Ras-MAPKs信号通路在类风湿关节炎miRNA-146a调控DNMTs中的作用及温化蠲痹方干预作用研究

目的研究ras-MAPKs信号通路在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)微小RNA-146a(miRNA-146a)对DNA甲基化转移酶(DNA methyltransferase,DNMTs)调控中的作用,以及温化蠲痹方干预作用。方法提取RA患者、健康受试者PBMCs进行体外培养研究。将18例健康受试者随机分为6组,每组均为3例,分别为正常组,正常转染miRNA-146a组(转染组),正常转染miRNA-146a加中药组(中药1组),正常转染miRNA-146a加MAPKs特异性阻断剂PD98059组(阻断1组)、SB203580组(阻断2组)、SP600125组(阻断3组)。将符合中医辨证为寒热错杂、痰瘀痹阻型的活动期RA患者15例,随机分为5组,每组3例,分别为RA组,RA加中药组(中药2组),RA加MAPKs特异性阻断剂PD98059组(阻断4组)、SB203580组(阻断5组)、SP600125组(阻断6组)。对受试者PBMCs进行体外培养、转染、加通路阻断剂以及含药血清,运用实时定量PCR检测PBMC中miRNA-146a、DNMTs、RASGRP1的表达。结果阻断1~6组miRNA-146a表达降低,DNMTs表达升高,RASGRP1表达降低(均P<0.05)。中药1、2组RSAGRP1表达降低(均P<0.05)。结论ras-MAPKs信号通路可能参与了RA患者miRNA-146a对DNMTs的调控。中药温化蠲痹方可能通过下调RA患者RASGRP1表达作用于ras-MAPKs信号通路,影响miRNA-146a对DNMTs进行调控,达到治疗RA作用。

厄贝沙坦对糖尿病大鼠心肌损伤中MAPKs信号通路及相关因子的影响

目的:观察厄贝沙坦在糖尿病大鼠心肌损伤中发挥的作用,并探讨其对丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPKs)信号通路及其相关因子表达影响。方法:雄性SD大鼠50只,随机分为糖尿病4周(DM4W)组、糖尿病8周(DM8W)组、糖尿病8周+厄贝沙坦(DM8W+Ir)组、对照(Con)组、高糖高胆固醇饮食(HC)组,各10只。复制2型糖尿病大鼠模型成功后,DM8W+Ir组给予厄贝沙坦溶液灌胃干预;饲喂第4周时,处死DM4W组大鼠并留取心脏组织标本;饲喂8周后,处死剩余组大鼠。比较各组大鼠空腹血糖、体质量、心体比和左心室质量指数;取大鼠离体心肌行Masson染色观察心肌细胞纤维化改变;ELISA法检测心肌细胞内炎症细胞因子白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、IL-1表达水平;Western blotting法检测心肌组织丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(mitogen-activated protein kinase phosphatase-1,MKP-1)、P38丝裂原激活蛋白激酶(P38 mitogen-activated protein kinase,P38MAPK)、细胞外信号调节激酶(extracellular signal-related kinases,P-ERK1/2)蛋白表达水平。结果:HC组大鼠空腹血糖、体质量、心体比、左心室质量指数与Con组差异均无统计学意义(P>0.05),IL-1β、IL-6、IL-1表达水平和MKP-1、P38MAPK、P-ERK1/2蛋白表达与Con组差异亦均无统计学意义(P>0.05)。与Con组、HC组相比,各糖尿病组大鼠Masson染色心肌细胞明显纤维化改变;体质量减轻,心肌细胞内炎症细胞因子IL-1β、IL-6、IL-1表达水平升高,心肌组织MKP-1蛋白表达降低,P38MAPK、P-ERK1/2蛋白表达升高(P<0.05~P<0.01);与DM4W、DM8W组比较,DM8W+Ir组大鼠IL-1β、IL-6、IL-1表达水平降低,MKP-1蛋白表达升高,P38MAPK、P-ERK1/2表达蛋白降低(P<0.05~P<0.01)。结论:厄贝沙坦通过调控MAPKs信号通路发挥改善糖尿病心肌损伤的作用。

3，6-二羟黄酮降低白血病细胞HL-60抗氧化酶活性并影响MAPKs信号通路

目的观察3,6-二羟黄酮对白血病细胞HL-60抗氧化酶活性及MAPKs信号通路的影响,探讨其抗肿瘤作用分子机制。方法采用CASY-TT亚流式细胞分析技术测定3,6-二羟黄酮对白血病HL-60细胞存活率的影响;化学比色法测定3,6-二羟黄酮作用HL-60细胞后,细胞内抗氧化酶SOD、CAT、GSH-Px的活性变化;Westernblot检测胞内ERK、p38MAPK及JNK蛋白磷酸化水平变化。结果3,6-二羟黄酮显著降低HL-60细胞存活率,其作用呈剂量和时间依赖性;20μmol/L3,6-二羟黄酮作用于HL-60细胞,胞内抗氧化酶SOD、CAT、GSH-Px活性显著降低,MDA含量显著升高(P<0.05);Westernblot检测结果表明,20μmol/L3,6-二羟黄酮作用HL-60细胞2、8、24h,P-ERK蛋白水平明显降低(P<0.01)、P-p38MAPK和P-JNK的蛋白水平则显著升高(P<0.01)。结论3,6-二羟黄酮可显著降低HL-60细胞内抗氧化酶活性,增加胞内氧化应激压力,并由此影响MAPKs信号通路,这可能是其诱导HL-60细胞凋亡和增殖抑制的重要分子机制。

盐酸吡格列酮对糖尿病大鼠肾组织TOLL受体4/MAPKs信号通路的影响

目的:探讨吡格列酮对糖尿病肾病大鼠肾组织中TOLL受体4/MAPKs信号通路的影响。方法:将雄性SD随机分为对照组(n=8)和试验组(n=32)。试验组SD鼠造模成功后随机分为3组进行干预,应用Western blot检测对照组和干预组大鼠肾组织中丝裂原活化蛋白激酶ERK1/2及p38MAPK磷酸化水平。结果:与对照组比较,各组大鼠肾组织中TOLL受体4表达增强,其中ERK1/2与JNK磷酸化水平明显升高(P<0.05),但p38MAPK水平变化不明显(P>0.05);与模型组比较,吡咯列酮干预组大鼠肾组织中ERK1/2与p38MAPK磷酸化水平降低(P<0.05)。结论:吡格列酮通过TOLL受体4/MAPKs/ERK1/2与TOLL受体4/MAPKs/JNK信号通路来完成,延缓糖尿病肾病的发生与发展。

芦荟苷通过调控MAPKs信号通路诱导胃癌细胞凋亡

目的探讨芦荟苷对人胃癌MKN-28和HGC-27细胞凋亡的诱导作用及可能的分子机制。方法胃癌MKN-28和HGC-27细胞用含10%胎牛血清和NEAA(HGC-27细胞)的1640完全培养基常规培养,不同浓度的芦荟苷处理胃癌MKN-28和HGC-27细胞特定的时间,CCK-8实验检测芦荟苷对MKN-28和HGC-27细胞活力的影响;DAPI染色观察凋亡细胞核的形态改变;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;Western blotting检测凋亡相关蛋白PARP和procaspase-3的表达及MAPKs信号通路p38,ERK及JNK的磷酸化水平;p38,ERK及JNK的特异性抑制剂处理细胞,WB检测抑制剂的对p38,ERK及JNK激活的抑制效果,DAPI染色观察抑制剂对胃癌细胞凋亡的影响。结果芦荟苷浓度依赖性地抑制胃癌MKN-28和HGC-27细胞的活力,诱导胃癌细胞凋亡;芦荟苷处理胃癌细胞后,胞内JNK和p38的磷酸化水平明显增加,而ERK的磷酸化水平下降。特异性抑制剂阻断ERK活化,能够增强芦荟苷诱导的细胞凋亡,阻断p38和JNK的激活,能够部分逆转芦荟苷诱发的胃癌细胞凋亡。结论芦荟苷通过激活JNK和p38信号途径,抑制ERK信号途径诱导胃癌细胞凋亡。

桑枝乙醇提取物通过NF-κB和MAPKs信号通路对LPS诱导RAW264.7细胞的抗炎作用

目的研究桑枝乙醇提取物对LPS诱导RAW264.7细胞炎症模型的影响,并探究其分子作用机制。方法通过回流提取法制备桑枝乙醇提取物,并采用可见分光光度法检测样品中总黄酮的含量。采用MTT法检测桑枝乙醇提取物对RAW264.7细胞的毒性作用,采用Griess法检测细胞上清液一氧化氮(NO)水平,ELISA法检测细胞上清液白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,DCFH-DA荧光探针法检测细胞中活性氧(ROS)水平,倒置荧光显微镜观察细胞形态变化,RT-qPCR法检测细胞iNOS、COX-2、TNF-α、IL-6、IL-1β、Arg-1、IL-10 mRNA表达及细胞M1/M2表型的作用,Western blot法检测细胞iNOS、COX-2、NF-κB、MAPKs信号通路蛋白表达。结果桑枝乙醇提取物中总黄酮含量为(8.47±0.12)%。桑枝乙醇提取物能抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症因子水平(P<0.05,P<0.01),能调控RAW264.7细胞由M1向M2表型的转化,能下调促炎因子mRNA的转录表达和上调抑炎因子mRNA的转录表达(P<0.05,P<0.01),能下调NF-κB信号通路细胞核P65蛋白表达、IKBα磷酸化及MAPKs信号通路p38、JNK和ERK蛋白磷酸化(P<0.05,P<0.01)。结论桑枝乙醇提取物对LPS诱导RAW264.7细胞炎症模型具有较好的抗炎效果,其内在的分子机制可能与下调NF-κB和MAPKs信号通路有关。

细胞外组蛋白H4对淋巴细胞凋亡的影响及其与MAPKs信号通路的调控关系

目的探讨细胞外组蛋白H4对小鼠淋巴细胞Raw264.7细胞凋亡的影响及其与促分裂素原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路的调控关系。方法收集Raw264.7细胞分为低浓度刺激组、高浓度刺激组及对照组,分别加入50μg/m L、100μg/m L组蛋白H4及不做任何处理,采用FCM法检测各组细胞凋亡率,选取既能诱导细胞凋亡又具有较低细胞毒性的组蛋白刺激浓度进行后续实验。组蛋白H4在去除脂多糖污染后,使用筛选浓度刺激Raw264.7细胞,分别在刺激开始0、5、10、30、60、120 min收取细胞,Western blotting法检测细胞磷酸化ERK(p-ERK)、p-JNK、p-p38蛋白表达。分别使用ERK通路抑制剂、JNK通路抑制剂、p38通路抑制剂、DMSO细胞冻存液预处理Raw264.7细胞1 h,作为ERK抑制组、JNK抑制组、p38抑制组、阴性对照组,另设空白对照组正常培养不做处理,每组分别给予或不给予筛选浓度的组蛋白刺激,采用FCM法检测各组给予或不给予组蛋白刺激的细胞凋亡率。结果低浓度刺激组、高浓度刺激组细胞凋亡率均高于对照组(P均<0.05),低浓度刺激组、高浓度刺激组细胞凋亡率比较差异无统计学意义,但高浓度刺激组晚期细胞凋亡率及死亡率较低浓度刺激组增高(P均<0.05)。考虑到细胞毒性,选取50μg/m L作为组蛋白H4的刺激浓度。p-ERK蛋白表达在组蛋白刺激10 min及30 min时均高于0 min时,且在30 min时达到高峰,在60 min及120 min时降至初始水平;p-JNK蛋白表达在组蛋白刺激10 min及30 min时均高于0 min时,且在10 min时达到高峰,在60 min及120 min时降至初始水平(P均<0.05);p-p38蛋白表达在各时点差异均无统计学意义。空白对照组、阴性对照组组蛋白刺激的Raw264.7细胞凋亡率均高于没有组蛋白刺激的细胞(P均<0.05),ERK1、JNK及p38抑制组组蛋白刺激、不刺激的细胞凋亡率比较差异均无统计学意义。结论细胞外组蛋白H4刺激可促进淋巴细胞凋亡,其作用可能通过激活MAPKs信号通路中ERK和JNK信号分子来实现。

丹皮酚抑制人肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭及对MAPKs信号通路的影响

目的探讨中药单体丹皮酚对人肺癌A549细胞系增殖、侵袭和迁移能力以及MAPKs信号通路的影响。方法采用CCK-8法检测不同浓度丹皮酚对肺癌A549细胞系的抑制率,计算半数抑制浓度(IC50)。通过划痕实验、Transwell小室侵袭实验分别检测丹皮酚对A549细胞迁移及侵袭能力的影响。酶联免疫吸附法(ELISA)检测丹皮酚处理24 h后培养上清中基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9表达水平。Western blot法检测A549细胞内MAPKs信号通路中p-ERK、p-JNK及p-p38等关键蛋白表达水平的变化情况。结果丹皮酚对A549细胞的增殖具有抑制作用,呈浓度依赖性,对A549细胞的IC50为(54.68±3.59)μg·m L-1。丹皮酚以浓度依赖的方式抑制A549细胞的增殖、侵袭和迁移。ELISA检测发现丹皮酚可以抑制A549细胞分泌MMP-2、MMP-9蛋白。Western blot结果提示丹皮酚可抑制MAPKs信号通路中ERK通路磷酸化蛋白p-ERK的表达,而对p38、JNK通路的磷酸化水平无明显影响。结论在一定浓度范围内,丹皮酚可抑制人非小细胞肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭,下调分泌蛋白MMP-2和MMP-9的表达,其机制可能与抑制MAPKs信号通路中的ERK通路有关。

有氧运动对2型糖尿病大鼠腓肠肌氧化应激及MAPKs信号通路的影响

目的:研究有氧运动对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗、腓肠肌氧化应激以及MAPKs信号通路的影响。方法:健康雄性Wistar大鼠30只,随机分为正常对照组(C组)、糖尿病对照组(DC组)和有氧运动组(DE组),其中C组以普通饲料喂养,DC组和DE组以高脂饲料喂养。4周后,对DC组和DE组大鼠采用单次注射链脲佐菌素(STZ)的方法建立2型糖尿病大鼠模型,继续高脂饲料喂养4周后,DE组大鼠进行无负重游泳训练6周,训练期间C组大鼠继续以普通饲料喂养,DC组和DE组大鼠继续以高脂饲料喂养。6周后,处死所有大鼠,测试空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),测试腓肠肌超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性及丙二醛(MDA)水平,RT-PCR法测试腓肠肌p38和JNK mRNA表达,Western-blot法测试腓肠肌ERK1/2和p-ERK1/2表达。结果:和C组相比,DC组大鼠FBG、FINS和HOMA-IR均显著升高,腓肠肌SOD和GPX活性显著降低而MDA水平显著升高,腓肠肌p38、JNK1、JNK2 mRNA相对表达量显著升高,p-ERK1、ERK2和p-ERK2相对表达量显著升高而ERK1相对表达量差异无统计学意义。与DC组相比,DE组大鼠FBG、FINS和HOMA-IR均显著降低,腓肠肌SOD和GPX活性显著升高而MDA水平显著降低,腓肠肌p38和JNK1 mRNA相对表达量显著升高而JNK2 mRNA相对表达量无统计学意义,腓肠肌p-ERK1、ERK2和p-ERK2相对表达量显著升高而ERK1相对表达量无统计学意义。结论:有氧运动可激活糖尿病大鼠腓肠肌MAPKs信号通路系统,增强机体抗氧化酶SOD和GPX活性,改善糖尿病大鼠氧化应激状态,降低其胰岛素抵抗水平。

P13-K／Akt和MAPKs信号通路在氧化应激诱导人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用

目的探讨P13-K／Akt、有丝分裂原活化蛋白激酶（mitogen—activatedproteinkinases，MAPKs）信号通路在氧化应激诱导人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用。方法体外分离培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC），采用不同浓度的过氧化氢（H2O2）刺激细胞建立氧化应激损伤的模型，采用M1Tr法检测细胞活力，用原位末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡，双氢罗丹明123（DHR）染色检测细胞内活性氧（ROS）水平，Westernblot检测P13-K／Akt和MAPKs信号通路关键蛋白的表达情况。结果各浓度H2O2组细胞活力（OD值）较对照组明显降低（P〈0．01），各浓度H2O2组不同作用时间点OD值差异无统计学意义（P〉0．05）；200μmol／LH2O2刺激HU-VECs24h后，细胞凋亡率及胞内ROS水平较对照组明显升高（P〈0．05）；H2O2组P—Akt、P—C—Jun、p—p38及p—ERKl／2蛋白表达较对照组明显增加（P〈0．05），而采用抗氧化剂白藜芦醇（RES）预处理2h后，这-作用被逆转。结论P13-K／Akt和MAPKs信号通路可能参与ROS介导的HUVEC细胞凋亡。

水溶性番茄浓缩物Fruitflow通过调控血小板PI3K/Akt和MAPKs信号通路抑制其活化、聚集及血栓形成

[目的]血小板过度活化可促进血栓以及心血管疾病的发生发展,水溶性番茄浓缩物Fruitflow作为膳食补充剂在预防心血管疾病中发挥重要作用,但机制未明,且尚无Fruitflow对血栓形成影响的研究.本研究拟探讨Fruitflow对健康人血小板聚集、活化及血栓形成的影响,并探索其可能的作用机制.[方法]用不同浓度(0、20、40、80 mg/L)的Fruitflow与健康成人血小板在体外共孵育,使用血小板聚集仪测定血小板聚集率;用流式细胞仪测定血小板表面αIIbβ3活化及纤维蛋白原结合率;用体视荧光显微镜观察FeCl3诱导的小鼠肠系膜动脉血栓模型中血栓的形成;通过小鼠剪尾实验测定出血时间;用Westernblot检测血小板Akt、Erk1/2、JNK总蛋白表达及其磷酸化水平.[结果]在ADP诱导下,20、40、80 mg/L的Fruitflow均可有效降低血小板聚集率,且效应呈剂量依赖性,其中80 mg/L的Fruitflow干预组血小板聚集率从对照组的(43.75±5.91)%降到了(8.25±4.57)%(P<0.001);与对照组(79.36±6.26)相比,Fruitflow明显抑制血小板αIIbβ3的活化,其中80 mg/L剂量组降至(65.79±5.73,P<0.01);与对照组(69.34±6.63)相比,仅80 mg/L Fruitflow可明显降低血小板Fibrinogen binding百分比(56.70±8.68,P<0.05);Fruitflow可抑制FeCl3诱导的肠系膜动脉血栓形成,80 mg/L Fruitflow干预后血管堵塞时间由对照组的(22.50±4.86)延长至(39.20±4.61,P<0.01),同时与对照组(5.95±0.69)相比,80 mg/L Fruitflow干预组的出血时间(5.74±0.76)无明显变化(P>0.05);Fruitflow下调血小板Akt、Erk1/2和JNK蛋白的磷酸化水平,与对照组相比,80 mg/L Fruitflow干预后P-Akt/Akt由0.97±0.07降至0.33±0.13(P<0.001),P-Erk1/2/Erk1/2由0.89±0.09降至0.24±0.02(P<0.01),P-JNK/JNK由0.97±0.12降至0.45±0.04(P<0.01).[结论]抑制血小板PI3K/Akt和MAPKs信号可能是Fruitflow抑制血小板聚集活化和血栓形成的机制之一.

附植前胚胎耐热应激损伤的MAPKs信号通路调控的研究进展

热应激(环境高温或热性疾病)致附植前胚胎发育阻滞/死亡是导致家畜(尤其是奶牛)夏季妊娠率低的主要因素,就热应激时附植前胚胎丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinases,MAPKs)信号通路的级联激活调节细胞增殖和分化,阻遏细胞凋亡,促进生长因子表达等研究和热应激时MAPKs信号通路对牛附植前胚胎的信号调控进行综述,重点阐述MAPKs通路对附植前胚胎的重要作用。通过对近年来国内外对附植前胚胎受热损伤和MAPKs信号通路的级联激活以及它们之间关联的研究进展的总结,并结合青岛农业大学产科实验室近年来对降低夏季由热应激引起的细胞凋亡的相关研究,来揭示附植前胚胎耐热应激损伤的MAPKs信号通路调控的研究进展。MAPKs信号通路在附植前胚胎的信号转导通路中占有重要位置。在热应激作用下,附植前胚胎经历氧化、凋亡和合成调节蛋白过程,胚胎能否存活,取决于其自身耐热能力及胚胎生存环境,并需要借助于信号通路的精细调控,不论是内因还是外因都可能通过MAPKs信号通路级联调控胚胎存亡。热应激时,MAPKs信号通路各成员在附植前胚胎中的生物学效应各不相同,并且相互联系,共同调控着附植前胚胎的分化、凋亡等过程,转导刺激信号,参与机体内的反应。热应激后胚胎细胞的生死取决于自身抗热能力(内因)和其在子宫/培养的生存环境(外因),并且内、外因素均与MAPKs信号转导通路有关。

基于MAPKs信号通路探讨膝关节骨关节炎的研究进展

膝关节骨关节炎是以关节软骨遭到变性破坏而导致下肢疼痛,负重困难甚至造成肢体瘫痪的一种疾病。多发于老年人群,患病人数日益增加,约占骨关节炎的3/4。随着膝关节骨关节炎病变逐步的加重,其家庭与社会也将面临着严重的负担。丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-Activated Protein Kinase,MAPK)作为细胞凋亡与应激损伤的重要信号通路,与膝关节软骨细胞凋亡和滑膜组织破坏过程中存在密切关系,本研究综述主要针对MAPKs信号通路,此信号通路于膝关节骨关节炎介导机制及研究进展做一阐述。

二苯乙烯苷调控MAPKs信号通路诱导大肠癌SW116细胞凋亡

目的研究二苯乙烯苷(THSG)对大肠癌SW116细胞凋亡的诱导作用及其可能的分子机制。方法体外常规培养SW116细胞,采用不同剂量(0、5、10、20、40、80、120mmol/L)THSG处理SW116细胞,CCK8法分析不同剂量药物处理24、48、72h后细胞的存活率;不同浓度(0、10、20、40mmol/L)THSG干预SW116细胞24h后,Annexin/PI双染后流式细胞仪检测SW116细胞凋亡情况,Western blot方法检测SW116细胞中凋亡相关蛋白PARP和Pro-caspase 3的表达及MAPKs信号通路p38、ERK、JNK的磷酸化水平;p38、ERK、JNK特异性抑制剂干预细胞后,Western blot方法检测抑制剂对p38、ERK、JNK磷酸化的抑制作用。结果THSG呈剂量和时间依赖性地抑制大肠癌SW116细胞的增殖,诱导细胞凋亡;THSG干预SW116细胞后,Cleaved PARP表达显著升高、Pro-caspase 3表达显著降低,胞内p38和JNK磷酸化水平显著升高(P<0.05),然而ERK磷酸化水平显著降低(P<0.05)。结论特异性抑制剂阻断ERK激活,可以增强THSG诱导SW116细胞凋亡,特异性阻断p38、JNK活化,能够部分逆转THSG对p38和JNK磷酸化和细胞凋亡的诱导作用。THSG通过激活p38和JNK信号传导,抑制ERK信号途径,诱导大肠癌SW116细胞凋亡。

MAPKs信号通路抑制剂对红耳龟渗透压调节基因表达的影响

为了解丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路对盐度耐受下红耳龟Trachemys scripta elegans渗透压相关调节基因的影响,本研究应用JNK、ERK、p38MAPK抑制剂处理红耳龟后,置于淡水及5‰盐度水环境中,24 h后取肾脏组织,应用实时荧光定量PCR方法检测渗透压调节相关基因的mRNA相对表达量。结果表明,盐度环境下红耳龟肾脏中水通道蛋白3(AQP3)、热休克蛋白70(HSP70)、醛糖还原酶(AR)、糖皮质激素诱导蛋白激酶(SGK1)、肌醇转运蛋白(SMIT)的mRNA相对表达量显著升高,与淡水组差异显著(P<0.05)。不同浓度的JNK、ERK、p38MAPK抑制剂均能下调HSP70、AR的mRNA相对表达量,与未用抑制剂处理的5‰盐度组相比,差异显著(P<0.05);此外,ERK、p38MAPK抑制剂显著降低了AQP3 mRNA相对表达量(P<0.05),JNK、p38MAPK抑制剂显著降低了SMIT mRNA相对表达量(P<0.05);SGK1 mRNA相对表达量随p38MAPK抑制剂浓度的增加呈下降趋势,且在高浓度(25 mg·kg^(-1))下的表达量最低(P<0.05)。研究结果表明,红耳龟在适应半咸水过程中,MAPKs信号通路对渗透压有一定的调节作用。

MAPKs信号通路在动脉粥样硬化发生发展中的调控作用

丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)信号通路是生物体内重要的信号传导通路,其主要参与调控细胞的增殖、生长、分化、凋亡和炎症反应等多种生理病理过程。MAPKs信号通路在多种心血管疾病的病理过程中起着重要调控作用。动脉粥样硬化(athrosclerosis,AS)所致的各种急重症严重危害人类的健康,发病率呈逐年上升的趋势,但是动脉粥样硬化发生发展的分子机制尚不完全清楚。近年来,MAPKs信号通路在动脉粥样硬化(athrosclerosis,AS)的发生发展中的作用已成为是研究的热点。

二氢杨梅素调控MAPKs信号通路抑制SMMC-7721细胞凋亡和迁移的分子机制研究

研究二氢杨梅素(ampelopsin, AMP)在体外诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡和抑制细胞迁移的作用,并初步探讨其分子机制。用不同浓度的AMP处理SMMC-7721细胞,采用CCK-8法和集落形成实验检测细胞增殖情况;倒置显微镜下观察细胞形态改变;DAPI染色检测细胞核形态变化;Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡率;Transwell和细胞划痕愈合实验检测细胞的迁移和转移能力;运用Western blot法检测相关蛋白。结果表明, AMP对肝癌SMMC-7721细胞具有显著的增殖抑制及凋亡诱导作用, 24 h的半数有效抑制浓度(IC50)为38.98μg·mL-1;SMMC-7721细胞发生典型的凋亡形态改变,细胞贴壁性差,细胞皱缩,变圆,细胞核出现高亮的蓝染区;50μg·mL-1AMP处理SMMC-7721细胞24 h后,细胞凋亡率显著增加,从15%增加到55.1%;对凋亡相关蛋白PARP (poly ADPribose polymerase)分析发现, AMP处理SMMC-7721细胞后, PARP出现切割条带,且随着AMP剂量的增加,切割条带显著增强;细胞划痕愈合实验发现AMP能抑制细胞的迁移能力;Transwell实验证实AMP能够显著抑制穿膜细胞数,降低细胞的侵袭能力;检测基底膜降解关键蛋白酶发现,基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)-2和9的表达量均减少;进一步分析细胞EMT相关蛋白发现, 50μg·mL-1 AMP作用24 h后, E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达上调, N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达下调;MAPKs家族ERK在AMP处理1 h后达到峰值, JNK的最大活化时间在12 h,而P38在4 h内被AMP激活, 2 h磷酸化水平最高, 4 h后AMP反而抑制了P38的磷酸化,抑制作用一直持续到24 h,并且AMP对MAPKs家族蛋白的激活具有浓度依赖性。可见, AMP不仅有效抑制SMMC-7721细胞增殖和诱导凋亡,还能显著降低其迁移和侵袭能力,并提示其作用机制可能与激活MAPKs信号通路与逆转肿瘤细胞EMT有关,这为AMP的抗肝癌治疗作用和解析其具体分子机制提供新的思路和理论依据。

尼古丁对PDLFs细胞MAPKs信号通路影响

目的探讨尼古丁诱导人牙周膜成纤维细胞(PDLFs)凋亡过程中丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路的作用及作用机制。方法采用不同浓度的尼古丁(1、10和100μg/mL)作用于PDLFs细胞24 h后,使用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定JAK 1、JAK 2、MAPKK、MAPK、JNK、p 38和ERK的基因表达水平;Western blot检测caspase-3蛋白的表达水平。结果浓度分别为1、10和100μg/mL的尼古丁作用于PDLFs细胞24 h后,JAK 1转录水平表达量分别为(65.17±8.45)、(106.17±22.22)和(115.50±8.12),JAK 2转录水平表达量分别为(103.00±13.13)、(118.17±13.17)、(159.00±13.74),MAPK转录水平表达量分别为(126.69±18.20)、(143.02±13.97)、(172.64±26.43),MAPKK转录水平表达量分别为(79.17±4.49)、(115.67±7.66)、(122.33±8.41),p 38转录水平表达量分别为(110.64±11.14)、(128.54±11.72)、(132.90±11.99),JNK转录水平表达量分别为(106.16±26.89)、(123.17±13.09)、(132.68±11.97),Caspase 3转录水平表达量分别为(131.52±19.85)、(144.76±13.87)、(153.59±13.85),Caspase 3蛋白翻译水平表达量分别为(128.33±13.50)、(144.00±12.53)、(153.00±12.77),与正常对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);随着尼古丁剂量的增加,这些基因表达均呈逐渐增高趋势;而ERK的表达水平则无明显变化。结论尼古丁通过介导p 38-MAPK和JNK-MAPK通路诱导人PDLFs细胞凋亡,并导致凋亡执行蛋白Caspase 3的表达增加。

基于MAPK/NF-κB信号通路探讨调气止咳方对咳嗽变异性哮喘大鼠气道炎症的影响及机制

目的基于MAPK/NF-κB信号通路探讨调气止咳方(麻黄、苦杏仁、浙贝母、黄芩、瓜蒌子等)对咳嗽变异性哮喘大鼠气道炎症的影响及机制。方法采用卵清蛋白致敏复制咳嗽变异性哮喘大鼠模型。将SD大鼠随机分组为空白组、模型组、地塞米松组(0.5 mg·kg^(-1))、孟鲁司特组(1.0 mg·kg^(-1))及调气止咳方低、中、高剂量组(9.6、19.2、38.4 g·kg^(-1)),每组10只;灌胃给药,每日1次,连续14 d。观察大鼠一般状况并记录雾化后2 min内大鼠的咳嗽次数;采用HE染色、Masson染色法观察大鼠肺组织病理变化;ELISA法检测血清白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;Western Blot法检测肺组织p38 MAPK、p-p38、NF-κB p65、p-p65蛋白表达水平;RT-qPCR法检测肺组织p38 MAPK、NF-κB p65 mRNA表达水平。结果与空白组比较,模型组大鼠的咳嗽次数显著增加(P<0.01),肺损伤病理评分及胶原纤维面积比显著升高(P<0.01);血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著升高(P<0.01);肺组织中p-p38、p-p65、p-p38/p38、p-p65/p65蛋白表达均显著上调(P<0.01),p38 MAPK、NF-κB p65 mRNA表达显著上调(P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠的咳嗽次数显著减少(P<0.01),肺损伤病理评分及胶原纤维面积比显著降低(P<0.01),血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著降低(P<0.01),肺组织中p-p38、p-p65蛋白表达及p38 MAPK、NF-κB p65 mRNA表达均明显下调(P<0.05,P<0.01);调气止咳方高剂量组大鼠肺组织中p-p38/p38、p-p65/p65蛋白表达比值均显著下调(P<0.01)。与地塞米松组和孟鲁司特组比较,调气止咳方高剂量组大鼠的咳嗽次数明显减少(P<0.05);与地塞米松组比较,调气止咳方高剂量组大鼠的血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平明显降低(P<0.01);与孟鲁司特组比较,调气止咳方高剂量组大鼠的血清IL-1β、TNF-α水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论调气止咳方能够改善卵清蛋白诱导的咳嗽变异性哮喘大鼠的咳嗽症状,减轻气道炎症细胞浸润及气道重塑,降低炎症细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平,其机制可能与调控MAPK/NF-κB信号通路有关。

叶酸通过JNK/p38 MAPK信号通路调节小鼠C2C12成肌细胞分化

目的:观察叶酸(folic acid,FA)对小鼠C2C12成肌细胞增殖和分化的影响并探讨其作用机制。方法:(1)在小鼠C2C12成肌细胞增殖阶段,采用不同浓度(0、2.5、5、10和20μmol/L)的FA处理C2C12细胞,显微镜下观察各组细胞的状态,MTT法检测细胞活力,EdU法检测细胞增殖情况。(2)在小鼠C2C12成肌细胞分化阶段,将细胞分为对照(control,Ctrl)组(0μmol/L FA)和FA组(10μmol/L FA),于分化的第2天和第4天,采用免疫荧光染色和Western blot检测成肌细胞分化相关蛋白成肌细胞决定蛋白1(myoblast determination protein 1,MyoD)、成肌蛋白(myogenin,MyoG)和肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MyHC)的表达水平,并统计各组细胞肌管形成情况。(3)在小鼠C2C12成肌细胞分化第4天时,加入FA处理0、1、3和6 h,采用Western blot检测各时点c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、磷酸化JNK(phosphorylated JNK,p-JNK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)和磷酸化p38 MAPK(phosphorylated p38 MAPK,p-p38 MAPK)蛋白水平。(4)将分化4 d的小鼠C2C12成肌细胞分为Ctrl组、FA组、SP600125(JNK特异性抑制剂)组、SB2035805(p38 MAPK特异性抑制剂)组、FA+SP600125组和FA+SB203580组。C2C12成肌细胞先接受10μmol/L的SP600125或SB203580处理1 h,再经10μmol/L的FA处理24 h,FA组经10μmol/L FA处理24 h,Ctrl组不作处理。采用Western blot检测p-JNK、JNK、p-p38 MAPK、p38 MAPK和MyHC蛋白水平。结果:(1)与0μmol/L FA组相比,其余各浓度组的细胞数量明显增多,细胞活力显著提高(P<0.05),EdU阳性细胞率均显著增加(P<0.05)。(2)与Ctrl组相比,FA组MyoD、MyoG和MyHC的表达水平均显著提高(P<0.05),肌管融合指数显著增加(P<0.05或P<0.01)。(3)与0 h组相比,FA处理1、3和6 h后p-JNK/JNK和p-p38 MAPK/p38 MAPK的比值均显著升高(P<0.05或P<0.01),且随着处理时间的延长,p-JNK/JNK和p-p38 MAPK/p38 MAPK的比值呈现逐渐升高的趋势。(4)与Ctrl组相比,FA组p-JNK、p-p38 MAPK和MyHC蛋白水平显著升高(P<0.01);与FA组相比,FA+SP600125组p-JNK和MyHC蛋白水平显著降低(P<0.05),FA+SB203580组p-p38 MAPK和MyHC蛋白水平显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:FA可以通过激活JNK/p38 MAPK信号通路促进小鼠C2C12成肌细胞分化。