自噬相关基因Beclin1和MAPLC3在肺癌组织中的表达及其意义

背景与目的:研究发现自噬相关基因表达的下调与肿瘤的发生关系密切。本研究检测人非小细胞肺癌标本中自噬相关基因Beclin1和微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein1light chain3,MAPLC3)的表达,并探讨其意义。方法:采用免疫荧光染色、逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和Western blot方法检测肺癌组织、癌旁组织和非癌组织中Beclin1、MAPLC3mRNA和蛋白的表达。结果:免疫荧光染色显示Beclin1在肺癌组织中表达较低,阳性率为8.3%,而在癌旁组织和非癌组织阳性率均为100%(χ2=199.40,P<0.01);MAPLC3在肺癌组织中阳性率为13.9%,而在癌旁组织和非癌组织中阳性率均为100%(χ2=182.75,P<0.01)。Beclin1mRNA在肺癌组织中的相对表达量为1.30±0.44,与在癌旁组织(1.69±0.59)及非癌组织(1.67±0.48)中的相对表达量比较差异有统计学意义(F=6.6,P<0.01);MAPLC3mRNA在肺癌组织中相对表达量为4.55±1.23,与在癌旁组织(6.73±1.31)及非癌组织(6.90±1.87)中的相对表达量比较差异亦有统计学意义(F=14.1,P<0.01)。Westernblot检测Beclin1蛋白在肺癌组织中的相对表达量为3.49±0.72,与癌旁组织(5.31±1.16)和非癌组织(6.33±1.58)中的相对表达量比较差异有统计学意义(F=9.73,P<0.01);MAPLC3蛋白在肺癌组织中的相对表达量为2.43±0.35,与癌旁组织(3.12±0.73)和非癌组织(3.41±0.90)中的相对表达量比较差异也有统计学意义(F=3.22,P=0.04)。结论:自噬相关基因在肺癌组织中表达下调,这可能与肺癌的发生、发展相关。

侵袭性垂体腺瘤中自噬相关基因Beclin-1和MAPLC3的表达

目的检测自噬相关基因Beclin-1和微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein3,MAPLC3)在侵袭性和非侵袭性垂体腺瘤组织中的表达情况,探讨其与侵袭性垂体腺瘤侵袭性的关系。方法 61例垂体腺瘤手术标本按侵袭性垂体腺瘤综合判定方法分为侵袭组和非侵袭组,采用免疫荧光检测Beclin-1和MAPLC3蛋白的表达,RT-PCR法检测Beclin-1和MAPLC3mRNA的表达,分析侵袭组和非侵袭组Beclin-1和MAP1LC3表达水平的差异。结果 61例垂体瘤患者中,32例为侵袭性垂体腺瘤,29例为非侵袭性垂体腺瘤。侵袭性垂体腺瘤组Beclin-1的蛋白和mRNA表达均低于非侵袭性腺瘤组(P<0.05),MAPLC3的蛋白和mRNA表达也均低于非侵袭性腺瘤组(P<0.05),差别具有统计学意义。结论自噬相关基因Beclin-1和MAPLC3在侵袭性垂体腺瘤中的表达下调,提示其可能与侵袭性垂体腺瘤的侵袭性有关。

自噬相关基因Beclin1和MAPLC3在急性白血病骨髓单个核细胞中的表达及其意义

本研究旨在检测人急性白血病(AL)骨髓单个核细胞中自噬相关基因Beclin1和微管相关蛋白质轻链3(MAPLC3)的表达,并探讨其意义。采用透射电子显微镜(TEM)和RT-PCR方法检测初治、复发难治、完全缓解(CR)的急性白血病患者和正常人骨髓单个核细胞(BMMNC)中的自噬活性以及Beclin1、MAPLC3mRNA的表达。结果表明:急性白血病初治组骨髓单个核细胞自噬活性、Beclin1和MAPLC3mRNA表达分别为80%、0.68±0.18、0.24±0.06;在难治复发组分别为100%、0.79±0.09、0.30±0.07;在完全缓解组分别为40%、0.52±0.15、0.16±0.04;在正常对照组分别为20%、0.57±0.13、0.16±0.05。初治组和难治复发组自噬活性和Beclin1、MAPLC3mRNA的相对表达量均高于正常对照组,差异有统计学意义(p<0.05)。完全缓解组和正常对照组之间比较差异无统计学意义(p>0.05)。结论 :初治组急性白血病骨髓单个核细胞中自噬活性和自噬相关基因Beclin1、MAPLC3mRNA的表达均上调,在难治复发组自噬活性和自噬相关基因Beclin1、MAPLC3mRNA的表达上调尤为明显,这可能与急性白血病的发生、发展及其耐药相关。

FoxO1及自噬相关基因Beclin1和MAPLC3在胃癌组织的表达及意义

目的探讨叉头转录因子O亚家族1(FoxO1)及自噬相关基因Beclin1和微管相关蛋白轻链3(MAPLC3)在胃癌组织的表达及意义。方法收集本院2015年1月至2016年6月收治的82例手术切除的胃癌组织(胃癌组)及67例癌旁正常组织(对照组),采用荧光实时定量PCR(qPCR)法检测FoxO1、Beclin1及MAPLC3水平,比较组间的水平变化并分析胃癌组中FoxO1、Beclin1及MAPLC3表达变化的相关性,分析组织FoxO1、Beclin1及MAPLC3水平变化与胃癌临床病理参数[性别、年龄、TNM分期、分化程度、部位、淋巴结转移及癌胚抗原(CEA)水平]的关系。结果qPCR检测结果显示,胃癌组的FoxO1、Beclin1及MAPLC3水平依次为(0.489±0.032)、(0.148±0.012)和(0.581±0.038),均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);胃癌组的FoxO1水平与Beclin1水平呈正相关(r=0.270,P=0.014),Beclin1水平与MAPLC3水平呈正相关(r=0.351,P=0.001),但FoxO1水平与MAPLC3水平无关(r=0.208,P=0.061);FoxO1表达与TNM分期、分化程度及淋巴结转移均有关,Beclin1表达与TNM分期、淋巴结转移及CEA水平均有关,且MAPLC3表达与TNM分期、分化程度及CEA水平均有关。结论FoxO1、Beclin1及MAPLC3在胃癌组织中表达降低,且均与TNM分期有关,对胃癌诊断及病情评估有一定价值。

自噬相关基因MAPLC3在放射损伤人骨髓间充质干细胞中的表达

目的探讨人骨髓间充质干细胞(hBMMSCs)放射损伤后自噬水平的变化。方法利用X线8Gy照射体外培养的hBMMSCs,应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测自噬相关基因微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein1 light chain 3,MAPLC3)的mRNA表达。结果正常对照组中MAPLC3呈低表达,而8GyX线照射后2h其表达明显升高(P<0.05)。结论 hBMMSCs放射应激时存在自噬的活化。

自噬基因Atg5和MAPLC3在急性白血病中的表达及其意义

目的探讨急性白血病(acute leukemia,AL)骨髓单个核细胞(bone marrow mononuclear cells,BMMNC)中自噬基因Atg5和MAPLC3的表达及其临床意义。方法采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测150例AL患者和30例正常人BMMNC中Atg5和MAPLC3 mRNA的表达水平,对检测结果进行统计学分析。结果与对照组相比,急性髓系白血病(acute myelogenous leukemia,AML)各危险度组的Atg5和MAPLC3 mRNA表达水平均明显降低,且差异均有统计学意义(P均<0.01),从低危组、中危组至高危组,其Atg5和MAPLC3 mRNA表达水平逐步降低,组间两两比较,差异均有统计学意义(P均<0.01);与对照组相比,急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)各危险度组Atg5和MAPLC3 mRNA的表达水平均明显增高,差异均有统计学意义(P均<0.01),高危组患者的Atg5和MAPLC3mRNA表达水平明显低于标危组,差异均有统计学意义(P均<0.01);对照组和AL患者BMMNC中Atg5 mRNA水平与MAPLC3均呈显著正相关(P均<0.01)。结论自噬基因Atg5和MAPLC3 mRNA在AL中均有表达,且其表达水平呈正相关。AML患者的自噬活性明显降低,而ALL患者的自噬活性明显增高,随着危险度的增高,两种类型白血病自噬活性均星明显下降趋势。

自噬相关蛋白Beclin1、MAPLC3在胃癌中的表达及临床意义

目的探讨胃癌组织中自噬相关蛋白Beclin1与微管相关蛋白轻链3(MAPLC3)的表达及其临床意义。方法采用免疫组化En-Vision法检测59例胃癌组织和相应的癌旁组织中Beclin1及MAPLC3的表达水平,分析其与多种胃癌临床病理参数之间的关系。结果在胃癌组织中Beclin1和MAPLC3的阳性表达率分别为40.7%和44.1%,癌旁组织的阳性表达率分别为100%、93.2%,癌组织明显低于癌旁组织(P<0.05);Beclin1和MAPLC3的表达水平与胃癌的浸润深度、淋巴结转移及TNM分期相关(P<0.05);胃癌组织中Beclin1和MAPLC3的表达水平呈正相关(r=0.425,P<0.05)。结论胃癌组织中Beclin1和MAPLC3表达水平均明显低于癌旁组织,且两者之间呈正相关,两者的低表达可能共同促进胃癌的淋巴结转移。

老年骨肉瘤术后组织中Beclin1、微管相关蛋白3和磷酸酯酶与张力蛋白同源物的表达及意义

目的检测老年骨肉瘤术后组织中Beclin1、微管相关蛋白3(MAPLC3)和磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)的表达,探讨其临床意义。方法以62例老年骨肉瘤术后组织作为观察组,52例骨样骨瘤术后组织作为对照组。应用免疫组化方法检测两组Beclin1、MAPLC3和PTEN的表达。结果观察组Beclin1、MAPLC3和PTEN表达的阳性率明显低于对照组。观察组Beclin1、MAPLC3和PTEN的表达与肿瘤的最大径、TNM分期、分级及Ki67指数相关。观察组Beclin1和MAPLC3、MAPLC3和PTEN的表达具有正相关性。结论老年骨肉瘤术后组织中Beclin1、MAPLC3和PTEN均低表达,且具有相关性。联合检测Beclin1、MAPLC3和PTEN的表达对判断骨肉瘤患者的生物学行为有重要意义。

自噬相关基因Beclin1和MAPLC3在乳头状甲状腺癌的表达及意义

目的检测人甲状腺乳头状癌标本中自噬相关基因Beclin1和微管相关蛋白轻链3（MAPLC3）的表达，并探讨其意义。方法采用Westernblot方法检测甲状腺乳头状癌（PTC）组织和甲状腺良性疾病组织中以及正常甲状腺组织中Beclin1和MAPLC3蛋白的表达。结果Westernblot检测Beclin1在甲状腺乳头状癌的相对表达量为3．05±0．43，与甲状腺良性疾病组织（5．48±0．63）和正常甲状腺组织（5．93±0．88）中的相对表达量比较差异有统计学意义（F=205．30，P〈0．05）；MAPLC3在甲状腺乳头状癌的相对表达量为2．17±0．37，与甲状腺良性疾病组织（3．18±0．49）和正常甲状腺组织（3．55±0．53）中的相对表达量比较差异有统计学意义（F=91．53，P〈0．05）。结论Beclin1和MAPLC3蛋白在甲状腺乳手状癌中的表达明显低于甲状腺良性疾病组织以及正常甲状腺组织，表达的差异有统计学意义。自噬相关基因在甲状腺癌组织中的表达下降，可能与甲状腺癌的发生、发展相关。

胃癌组织中FoxO1、MAPLC3、Beclin1的表达及临床意义

[目的]检测胃癌组织中叉头转录因子O亚家族1(FoxO1)、微观相关蛋白轻链3(MAPLC3)和自噬相关基因Beclin1的表达情况,并探究其临床意义。[方法]胃腺癌患者手术切除的胃癌组织95例、癌旁组织49例,采用免疫组化实验检测组织样本中FoxO1、MAPLC3、Beclin1蛋白表达情况;分析胃癌组织中FoxO1、MAPLC3、Beclin1蛋白表达变化与患者临床病理参数的关系,并进行相关性分析。[结果]免疫组化结果显示,胃癌组织中FoxO1、MAPLC3、Beclin1蛋白的阳性表达率分别为31.58%(30/95)、44.21%(42/95)、40.00%(38/95),均低于癌旁组织,差异均有统计学意义(均P<0.05)。胃癌组织中,FoxO1蛋白表达与肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移和TNM分期有关(均P<0.05);MAPLC3和Beclin1蛋白表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移和TNM分期有关(均P<0.05),三者共表达阳性率与肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移和TNM分期有关(均P<0.05)。Spearman相关检验结果显示,胃癌组织中,FoxO1水平与MAPLC3水平呈正相关(r=0.345,P=0.017),FoxO1水平与Beclin1水平呈正相关(r=0.385,P<0.001),且MAPLC3水平与Beclin1水平呈正相关(r=0.604,P<0.001)。[结论]胃癌组织中,FoxO1、MAPLC3、Beclin1蛋白表达均降低,且均与患者较差临床病理参数有关。FoxO1、MAPLC3、Beclin1对胃癌患者的诊断和病情进展评估具有一定价值。

大鼠增龄过程中髓核组织Beclin-1和微管相关蛋白轻链3的表达及其意义

目的探讨在增龄过程中SD大鼠髓核组织中Beclin-1和微管相关蛋白轻链3（MAPLC3）的表达及其意义。方法3个月龄、12个月龄、24个月龄SD大鼠各8只，建立青年组、中年组和老龄组大鼠模型，苏木素-伊红（HE）染色检测椎间盘组织的退变；透射电镜检测髓核细胞中自噬体的表达；免疫组织化学染色和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法测定髓核组织中Beclin-1和MAPLC3的表达。结果大鼠增龄过程可较好地体现椎间盘的退变变化；不同年龄组大鼠髓核细胞中均有自噬体的表达；Beclin．1和MAPLC3在不同年龄组sD大鼠髓核细胞中均有表达（0．42±0．05，0．47±0．06，0．52±0．05；0．34±0．06，0．39±0．05，0．46±0．09），且老龄组表达均较青年组高（P〈0．01）。Beclin-1和MAPLC3mRNA在不同年龄组SD大鼠髓核组织中均有表达（0．86±0．12，0．93±0．14，1．01±0．13；1．09±0．06，1．15±0．07，1．33±0．11），且老龄组表达较青年组表达明显增高（分别为P〈0．05和P〈0．01）。结论自噬存在于椎间盘退变过程中，且MAPLC3与Beclin-1在椎间盘退变过程中的表达增加，提示自噬活性的增加可能与椎间盘退变的发展进程有关。

EGFP-LC3稳定细胞系的建立及对Aβ自噬效应的研究

该文建立了稳定表达EGFP-LC3的HEK293细胞系,以10μmol/L的Aβ肽及其不同疏水性氨基酸含量的截短形式处理细胞24 h,计数LC3的荧光斑点数;Western blot检测LC3B表达量的变化;MTT检测特定Aβ诱导细胞自噬后对细胞活性的差异;用透射电镜确认自噬体的细胞超微结构。结果显示,G418(700μg/m L)筛选6周后,建立了稳定表达EGFP-LC3的HEK293细胞系;Aβ25-35、Aβ40和Aβ42诱导细胞内LC3荧光斑点的效果较明显;Western blot结果显示LC3B的酯化,即LC3BI向LC3BII转变;MTT检测发现,与Aβ40相比,Aβ42处理后伴随自噬的细胞毒性更强;电镜可以见到Aβ诱导的自噬小体。提示,Aβ肽及其截短的疏水性片段均可诱导自噬,且诱导自噬的效果与疏水性氨基酸含量无关;同时,Aβ42细胞损伤强于Aβ40。该研究为进一步探讨AD自噬机制提供了实验基础。

X射线对人鼻咽癌CNE2及CNE2/DDP细胞自噬相关基因的影响

目的:研究放疗抵抗与自噬的关系,为使用药物调节自噬水平来提高鼻咽癌放疗敏感性提供理论基础。方法:采用流式细胞术分析CNE2及CNE2/DDP细胞照射前后的细胞周期分布;实时荧光定量PCR和免疫荧光染色检测CNE2及CNE2/DDP细胞中自噬特异性基因Beclin 1及微管相关蛋白轻链3β(MAPLC3β)的表达水平。结果:射线照射后CNE2及CNE2/DDP细胞的G2-M期增多,与放射剂量呈正相关(P<0.05),CNE2/DDP细胞的G2-M期阻滞比CNE2明显(P<0.05)。射线照射后CNE2及CNE2/DDP细胞的Beclin1及MAPLC3β的表达水平增高,与放射剂量呈正相关(P<0.05)。CNE2/DDP细胞的Beclin1及MAPLC3β表达水平均低于CNE2细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:自噬性死亡可能是放射治疗后人鼻咽癌CNE2及CNE2/DDP细胞的死亡方式之一,而CNE2/DDP细胞的放射抵抗可能与低水平的自噬有关。