基于p38 MARK信号通路探讨益气生肌合剂联合三乙醇胺乳膏对压疮大鼠模型皮损及血清炎症因子的影响

目的探讨益气生肌合剂联合三乙醇胺乳膏对压疮大鼠模型皮损、血清炎症因子的影响及作用机制。方法50只SPF级SD大鼠(雌雄各半,6~7周龄,180~200 g)按照随机数字表法分为假手术组、模型组、三乙醇胺乳膏组、益气生肌组、联合用药组,每组10只。模型组、三乙醇胺乳膏组、益气生肌组、联合用药组模拟缺血再灌注法造模,假手术组仅同部位埋入磁铁不予加压。假手术组与模型组给予生理盐水0.4 ml灌胃;三乙醇胺乳膏组予三乙醇胺乳膏外用;益气生肌组予12.98 g/(kg·d)益气生肌合剂灌胃;联合用药组予三乙醇胺乳膏外用及益气生肌合剂灌胃,各组均连续给药8 d。记录各组创面情况,血清炎症因子水平及创面p38 MARK信号通路相关蛋白表达情况。结果三乙醇胺乳膏组、益气生肌组、联合用药组造模第8天皮损面积低于模型组,联合用药组造模第8天皮损面积低于三乙醇胺乳膏组、益气生肌组(P<0.05)。模型组白细胞介素(IL)-2、IL-12、C反应蛋白(CRP)血清炎症因子水平高于假手术组(P<0.05);三乙醇胺乳膏组、益气生肌组、联合用药组IL-2、IL-12、CRP血清炎症因子水平均低于模型组且联合用药组IL-2、IL-12、CRP血清炎症因子水平低于三乙醇胺乳膏组与益气生肌组(P<0.05)。假手术组皮损组织p38丝裂素活化蛋白激酶(p38 MARK)、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达水平低于模型组(P<0.05)。三乙醇胺乳膏组、益气生肌组、联合用药组皮损组织p38 MARK、VEGF、MMP-9蛋白表达水平均低于模型组,且联合用药组皮损组织p38 MARK、VEGF、MMP-9蛋白表达水平低于三乙醇胺乳膏组与益气生肌组(P<0.05)。结论益气生肌合剂与三乙醇胺乳膏联用可有效修复压疮大鼠模型皮损,降低血清炎症因子水平。

运动对孤独症谱系障碍大鼠内侧前额叶皮层树突棘重塑的影响及MARK1/MAP1A/PSD-95通路的作用

目的:探讨游泳结合转轮跑步运动干预对丙戊酸(valproic acid,VPA)诱导的孤独症谱系障碍(autism spectrum disorder,ASD)大鼠内侧前额叶皮层树突棘结构重塑的影响,以及微管亲和力调节激酶1(microtubule affinity regulating kinase 1,MARK1)、微管相关蛋白1A(microtubule-associated protein 1A,MAP1A)和突触后致密蛋白95(postsynaptic density protein-95,PSD-95)的作用。方法:通过妊娠期VPA或生理盐水暴露的方法收集雄性子代制备ASD模型大鼠及对照大鼠,随机分为运动组和静置组,每组9~11只。采用三箱社交实验评价运动对ASD大鼠社交行为的影响,荧光示踪病毒局部感染观察内侧前额叶皮层亚区边缘前皮层(prelimbic cortex,PrL)和边缘下皮层(infralimbic cortex,IL)树突棘密度和形态,Western blot检测PSD-95和突触小泡蛋白(synaptophysin,Syn)蛋白表达,RNA原位杂交检测MARK1、MAP1A和PSD-95阳性颗粒数及共定位情况。结果:与对照组相比,ASD模型组大鼠社交行为存在缺陷,表现为在陌生大鼠箱体的活动时间、嗅探陌生大鼠的时间和频率均显著减少(P<0.05);经过运动干预后ASD大鼠的社交行为显著改善。树突棘形态观察发现ASD大鼠PrL区而不是IL区总树突棘密度显著增加,主要表现为蘑菇型和短粗型树突棘密度增加(P<0.05);运动干预能有效改善树突棘异常重塑。Western blot发现运动干预能有效逆转ASD大鼠PrL区的PSD-95蛋白表达上升的趋势;而PrL区的Syn及IL区的PSD-95和Syn蛋白表达在各组均无统计学差异。RNA原位杂交发现运动干预能有效降低ASD大鼠PrL区异常增多的MARK1、MAP1A和PSD-95的RNA阳性颗粒数,降低MARK1+MAP1A、MARK1+PSD-95和MAP1A+PSD-95的共定位。结论:运动干预可能通过PrL区MARK1/MAP1A/PSD-95分子通路改善ASD大鼠树突棘结构重塑,从而改善社交相关行为障碍。

骨痛灵方调控骨转移模型小鼠脊髓MAPK信号通路的研究

目的从调控MAPK信号通路角度探讨骨痛灵方治疗骨转移疼痛的作用机制。方法将40只小鼠随机分为假手术组、模型组、中药组、对照组,除假手术组外,其余各组建立小鼠骨转移模型。从造模第7天开始给药,中药组予骨痛灵方治疗,对照组以曲马多治疗,采用VonFrey纤维检测机械痛阈值评价其止痛疗效,观察肝肾心病理评价其安全性,采用Western blot法检测脊髓MAPK信号通路中p-JNK、p-p38、p-ERK蛋白的表达。结果 (1)造模第14天,与模型组比较,对照组和中药组机械痛阈值均有升高(P<0.05)。造模第21天,中药组机械痛阈值较模型组与对照组均增高(P<0.05)。(2)各组心肝肾病理均无明显改变。(3)与假手术组比较,模型组脊髓p-JNK、p-p38、p-ERK的表达均增加(P<0.05)。与模型组比较,对照组和中药组脊髓p-JNK、p-p38和p-ERK的表达均显著减少(P<0.05)。中药组和对照组脊髓p-JNK、p-p38和p-ERK的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论骨痛灵具有良好的治疗骨转移疼痛的疗效,且对心肝肾无明显毒副作用,其止痛作用机制与调控MAPK信号通路p-JNK、p-p38、p-ERK蛋白表达有关。

MAPK信号传导通路在人参多糖诱导K562细胞凋亡中的作用

目的探讨人参多糖诱导白血病细胞K562凋亡的机制。方法取对数生长期的K562细胞,调整密度为5×105个/m L,对照组予以常规培养;人参多糖（GPS）组加入400 mg/L GPS。采用流式细胞仪（MTT法）检测GPS对K562细胞增殖的影响;免疫细胞化学方法检测细胞中P-P38蛋白定位及表达量的变化。Western blotting检测细胞中P38及P-P38蛋白的变化。结果 GPS对K562细胞在体外有明显的增殖抑制作用,在100~800 mg/L质量浓度范围内,其抑制作用呈浓度依赖性,在400 mg/L时达到细胞的半数抑制率,且在48 h时抑制率达到高峰;免疫细胞化学显示,P-P38蛋白主要分布在胞浆,与对照组相比,P-P38蛋白表达明显增强,且向胞核转移。Western blotting检测结果显示P38总蛋白无明显变化（P〉0.05）;P-P38蛋白有增加趋势,且在作用48 h后增加明显（P〈0.05）。结论 GPS能促进K562细胞凋亡,其促凋亡机制可能是通过P38MAPK信号传导通路实现的。

白皮杉醇对青光眼大鼠视网膜神经节细胞的保护作用

目的观察白皮杉醇对青光眼大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)的保护作用并探讨其可能的机制。方法将40只大鼠随机分为对照组、模型组、白皮杉醇低剂量组和白皮杉醇高剂量组。采用光凝法建立青光眼大鼠模型,白皮杉醇低、高剂量组分别给予100 mg·kg^(-1)和200 mg·kg^(-1)白皮杉醇灌胃。测量各组大鼠眼压;荧光金逆行标记各组大鼠RGCs并计数;HE染色观察各组大鼠视网膜组织病理形态;免疫印迹法检测各组大鼠视网膜组织中磷酸化原癌基因蛋白Jun(proto oncogene protein Jun,c-Jun)氨基末端激酶(phosphorylation c-Jun N-terminal kinase,p-JNK)、磷酸化c-Jun(phosphorylation c-jun,p-c-Jun)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(phosphorylation extracellular regulated protein kinases,p-ERK)、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶p38(phosphorylation mitogen activated protein kinases p38,p-p38 MAPK)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)蛋白表达。结果模型组眼压、p-JNK、p-c-Jun、p-ERK、p-p38 MAPK和TNF-α蛋白表达均显著高于对照组(均为P<0.05),RGCs低于对照组(P<0.05),视网膜组织结构可见空泡和水肿样改变。与模型组相比,白皮杉醇低剂量组和白皮杉醇高剂量组大鼠RGCs显著增多(P=0.003、P=0.002),视网膜组织水肿和空泡样状况改善,p-JNK、p-c-Jun、p-ERK、p-p38 MAPK和TNF-α蛋白表达明显减少(均为P<0.05),且高剂量组的改善作用更为显著。结论白皮杉醇具有保护青光眼大鼠RGCs的作用,其作用机制可能与抑制MARK信号通路有关。

右美托咪定对病理性神经痛坐骨神经卡压性模型大鼠镇痛作用的影响

目的探讨右美托咪定对病理性神经痛坐骨神经卡压性模型大鼠镇痛作用的影响。方法选择雄性SD大鼠36只,体重为220～265 g,随机分为3组(对照组、病理性神经痛模型组、右美托咪定组),每组各12只。对照组大鼠进行假手术处理,切开肌层并进行坐骨神经分离。病理性神经痛模型组大鼠进行坐骨神经结扎,制作病理性坐骨卡压性损伤模型,每天向鞘内注射2μg/kg的生理盐水,共注射14 d;右美托咪定组大鼠进行坐骨神经结扎,制作病理性坐骨卡压性损伤模型,每天向鞘内注射2μg/kg的右美托咪定。观察各组大鼠热缩足反射潜伏期、机械缩足反射潜伏期,并用免疫组织化学法测定脊髓背根神经节P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)表达情况,采用反转录聚合酶链式反应检测P38MAPKA mRNA表达水平。结果与对照组比较,病理性神经痛模型组与右美托咪定组大鼠损伤同侧脚趾并拢或内收,伴随或不伴随自发性甩腿、舔足、踮地行走等疼痛表现均有所减少。在给药后第3天,右美托咪定组热缩足反射潜伏期明显长于病理性神经痛模型组(P<0.05);在给药后第3天,右美托咪定组机械缩足反射潜伏期明显长于病理性神经痛模型组(P<0.05);病理性神经痛模型组与右美托咪定组P38MAPK平均光密度明显高于对照组(P<0.05),而右美托咪定组明显低于病理性神经痛模型组(P<0.05);病理性神经痛模型组与右美托咪定组P38MAPK mRNA水平明显高于对照组(P<0.05),而右美托咪定组与病理性神经痛模型组相比,术后1 d无明显差异(P>0.05),但随着时间推移P38MAPK mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。结论对病理性神经痛大鼠进行鞘内注射右美托咪定可缩短大鼠热缩足反射潜伏期和机械缩足反射潜伏期,其疼痛缓解作用的发挥可能是通过下调P38MAPK mRNA表达,从而抑制P38MAPK活化实现的。

BAG-1基因在Luminal型乳腺癌中的表达及其对他莫昔芬敏感性的影响

目的探讨Bcl-2结合抗凋亡基因(BAG-1)与Luminal型乳腺癌细胞株MCF-7对他莫昔芬(TMA)敏感性的关系以及可能的作用机制。方法 (1)采用免疫组织化学法检测Luminal型乳腺癌组织和癌旁组织中BAG-1的表达;(2)采用药物浓度梯度间歇诱导法体外建立MCF-7耐药细胞,采用MTT法测定TMA对MCF-7和MCF-7/TMAR细胞增殖活性的影响;(3)采用RNA干扰技术靶向沉默MCF-7/TAMR细胞BAG-1的表达;(4)采用RT-PCR法和Western blot法检测MCF-7细胞和MCF-7/TAMR细胞BAG-1、ER、p-AKT和p-ERK1/2 mRNA和蛋白的表达水平。结果 (1)乳腺癌组织中BAG-1的高表达率明显高于癌旁组织(P<0. 05);(2)MCF-7/TAMR细胞中BAG-1、p-AKT和p-ERK1/2相对表达量明显高于MCF-7细胞(P<0. 05);两组细胞ER表达情况差异无统计学意义(P>0. 05); TMA对MCF-7/TAMR细胞增殖活性的抑制作用明显低于MCF-7细胞(P<0. 05);(3)经siRNA BAG-1转染后,MCF-7/TAMR细胞增殖活性明显低于阴性对照组细胞(P<0. 05); p-AKT和p-ERKmRNA和蛋白表达水平下调,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0. 05)。结论下调BAG-1可降低AKT和ERK磷酸化水平,从而提高Luminal型乳腺癌细胞对他莫昔芬的敏感性。