κB p65表达呈显著正相关(P<0.01),p38MAPK与NF-κB p65呈显著正相关(P<0.01);病理观察显示,与正常组比较,模型组大鼠前列腺组织慢性炎症病变明显,与模型组比较,运动组大鼠前列腺血管扩张程度、炎细胞浸润数量及范围、管腔狭窄及间质水肿纤维化的情况均有所减轻。结论:游泳运动能够抑制CAP大鼠血清内p38MAPK、NF-κB p65表达,下调IL-1β、IL-4、TNF-α水平,对大鼠CAP炎症发挥缓解作用。

党参多糖通过调控MAPK/NF-κB信号通路对脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠肺组织的保护作用

目的观察党参多糖对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)小鼠肺组织的保护作用,并探讨其作用机制。方法50只雄性昆明小鼠随机分为对照组,模型组,地塞米松组,党参多糖高剂量组(300 mg/kg)和党参多糖低剂量组(150 mg/kg)5个组。采用腹腔注射LPS法建立ALI小鼠模型。除对照组外,其余小鼠均根据分组给予灌胃给药。多参数肺功能检测系统检测小鼠0.3 s用力呼气量(FEV0.3)和用力肺活量(FVC)及其比值,苏木精-伊红(HE)染色法检测小鼠肺组织病理学变化,瑞氏-吉姆萨染色法检测小鼠肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞分类和计数,ELISA法检测BALF中IL-1β、IL-6、髓过氧化物酶(MPO)、TNF-α水平,Western blot法检测p-p38、p-IκB-α、p-p65蛋白表达量。结果与对照组比较,模型组小鼠出现了明显的肺病理损伤,FEV 0.3、FVC、FEV0.3/FVC检测值显著降低,肺组织湿质量/干质量(W/D)、BALF中性粒细胞、淋巴细胞、IL-1β、IL-6、MPO、TNF-α水平、p-p38 MAPK、p-IκB-α、p-p65蛋白表达显著增高(P<0.05)。而党参多糖可缓解模型组小鼠上述变化。结论党参多糖可通过抑制MAPK/NF-κB通路,减轻急性肺损伤模型小鼠肺组织病理损伤,降低炎症因子水平,改善肺功能。

超分子水杨酸对兔耳痤疮模型p38MAPK/NF-κB信号通路的影响

目的:探究超分子水杨酸对兔耳痤疮模型p38MAPK/NF-κB信号通路的影响机制。方法:将30只实验兔随机分成正常对照组、2%超分子水杨酸(Salicylic acid,SA)组、30%SA组、夫西地酸组、模型对照组,每组6只,并予以相应外用药物干预,连续4周,并分别于用药2周后、用药4周后检测p38MAPK、NF-κB、IL-1β、IL-8蛋白的表达。结果:结果显示,随着用药时间的延长,各组的p38MAPK、NF-κB、IL-1β、IL-8均呈下降趋势。用药前,各组间p38MAPK、NF-κB、IL-1β、IL-8蛋白表达均差异无统计学意义(P>0.05)。用药2周后,2%SA组、30%SA组、夫西地酸组p38MAPK、NF-κB、IL-1β、IL-8低于模型对照组(P<0.001);三个用药组之间p38MAPK、NF-κB、IL-1β两两比较差异无统计学意义(P>0.05);2%SA组IL-8低于30%SA组、夫西地酸组(均P<0.05);30%SA组与夫西地酸组IL-8差异无统计学意义(P>0.05)。用药4周后,三个用药组p38MAPK、NF-κB、IL-1β、IL-8低于模型对照组(P<0.05);2%SA组、30%SA组p38MAPK、NF-κB、IL-8低于夫西地酸组(P<0.05),2%SA组IL-8低于30%SA组(P<0.05);2%SA组与30%SA组p38MAPK差异无统计学意义(P>0.05);2%SA组、30%SA组与夫西地酸组IL-1β均差异无统计学意义(均P>0.05);2%SA组IL-1β低于30%SA组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:超分子水杨酸可通过抑制p38MAPK/NF-κB信号通路来发挥抗炎作用,且随着用药时间的延长疗效也在逐渐增加,并优于夫西地酸。

TPPU通过抑制p38 MAPK/NF-κB p65信号通路对阿尔茨海默病细胞模型的抗神经炎症作用

目的在Aβ25-35诱导的阿尔茨海默病(AD)小胶质细胞(BV2细胞)模型中,采用对BV2细胞进行干预,探讨1-三氟甲氧基苯基-3-(1-丙酰哌啶-4-基)脲(TPPU),TPPU是否具有抗神经炎症作用及其可能的抗炎机制。方法利用Aβ25-35作用BV2细胞构建AD细胞模型,CCK8法分别检测不同浓度Aβ25-35和TPPU处理对BV2细胞活性的影响,最终选择20μM Aβ25-35诱导BV2细胞48 h作为造模组,0.1μM TPPU预处理BV2细胞3h,20μM Aβ25-35诱导BV2细胞48 h作为治疗组进行后续实验。利用ELISA法检测丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,倒置荧光显微镜检测活性氧(ROS)产生,real-time PCR检测小胶质细胞M1表型促炎因子肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素-1β(IL-1β)基因mRNA表达水平和检测M2表型抗炎因子IL-10及标志物Arg1基因mRNA表达水平。通过Western blot法检测细胞中炎症因子TNF-α蛋白及p38 MAPK/NF-κB p65信号通路相关蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组BV2细胞活力降低(P<0.05),ROS显著升高(P<0.05),MDA含量显著增多(P<0.05),SOD活性显著下降(P<0.05),TNF mRNA、IL-1βmRNA表达水平明显上调(P<0.05),IL-10 mRNA、Arg1 mRNA表达水平明显下调(P<0.05),TNF-α蛋白及p-p38 MAPK、p-NF-κB p65蛋白表达明显上调(P<0.05)。与模型组相比,经TPPU预处理后,BV2细胞活力明显升高(P<0.05),ROS显著降低(P<0.05),MDA含量显著下降(P<0.05),SOD活性显著提高(P<0.05),TNF mRNA、IL-1βmRNA表达水平明显下调(P<0.05),IL-10 mRNA、Arg1 mRNA表达水平明显上调(P<0.05),TNF-α蛋白及p-p38 MAPK、p-NF-κB p65蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论TPPU抑制Aβ25-35诱导的BV2细胞炎症反应,促进BV2细胞由M1表型向M2表型极化,其机制可能与抑制p38MAPK/NF-κB p65信号通路激活有关。

抗奥合剂通过p38 MAPK/NF-κB信号通路和ACE2/Ang1-7/Mas轴缓解急性肺损伤研究

目的探讨抗奥合剂(KAHJ)治疗小鼠急性肺损伤(ALI)的作用及机制,为其可能作为缓解新型冠状病毒(COVID-19)感染后症状的药物提供依据。方法采用网络药理学方法预测KAHJ治疗ALI的主要活性成分、潜在靶点和相关信号通路。将C57BL/6J小鼠随机分为对照组、LPS组和LPS+KAHJ组。LPS+KAHJ组小鼠灌胃KAHJ(4.76 g·kg^(-1)·d^(-1),8.8 mL·kg^(-1)·d^(-1)),其余组小鼠灌胃生理盐水(8.8 mL·kg^(-1)·d^(-1))。14 d后,腹腔注射LPS(5 mg·kg^(-1))诱导ALI模型。收集小鼠血清和肺组织,通过组织病理学观察肺组织的病理变化。采用Western blot、qPCR、ELISA和IHC等方法评估KAHJ对ALI的改善作用。结果通过网络药理学筛选出疾病和药物共同的70个核心靶基因,并显示与多个信号通路密切相关,如MAPK、NF-κB、Apoptosis、COVID-19和肾素-血管紧张素系统(Ras)信号通路等。此外,通过实验验证发现KAHJ能改善小鼠ALI后的炎症和细胞凋亡,减少肺损伤和肺水肿,抑制肺纤维化。同时,KAHJ的作用机制与p38 MAPK和NF-κB的磷酸化以及ACE2/Ang1-7/Mas轴的调控也有着密切关系。结论KAHJ可能通过抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路和调控ACE2/Ang1-7/Mas轴缓解ALI,为缓解COVID-19感染后症状提供了补充和替代药物。

噻托溴铵调控MAPK/NF-κB信号通路对气道平滑肌细胞增殖的影响及机制研究

目的探究噻托溴铵通过MAPK/NF-κB信号通路对哮喘的影响及其潜在的机制。方法用10 ng·mL^(-1)血小板衍生生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)-BB和不同浓度(0、5、10、20、50μmol·L^(-1))噻托溴铵处理气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs),并通过CCK-8实验、克隆形成实验、划痕愈合实验和Transwell法分析ASMCs细胞增殖、迁移和侵袭;Western blot分析MMP2、MMP9、calponin和α-SMA的蛋白水平;Western blot检测MAPK/NF-κB信号通路的水平。结果噻托溴铵抑制PDGF-BB诱导的ASMCs的增殖、迁移和侵袭(P<0.05)。噻托溴铵调节ASMCs的表型转变(P<0.05)。噻托溴铵可以抑制PDGF-BB诱导的MAPK/NF-κB信号通路激活,降低p-38、p-JNK、p-ERK、p-p65、p-NF-κB的表达(P<0.05)。结论噻托溴铵可以通过阻断MAPK/NF-κB信号转导抑制ASMCs的增殖和迁移。推测噻托溴铵可以作为一种治疗哮喘的有前途的药物。

基于p38 MAPK/NF-κB/MLCK信号通路探讨半夏泻心汤修复肠黏膜屏障的作用机制

目的:探寻半夏泻心汤(BXD)在体内抑制肠道炎症反应及修复肠黏膜屏障的作用机制。方法:36只雌性SPF级SD大鼠随机分为空白组、模型组、西药组(美沙拉嗪组)以及半夏泻心汤低剂量组(BXD-低剂量组)、中剂量组(BXD-中剂量组)、高剂量组(BXD-高剂量组)。适应性喂养7 d后,除空白组外,其余各组大鼠自由饮用5%DSS 7 d构建溃疡性结肠炎大鼠模型,造模成功后,空白组与模型组灌胃生理盐水,西药组灌胃美沙拉嗪,0.054 g/d),半夏泻心汤低剂量组(2.205 g/kg)、中剂量组(4.41 g/kg)、高剂量组(8.82 g/kg)灌胃给予半夏泻心汤提取物,均给药15 d。采用疾病活动指数评估造模及药物治疗后大鼠的一般变化情况;苏木精-伊红(HE)染色法,确认结肠组织病变损伤程度;ELISA检测血清中炎性因子含量表达变化情况;qRT-PCR法、Western blot法检测p38 MAPK/NF-κB/MLCK/信号通路关键蛋白表达。结果:5%葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎模型大鼠出现体质量减轻、腹泻、脓血便及结肠缩短,造模成功。BXD及美沙拉嗪给药后,大鼠的DAI评分出现不同程度的降低。HE结果显示美沙拉嗪及高剂量BXD给药后明显改善了DSS导致的大鼠结肠组织的病理情况。酶联免疫吸附实验结果提示,高剂量BXD及美沙拉嗪给药后可以显著抑制大鼠促炎因子的表达水平,从而达到抑制肠道炎症的治疗效果。Western blot和qPCR结果表明,BXD可通过调控MAPK、MLCK、NF-κB、Occludin的表达量修复肠黏膜屏障。结论:半夏泻心汤可降低肠黏膜通透性以及修复受损的肠黏膜,其机制可能是通过抑制p38 MAPK/NF-κB/MLCK信号通路实现的。

基于miRNA155-5p介导的MAPK/NF-κB通路探讨尿石素A的抗炎机制

目的以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激RAW264.7炎症细胞模型为研究对象,基于miRNA155-5p调控的TLR4/MAPK/NF-κB通路探讨尿石素A(urolithin A,Uro A)的抗炎机制。方法通过转染过表达miR-155-5p-mimics及miR-NC至LPS诱导的RAW264.7细胞中,RT-qPCR法检测各组细胞miR-15-5p、p38 MAPK、JNK和ERK的mRNA表达。MTT法检测Uro A对细胞活力的影响;Griess法检测细胞上清液NO的含量;ELISA法检测细胞上清液PGE 2、IL-6、IL-1β和TNF-α的表达水平;Western blot法检测iNOS、COX-2、TLR4以及MAPK/NF-κB通路相关蛋白的表达水平。结果与miR-NC组比较,miRNA155-5p过表达组p38 MAPK、JNK和ERK mRNA表达水平明显升高(P<0.01)。与模型组比较,Uro A能明显抑制LPS诱导的miRNA155-5p、NO、PGE 2和TNF-α、IL-1β、IL-6(P<0.01),降低iNOS、COX-2蛋白表达水平(P<0.01),且呈浓度依赖性;此外,Uro A明显抑制TLR4蛋白的表达水平以及p38 MAPK、JNK、NF-κB p65、IκBα蛋白的磷酸化水平(P<0.05),并呈浓度依赖性;但对ERK1/2蛋白磷酸化没有显示出明显的抑制作用。结论Uro A能够明显抑制LPS诱导的炎症反应,机制与miRNA155-5p介导的TLR4/MAPK/NF-κB信号通路有关。

异泽兰黄素通过调控MAPK和NF-κB信号通路抑制RANKL诱导的破骨细胞分化

目的:探究异泽兰黄素(Eupatilin)对破骨细胞前体细胞向破骨细胞分化的作用和分子机制。方法:CCK-8法检测不同浓度的Eupatilin对破骨细胞前体细胞RAW264.7以及小鼠骨髓巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMDMs)细胞活性的影响。用核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导RAW264.7和BMDMs分化形成破骨细胞,同时使用不同浓度的Eupatilin(5、10、20μmol/L)干预,通过TRAP染色和F-actin染色评价Eupatilin对RANKL诱导的破骨细胞形成作用,qRT-PCR和Western blot检测破骨细胞相关标志基因的表达,Western blot检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和核因子-κB(NF-κB)信号通路分子的磷酸化水平。结果:20μmol/L Eupatilin对破骨细胞的分化具有显著的抑制作用,同时对相关标志基因抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphase,TRAP)、基质金属蛋白酶-9(matrix metallopeptidase-9,MMP-9)、组织蛋白酶K(cathepsin K,CTSK)等的表达也表现出有效的下调作用。Western blot结果显示Eupatilin显著抑制了RANKL诱导的MAPK和NF-κB信号通路分子的磷酸化水平。结论:Eupatilin通过调控MAPK和NF-κB信号通路,对RANKL诱导的破骨细胞分化具有显著的抑制作用。

鞣花酸通过TLR4-SRC/MAPK/NF-κB途径抑制脂多糖诱导RAW264.7巨噬细胞的炎症反应

目的基于Toll样受体4(TLR4)-酪氨酸激酶(SRC)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/核转录因子-κB(NF-κB)通路探讨鞣花酸的抗炎机制。方法采用不同浓度(0、0.5、5、25、50、75、100μmol·L^(-1))鞣花酸对RAW264.7巨噬细胞[或脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞]干预24 h,噻唑蓝(MTT)法检测RAW264.7巨噬细胞存活率,筛选最适给药浓度。实验分为空白对照组,模型组(0.5 mg·L^(-1)LPS),阳性对照地塞米松组(10μmol·L^(-1)),鞣花酸(5、25、50μmol·L^(-1))给药组。Griess法检测细胞上清液中一氧化氮(NO)的含量;采用ELISA法检测细胞上清液中前列腺素-2(PGE2)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平;采用Western blot法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶-2(COX-2)蛋白以及TLR4-SRC/MAPK/NF-κB通路相关蛋白的表达水平。结果MTT结果筛选出鞣花酸的干预浓度为5~50μmol·L^(-1)。与空白对照组比较,模型组PGE_(2)、NO和炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α表达显著升高(P<0.01);炎症标志物iNOS、COX-2蛋白表达水平显著升高(P<0.01),说明炎症模型建立成功。与模型组比较,鞣花酸能显著抑制LPS诱导NO、PGE_(2)的产生和降低TNF-α、IL-1β、IL-6水平(P<0.05,P<0.01),降低i NOS、COX-2蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01),且呈浓度依赖性;显著抑制TLR4蛋白的表达水平以及SRC、P38、JNK、p65、IκBα蛋白的磷酸化水平,并呈浓度依赖性。但对ERK1/2蛋白磷酸化没有显示出明显的抑制作用。结论鞣花酸可能通过TLR4-SRC/MAPK/NF-κB信号通路的调控抑制LPS诱导RAW264.7巨噬细胞的炎症反应,具体的调控机制有待进一步研究。

STAT1对肺结核大鼠巨噬细胞凋亡及MAPK/NF-κB信号通路的机制研究

目的探讨信号转导和转录激活因子1(STAT1)对肺结核大鼠巨噬细胞凋亡及MAPK/NF-κB信号通路的影响。方法将40只大鼠按照随机数字表达分为4组,即Control组、PTB组、STAT1-ASO组和STAT1-ASO+Anisomycin组,每组10只。计数肺组织结核分枝杆菌菌落;收集支气管肺泡巨噬细胞收集,流式细胞仪检测肺组织巨噬细胞细胞凋亡;HE染色检测肺组织病理学变化;ELISA检测血清中IL-6、IL-1β、TNF-α水平比较;检测肺组织中SOD、MDA水平;蛋白质印迹法检测创面组织中p38 MAPK、p-p38 MAPK、p65 NF-κB、p-p65 NF-κB蛋白表达。结果与Control组比较,PTB组大鼠肺组织结核分枝杆菌菌落数(9.12±0.81)、巨噬细胞凋亡率[(51.27±4.16)%]、血清中IL-6(215.42±15.33)、IL-1β(73.62±6.04)、TNF-α(81.24±5.79)水平、肺组织中MDA含量(9.54±1.72)及p-p38 MAPK/p38 MAPK(0.92±0.12)、p-p65 NF-κB/p65NF-κB比值(0.87±0.10)均明显增加,肺组织中SOD活性(31.27±2.85)明显降低(P<0.05);与PTB组比较,STAT1-ASO组大鼠肺组织结核分枝杆菌菌落数(3.87±0.40)、巨噬细胞凋亡率(8.91±0.43)、血清中IL-6(40.91±3.46)、IL-1β(21.54±1.79)、TNF-α水平(20.35±1.87)、肺组织中MDA含量(2.69±0.72)及p-p38 MAPK/p38 MAPK(0.45±0.07)、p-p65 NF-κB/p65 NF-κB比值(0.39±0.06)明显减少,肺组织中SOD活性(72.15±6.81)明显升高(P<0.05);与STAT1-ASO组比较,STAT1-ASO+Anisomycin组大鼠肺组织结核分枝杆菌菌落数(8.75±0.74)、巨噬细胞凋亡率(42.86±3.75)、血清中IL-6(192.11±13.61)、IL-1β(67.33±5.24)、TNF-α水平(75.26±5.11)、肺组织中MDA含量(9.01±1.65)及p-p38 MAPK/p38 MAPK(0.87±0.10)、p-p65 NF-κB/p65NF-κB比值(0.80±0.09)均明显增加,肺组织中SOD活性(36.49±3.01)明显降低(P<0.05)。结论抑制STAT1活化可抑制肺结核大鼠巨噬细胞凋亡,其作用机制可能和抑制MAPK/NF-κB信号通路活化有关。

基于MAPK/ERK/NF-κB信号通路探讨中西医结合治疗原发性痛经的研究进展

痛经(Dysmenorrhea)是临床常见妇科疾病,中医亦称“经行腹痛”,是指女性在行经前后或月经期,下腹部出现痉挛性疼痛,亦可放射至腰骶部,伴或不伴有恶心呕吐、腹泻及头晕乏力等全身症状。痛经可分为原发性和继发性两类,其中原发性痛经指生殖器官无器质性病变者;继发性痛经则是由于盆腔器质性疾病,如子宫内膜异位症、子宫腺肌症、子宫肌瘤、盆腔炎或宫颈狭窄等引起者。目前西医治疗原发性痛经多以解痉止痛的药物治疗,疗效虽显著而快速,但是副作用较大,停药后易复发;而中医在临床上四诊合参,辨证论治,不仅可以标本同治,也有助于预防调摄。通过梳理归纳近10年国内外原发性痛经的文献资料,基于MAPK/ERK/NF-κB信号通路探析原发性痛经的中西医研究进展,以期为中医药防治原发性痛经提供理论依据。现将原发性痛经的研究现状综述如下。

NF-κB/MAPKs信号调节骨关节炎的研究进展

骨性关节炎(Osteoarthritis,OA)是一种以慢性炎症、关节软骨进行性破坏和软骨下骨硬化为特征的退行性关节疾病,临床症状包括关节疼痛、僵硬、畸形和功能障碍,关节软骨的病理性变化是OA进展的重要环节,包括炎性改变、细胞凋亡、氧化应激和自噬等。NF-κB/MAPKs是参与关节软骨细胞各类生化过程中的重要信号通路,其活性的激活与抑制在骨性关节炎进展中起关键作用,本文就近年来NF-κB/MAPKs信号通路参与OA的发生发展及防治等方面的研究进行综述。