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Marf1基因的克隆及其在真核细胞中的表达
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作者 张小云 曹广义 +2 位作者 殷虹 时兰英 苏友强 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2017年第7期818-822,共5页
目的:克隆小鼠的Marf1基因并使其在真核细胞HEK293T中异位表达,以研究MARF1蛋白在细胞中的表达和定位。方法:运用反转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增并获得Marf1基因编码序列,再利用新... 目的:克隆小鼠的Marf1基因并使其在真核细胞HEK293T中异位表达,以研究MARF1蛋白在细胞中的表达和定位。方法:运用反转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增并获得Marf1基因编码序列,再利用新型分子克隆体系In-Fusion将该目的片段克隆至pCMV6-AC-3DDK和pCMV6-AN-m Kate两个真核表达载体中,由此所得融合质粒经限制性内切酶酶切电泳和测序筛选鉴定,将所得到的阳性质粒转染到HEK293T细胞中进行表达,然后利用DDK和m Kate标签抗体通过Western blot或免疫荧光的方法检测目的蛋白MARF1的表达和定位。结果:DNA测序鉴定证明Marf1基因克隆成功;Western blot检测到MARF1-3DDK和MARF1-m Kate融合蛋白在转染的HEK293T细胞内的表达;免疫荧光显示融合蛋白在转染后的HEK293T细胞质呈颗粒状分布,并与纺锤体共定位。结论:成功克隆了小鼠Marf1基因并实现了其在真核细胞HEK293T中的稳定表达,为进一步研究其功能和作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 marf1 In-Fusion克隆 HEK293T
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Interference with the C-terminal structure of MARF1 causes defective oocyte meiotic division and female infertility in mice 被引量:1
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作者 Guangyi Cao Mingzhe Li +2 位作者 Hao Wang Lanying Shi You-Qiang Su 《The Journal of Biomedical Research》 CAS CSCD 2018年第1期58-67,共10页
Meiosis-arrest female 1(MARF1) is a recently identified key oogenic regulator essential for the maintenance of female fertility and genome integrity in mice. However, the detailed functions and the underlying mechan... Meiosis-arrest female 1(MARF1) is a recently identified key oogenic regulator essential for the maintenance of female fertility and genome integrity in mice. However, the detailed functions and the underlying mechanisms of MARF1 remain elusive. Here, in an attempt to create a mouse model expressing fluorescent protein-tagged MARF1 to facilitate further exploration of the roles of MARF1 in oocytes, we produced a Marf1-eGFP knockin(KI) mouse line in which the C-terminal structure and function of MARF1 were interfered by its fusing eGFP peptide. Using these Marfl-eGFP-KI mice, we revealed, unexpectedly, the functions of MARF1 in the control of oocyte meiotic division.We found that the Marfl-eGFP-KI females ovulated mature oocytes with severe meiotic and developmental defects,and thus were infertile. Moreover, meiotic reinitiation was delayed while meiotic completion was accelerated in the KI-oocytes, which was coincident with the increased incidence of oocyte aneuploidy. Therefore, MARF1 is indispensable for maintaining the fidelity of homolog segregation during oocyte maturation, and this function relies on its C-terminal domains. 展开更多
关键词 marf1 meiosis oocyte aneuploidy female infertility knock in CRISPER/Cas9
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miR-222-3p在鹅肥肝形成中的作用及靶基因验证
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作者 温康 刘龙 +4 位作者 代二朋 赵敏孟 郑云 耿拓宇 龚道清 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 2023年第4期627-631,共5页
为了检测miR-222-3p在填饲鹅不同组织中的表达情况,并对其靶基因进行预测和验证,探讨miR-222-3p在鹅肥肝形成中的功能。运用实时荧光定量PCR技术检测miR-222-3p在填饲鹅肝脏、胸肌和腹脂中的表达量;采用生物信息学方法对鹅miR-222-3p的... 为了检测miR-222-3p在填饲鹅不同组织中的表达情况,并对其靶基因进行预测和验证,探讨miR-222-3p在鹅肥肝形成中的功能。运用实时荧光定量PCR技术检测miR-222-3p在填饲鹅肝脏、胸肌和腹脂中的表达量;采用生物信息学方法对鹅miR-222-3p的靶基因进行预测,荧光定量PCR技术检测预测靶基因在肝脏中的表达量,并利用双荧光素酶基因报告系统验证其靶向关系。结果显示:相比对照组,miR-222-3p在填饲鹅肝脏和腹脂中的表达量均显著升高;生物信息学预测结果显示MARF1和B4GALNT3基因在3’UTR区域存在miR-222-3p的潜在结合位点,且这两个基因在鹅肥肝中均显著下调,而双荧光素酶基因报告系统显示只有MARF1基因与鹅miR-222-3p存在靶向关系。结果表明,miR-222-3p在鹅肥肝中表达量显著上调,且可能通过其靶基因MARF1对鹅肥肝的形成发挥调控作用。 展开更多
关键词 miR-222-3p 鹅肥肝 marf1
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