奥司他韦对肺炎幼鼠ACE2/Ang(1-7)/Mas受体轴及肺损伤的影响

目的 研究奥司他韦对肺炎幼鼠ACE2/Ang(1-7)/Mas受体轴、肺损伤及炎症水平的影响。方法 SPF级SD雄性幼鼠50只随机抽取12只作为健康组,剩余38只幼鼠建立流感病毒模型。建模中意外死亡2只,随机数字表法将建模成功的36只幼鼠分为模型组、奥司他韦组及对照组,每组各12只。健康组与模型组幼鼠常规饲养,奥司他韦组幼鼠给予10 mg/kg奥司他韦灌胃,1次/d,持续5 d;对照组幼鼠经尾静脉注射75 mg/mL阿奇霉素,1次/d,持续1周。另取40只SPF级幼鼠建立病毒性肺炎模型后分为激动剂组、抑制剂组、激动剂+奥司他韦组、抑制剂+奥司他韦组,共诊治7 d,1次/d。ELISA检测各组IL-6、IL-8、TNF-α水平。小动物肺功能检测仪检测各组肺功能指标。HE染色观察各组肺炎幼鼠肺组织病理形态。TUNEL检测各组幼鼠肺组织细胞凋亡。免疫印迹检测各组幼鼠ACE2、Ang(1-7)、MasR、ACE、AngⅡ蛋白表达水平。结果 与健康组相比,模型组、奥司他韦组与对照组幼鼠血清中IL-6、IL-8、TNF-α、肺组织细胞凋亡率升高(P<0.05),在经过奥司他韦干预后IL-6、IL-8、TNF-α、肺组织细胞凋亡率均降低(P<0.05)。与健康组相比,模型组FEF50、FEF75、MMF、PEF水平降低(P<0.05),肺系数升高(P<0.05),在经过奥司他韦干预后FEF50、FEF75、MMF、PEF水平升高(P<0.05),肺系数降低(P<0.05)。各组肺组织病理形态对比明显。与健康组相比,模型组、奥司他韦组、对照组、抑制剂组、激动剂组、激动剂+奥司他韦组与抑制剂+奥司他韦组ACE2、Ang(1-7)、MasR水平降低(P<0.05),ACE、AngⅡ水平升高(P<0.05);与模型组相比,奥司他韦组、对照组、激动剂组、激动剂+奥司他韦组ACE2、Ang(1-7)、MasR水平升高(P<0.05),ACE、AngⅡ水平降低(P<0.05),抑制剂组ACE2、Ang(1-7)、MasR水平降低(P<0.05),ACE、AngⅡ水平升高(P<0.05);模型组与抑制剂+奥司他韦组各指标比较差异无统计学意义(P>0.05);与对照组相比,奥司他韦组、激动剂组、激动剂+奥司他韦组ACE2、Ang(1-7)、MasR水平升高(P<0.05),ACE、AngⅡ水平降低(P<0.05);奥司他韦组与激动剂组各指标比较差异无统计学意义(P>0.05);与奥司他韦组相比,激动剂+奥司他韦组ACE2、Ang(1-7)、MasR水平升高(P<0.05),ACE、AngⅡ水平降低(P<0.05)。结论 奥司他韦通过提高ACE2/Ang(1-7)/Mas受体轴水平及降低炎症因子水平,改善肺炎幼鼠肺功能。

ACE2-Ang(1-7)-Mas受体轴与肝纤维化

肾素血管紧张素系统(renin angiotensin system,RAS)是人类生理功能的一个重要调节机制,在维持血压稳态、水盐平衡及局部组织器官的正常功能等方面具有重要作用。经典的RAS作用轴ACE-AngⅡ-AT1R在肝纤维化的发生过程中起促进作用,而ACE2-Ang(1-7)-Mas受体轴是新发现的RAS作用轴,是ACE-AngⅡ-ATR1的反向调节轴,对肝纤维化的发生具有保护作用。本文将ACE2-Ang(1-7)-Mas受体轴与肝纤维化关系的研究进展介绍如下。

血管紧张素转换酶2-血管紧张素-(1-7)-Mas受体轴与血管内皮细胞凋亡

肾素-血管紧张素系统经典轴血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)-血管紧张素(Ang)Ⅱ-血管紧张素Ⅱ1型受体(angiotensin 1 receptor,AT1R)在血管疾病致病机制中发挥重要作用。ACE2-Ang-(1-7)-Mas受体轴与ACE-AngⅡ-AT1R轴是一对负向调节轴,其通过抑制血管内皮细胞凋亡和平滑肌细胞凋亡,改善血管内皮功能、抑制血管重构,可能成为治疗血管性疾病的前景治疗靶点。

血管紧张素1-7通过Mas受体减轻血管紧张素Ⅱ所致人肾小球内皮细胞损伤

目的:研究血管紧张素1-7(Ang1-7)对血管紧张素II(Ang II)所致人肾小球内皮细胞(HGECs)损伤的作用及可能机制。方法:体外培养HGECs,随机分为6组:对照组,Ang Ⅱ组,Ang1-7组,Ang II+Ang1-7组,Ang Ⅱ+Ang1-7+Mas受体阻断剂(A779)组及A779组,分别给予相应处理后,采用流式细胞术检测细胞凋亡率和活性氧簇(ROS)含量,荧光显微镜观察ROS的变化;同时检测HGECs培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β(TGF-β),单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的含量。结果:与对照组比较,Ang II组的细胞凋亡率及ROS平均荧光强度增加(P<0.05),上清液中IL-6、TNF-α、TGF-β、MCP-1及ICAM-1的含量增加(P<0.05);与Ang Ⅱ组比较,Ang Ⅱ+Ang1-7组的细胞凋亡率及ROS水平降低,上清液中上述炎症因子含量减少(P<0.05);与Ang Ⅱ+Ang1-7组比较,A779的加入增加了细胞凋亡率、ROS生成和上清液中炎症因子的含量(P<0.05);与Ang Ⅱ组比较,加入Ang1-7可呈剂量依赖性抑制LDH漏出和ET-1分泌、并促进NO的释放(P<0.05)。结论:Ang1-7可能通过抑制Mas受体减轻Ang II所致HGECs的损伤。

氯沙坦对百草枯中毒致大鼠肺损伤的改善作用及与ACE2/Ang-(1-7)/Mas受体轴表达的关系

目的分析氯沙坦对百草枯中毒致大鼠肺损伤的改善作用及与ACE2/Ang-(1-7)/Mas受体轴表达的关系。方法将36只清洁级雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和实验组,三组各12只。对照组给予生理盐水;模型组给予百草枯溶液18 mg/kg,于一次性腹腔注射;实验组给予百草枯溶液18 mg/kg,于一次性腹腔注射,待0. 5 h后应用氯沙坦溶液进行灌胃,每日10 mg/kg。1周、2周、3周取各组大鼠肺组织,对其肺系数进行计算以评估其肺水肿的状况;采用HE染色对各组大鼠肺泡炎的程度进行观察,并用Masson染色评估大鼠肺纤维化的严重程度;采用酶联免疫吸附试验法检测各组大鼠肺组织匀浆中Ang-(1-7)和转化生长因子β1(TGF-β1)的水平,并通过免疫组织化学法对各组大鼠肺组织中Mas受体和血管紧张素转换酶II(ACE2)蛋白的表达水平进行检测。结果在染毒后1周、2周、3周时,模型组和实验组肺系数较对照组均显著升高(P <0. 01),而实验组各时间点时的肺系数较模型组均显著下降(P <0. 01)。在染毒后1周、2周、3周,模型组出现明显肺泡炎症,且随着染毒时间的增加,可出现肺纤维化,实验组肺泡炎症程度轻于模型组,实验组肺纤维化程度较模型组明显减轻。随着染毒时间的增加,Ang-(1-7)和TGF-β1在模型组与实验组肺组织匀浆中的水平均逐渐升高,且模型组与实验组各时间点Ang-(1-7)和TGF-β1的含量较对照组均显著升高(P <0. 01);染毒后1、2、3周,Ang-(1-7)在实验组肺组织匀浆中的水平较模型组明显升高,而TGF-β1的含量较模型组显著下降(P <0. 01)。随着染毒时间的增加,模型组与实验组大鼠肺组织中Mas受体和ACE2蛋白的表达水平均显著升高(P <0. 05),且实验组染毒后2周、3周Mas受体和ACE2蛋白的表达水平较模型组均显著升高(P<0. 05)。结论在百草枯中毒后,肺组织匀浆中Ang-(1-7)和TGF-β1的表达水平明显上调,而氯沙坦可能通过升高ACE2/Ang-(1-7)/Mas受体轴的表达水平而起到下调纤维化因子TGF-β1表达的作用,因此可改善百草枯中毒所引起的肺损伤和肺纤维化的形成。

佐芬普利对肾血管性高血压大鼠肾脏血管肾张素转换酶2及Mas受体的影响

目的:探讨佐芬普利对大鼠肾血管性高血压、心肌肥厚及肾脏血管紧张素转换酶2(ACE2)及血管紧张素1-7(Ang1-7)受体Mas的影响。方法:清洁型雄性SD大鼠70只,随机分为假手术组(S)20只、2K1C手术组50只。采用两肾一夹法(two-kidney one clip,2K1C)制作肾血管性高血压模型,高血压造模成功大鼠46只,随机分为2K1C+蒸馏水组(K)23只、2K1C+佐芬普利组(Z)23只。分别于术后第4、8、12周,无创血压仪套尾法监测血压,二维超声心动图监测心脏结构和功能;术后第8、12周分别处死大鼠取其代偿肾脏,荧光定量PCR检测其ACE2及Ang1-7受体Mas mRNA表达,Western blot技术检测ACE2及Mas蛋白表达。结果:①术后K组各时间段血压均明显升高,Z组较K组血压显著降低(P均<0.01);②术后第8、12周,K组收缩及舒张末期左室后壁厚度、室间隔厚度均显著增加,Z组上述指标明显改善(P均<0.01),第12周时K组射血分数显著降低,Z组显著增加(P均<0.01);③K组中,Mas基因及蛋白水平第8周时上调,第12周时下调,与K组相比,Z组第8周时明显下调,第12周时明显上调(P均<0.01);K组中ACE2基因及蛋白水平第8周时上调,第12周时无显著变化,与K组相比,Z组第8周时上调,第12周时显著下降(P<0.01);结论:2K1C法成功复制肾血管性高血压大鼠模型,并致高血压性心脏改变;佐芬普利不仅能显著降低肾性高血压大鼠血压,还能改善心肌重构,上调肾脏组织中Mas基因与蛋白水平,下调ACE2基因及蛋白水平。

Mas受体在内毒素血症急性肝损伤大鼠肝组织中动态表达的研究

目的分析内毒素血症肝损伤时肝组织局部血管紧张素1-7[Angiotensin 1-7,Ang(1-7)]及其特异性受体Mas受体表达变化。方法应用腹腔注射脂多糖(LPS)方法(10 mg/kg)制备内毒素血症急性肝损伤模型。雄性SD大鼠36只,随机分为对照组(C组,n=6只)、LPS组(2 h,6 h,12 h,24 h,48 h,共5组,每组6只)。LPS组经腹腔注射LPS,分别于2 h、6 h、12 h、24 h、48 h,用2%戊巴比妥麻醉大鼠,经心脏取血,取肝左叶组织;对照组注射生理盐水。qRT-PCR方法检测肝组织Mas受体mRNA的表达,Western-blot方法测定肝组织Mas受体蛋白表达水平,免疫组化方法测定Mas受体在肝组织分布情况,ELISA检测血清和肝组织匀浆中Ang(1-7)的含量。比较组间肝功能指标[谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)]、肝组织中Ang(1-7)及其受体Mas受体表达水平。采用SPSS 21.0统计软件进行单因素方差分析。结果 LPS注射后ALT、AST进行性升高,均于12 h达到峰值,而ALP于48h开始明显升高(P<0.01),48 h时肝组织病理损伤最重。与对照组相比,LPS注射后6 h肝组织中Mas受体蛋白开始增加,12 h肝组织中Mas受体mRNA开始升高,二者均于48 h达峰值(P<0.05);注射LPS后12 h肝组织匀浆中Ang(1-7)水平于48 h时显著升高(P<0.01)。结论 LPS注射48 h时肝组织病理损伤最重,此时肝脏局部Ang(1-7)及Mas受体表达最多,提示肝脏局部Ang(1-7)-Mas受体与内毒素血症急性肝损伤有一定相关性。

血管紧张素-(1-7)/Mas受体轴通过调控NF-κB通路保护心肌细胞对抗高糖诱导的损伤

目的：探讨血管紧张素-（1-7）[Ang-（1-7）]/Mas受体轴能否通过抑制核因子-κB（NF-κB）通路对抗高糖（HG）引起的心肌细胞损伤。方法：应用细胞计数检测试剂盒（CCK-8）检测心肌细胞存活率;双氯荧光素（DCFH-DA）染色荧光显微镜照相法检测胞内活性氧（ROS）水平;Hoechst 33258核染色荧光显微镜照相测定凋亡细胞的形态及数量的变化;JC-1染色法测定线粒体膜电位（MMP）;应用免疫蛋白印迹法测定NF-κB p65和cleaved caspase-3蛋白的表达水平。结果：应用35 mmol/L葡萄糖分别处理H9c2心肌细胞30、60、90、120和150 min均能明显增加磷酸化（p）NF-κB p65的水平,其中60 min时,表达水平增加最明显;1μmol/L Ang-（1-7）与HG共同处理心肌细胞60 min能抑制HG对p-NF-κB p65表达的上调作用;0.1-30μmol/L的Ang-（1-7）与HG分别共处理心肌细胞24 h均能抑制HG的细胞毒性,使细胞存活率增多;另一方面,1μmol/L Ang-（1-7）能抑制HG引起的细胞凋亡、氧化应激、线粒体损伤等,使凋亡细胞数量、cleaved caspase-3表达、ROS生成水平及MMP丢失减少;但是10μmol/L Ang-（1-7）/Mas受体拮抗剂A-779能明显阻断上述的Ang-（1-7）的心肌细胞保护作用;与Ang-（1-7）的作用相似,100μmol/L PDTC（NF-κB抑制剂）与HG共处理心肌细胞24 h也能显著抑制上述的HG损伤作用。结论：Ang-（1-7）/Mas受体轴可通过抑制NF-κB通路对抗HG诱导的心肌细胞损伤。

动脉粥样硬化中血管紧张素(1-7)/Mas受体途径与血管炎症的关系

动脉粥样硬化是影响人类健康的常见疾病之一,也是引发患者死亡率最高的疾病.肾素-血管紧张素系统(RAS)是影响动脉粥样硬化进展的重要相关因素,并在人体内分泌调控中与多处组织有密切联系.其中,除了血管紧张素II外,RAS中其他具有生物活性的多肽片段被陆续发现.血管紧张素(1-7)(Ang-(1-7))做为RAS中一种重要的调节肽,主要与Mas受体结合发挥作用,在动脉粥样硬化过程中起着重要作用,可以抗衡因Ang II与AT1受体结合产生的血管收缩、血压升高、炎症反应、纤维化、细胞凋亡等作用.因此,了解Ang-(1-7)/Mas途径与炎症的关系,对于预防与治疗动脉粥样硬化具有重要意义.本文主要讨论近来在动脉粥样硬化病理研究中Ang(1-7)/Mas途径与动脉炎症的关系,以及未来前景.

Ang-(1-7)及其Mas受体的研究进展

血管紧张素(angiotensin,Ang)-(1-7)是肾素-血管紧张素系统中除AngⅡ以外,另一种重要的调节肽,主要作用于Mas受体发挥作用。Ang-(1-7)通过与其Mas受体的结合,发挥血管扩张和抗细胞增殖等作用,抗衡AngⅡ与其AT1受体结合产生的血管收缩、血压升高、细胞增殖、尿钠潴留等作用。近年来研究发现,Ang-(1-7)及其Mas受体在局部组织生理功能中具有积极作用,在多种疾病病理过程中具有保护作用。

血管紧张素Ⅱ及贝那普利对肝星状细胞ACE2和Ang-(1-7)/Mas受体的影响

目的研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)贝那普利对体外培养的肝星状细胞上清液中血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]以及肝星状细胞中血管紧张素转化酶2(ACE2)和Mas受体的影响。方法以肝星状细胞(HSC)系HSC-T6细胞为实验对象,分为对照组、AngⅡ组、贝那普利组和AngⅡ+贝那普利组。SABC免疫细胞化学方法检测肝星状细胞中ACE2的表达,酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞培养上清液中Ang-(1-7)的含量,实时荧光定量PCR(RTFQ PCR)检测肝星状细胞中ACE2、Mas受体mRNA的表达。结果 AngⅡ处理组中,细胞上清液中Ang-(1-7)以及肝星状细胞中ACE2、ACE2 mRNA、Mas受体mRNA均高于正常对照组(P<0.05)。AngⅡ+贝那普利组中各指标均高于AngⅡ处理组(P<0.05)。结论 AngⅡ促使肝星状细胞激活,贝那普利可使活化的肝星状细胞Ang-(1-7)、ACE2、Mas受体的表达增加,从而发挥抗肝纤维化的作用。

贝那普利对肝纤维化大鼠Ang-(1-7)、ACE2及Mas受体mRNA的影响

目的观察血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)贝那普利抗大鼠肝纤维化的疗效,研究贝那普利对肝纤维化大鼠肝组织血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]、血管紧张素转换酶2(ACE2)m RNA及Mas受体m RNA的影响。方法制备四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化模型,同时应用贝那普利灌胃,共8w。对肝组织进行常规HE及Masson染色,ELISA测定肝匀浆血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、Ang-(1-7)浓度,计算AngⅡ/Ang-(1-7)比值,实时荧光定量PCR测定肝组织ACE2m RNA和Mas受体m RNA的水平。结果造模6、8周末,贝那普利治疗组大鼠的肝纤维化程度均较模型组减轻;肝匀浆AngⅡ的浓度较模型组降低(P<0.05),肝匀浆Ang-(1-7)的浓度较模型组增加(P<0.05),肝匀浆AngⅡ/Ang-(1-7)的比值较模型组降低(P<0.05);贝那普利治疗组肝组织ACE2及Mas受体m RNA的水平均较模型组增加(P<0.05)。结论贝那普利具有良好的抗肝纤维化作用,其机制可能与AngⅡ浓度降低,Ang-(1-7)浓度增加,AngⅡ/Ang-(1-7)比值降低有关,亦可能与ACE2和Mas受体表达增加有关。

AngⅡ对肝星状细胞中ACE2和Mas受体mRNA的影响

目的体外培养肝星状细胞(HSC),从分子生物学的角度探索其是否有ACE 2和Mas受体mRNA的表达,以及血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)贝那普利对二者的影响。方法大鼠肝星状细胞株(HSC-T 6)按实验计划分组处理(正常对照组、AngⅡ组、AngⅡ+贝那普利组、贝那普利组),提取总RNA,逆转录后应用RTFQ PCR的方法测量ACE 2及Mas受体mRNA的基因水平。结果 ACE 2、Mas受体mRNA在各组中均有表达;与对照组相比,AngⅡ组中二者的表达均较高,差异有统计学意义(P<0.05);在AngⅡ+贝那普利组,二者均较AngⅡ组升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 AngⅡ可使肝星状细胞激活,活化后的HSC的ACE 2、Mas受体mRNA的基因表达水平升高,从而发挥其抗肝纤维化的作用。

血管紧张素转换酶2-血管紧张素(1-7)-Mas受体轴与高血压的相关性研究

高血压发病率高,是全球范围内重大的慢性疾病,由它引发的心脑血管的并发症发病率和死亡率一直非常高。目前,本病的治疗效果不够理想,研究发现各种类型的高血压均有不同程度的肾素-血管紧张素系统过度增强现象,但其机制尚不清楚,其成为迫切需解决的重要科学问题。近期对血管紧张素转换酶2-血管紧张素(1-7)-Mas受体轴各成员及整个完整的肾素-血管紧张素系统深入研究和阐述,为治疗本病找到新的药物靶点提供了方向,现就此做一系统阐述。

Mas受体激动剂激活RAS非经典通路对db/db糖尿病小鼠胰岛α细胞功能的影响

目的血肾素血管紧张素系统(RAS)的非经典通路对胰岛功能具有重要调控作用,但其对胰高血糖素分泌的影响仍未知。文中探讨Mas受体激动剂AVE0991对db/db糖尿病小鼠胰岛α细胞胰高血糖素分泌的影响及可能机制。方法30只db/db糖尿病小鼠随机数字表法分为AVE组和模型组,每组15只,分别给予20 mg/(kg·d)的AVE0991及安慰剂灌胃,15只同周龄db/m小鼠作为正常组给予安慰剂灌胃。每周监测体重、血糖等生化指标,6周后行腹腔葡萄糖耐量试验及体外胰岛灌流评估胰高血糖素分泌功能,取胰腺行免疫组化分析胰岛α及β细胞含量,并采用RT-PCR及Western blot方法检测胰岛内葡萄糖激酶(GCK)的表达。结果干预6周后,AVE组小鼠空腹血糖[(19.1±0.8)mmol/L]、空腹胰岛素水平[(14.1±0.5)mU/L]均明显低于模型组[(25.3±3.0)mmol/L、(17.3±1.8)mU/L],差异有统计学意义(P<0.05),但高于正常组[(6.3±0.5)mmol/L、(5.7±0.3)mU/L],差异有统计学意义(P<0.05)。在糖负荷后30、60和120 min,AVE组血糖值和胰高血糖素水平均低于模型组,但仍高于正常组(P<0.05)。低糖灌流时,正常组小鼠胰岛的胰高血糖素分泌水平[(20.6±0.5)pmol/L]低于模型组[(29.1±0.7)pmol/L]及AVE组[(27.6±0.8)pmol/L],差异有统计学意义(P<0.05)。高糖灌流时,与模型组比较,AVE组高糖灌流30、60 min高血糖素水平差异均有统计学意义(P<0.05)。半定量分析表明模型组胰岛α细胞含量[(3.3±0.7)mg]较正常组[(1.2±0.3)mg]明显升高(P<0.05),β细胞含量[(2.4±0.6)mg]较正常组[(4.8±0.3)mg]明显降低(P<0.05);与模型组相比,AVE组胰岛α细胞含量[(1.8±0.4)mg]降低(P<0.05),β细胞含量[(4.2±0.5)mg]升高(P<0.05)。模型组胰岛GCK mRNA及蛋白的表达均低于正常组(P<0.05);与模型组比较,AVE组GCK mRNA及蛋白表达升高(P<0.05)。结论激活Mas受体可通过降低db/db糖尿病小鼠糖负荷后胰高血糖素的分泌水平改善糖代谢,其机制可能与降低胰岛α细胞含量及增加胰岛GCK的表达有关。

TO90可通过ACE2/Ang-(1-7)/MAS受体轴减轻Ang Ⅱ诱导人视网膜色素上皮细胞产生的炎症反应

目的探讨TO90与ACE2/Ang-(1-7)/MAS受体轴在血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的人视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium cells,ARPE-19)炎症反应中的关系.方法体外培养ARPE-19细胞,首先将其分为空白对照组及AngⅡ模型组(1μmol/L AngⅡ刺激细胞48 h),Real-time PCR与ELISA检测慢性低度炎症因子IL-6、IL-8、MCP-1的表达,判断是否成功建立炎症模型.随后将ARPE-19细胞分为AngⅡ模型组与TO90+AngⅡ治疗组,重复之前步骤检测慢性低度炎症因子IL-6、IL-8、MCP-1表达;Real-time PCR及Western blot检测ACE2及MAS受体表达,探究TO90在AngⅡ炎症模型中的作用.最后将ARPE-19细胞分为AngⅡ模型组、TO90+AngⅡ治疗组、A779(MAS受体抑制剂)+TO90+AngⅡ抑制剂组以及A779+AngⅡ抑制剂对照组,Real-time PCR、ELISA及Western blot重复之前步骤检测慢性低度炎症因子IL-6、IL-8、MCP-1、ACE2及MAS受体的表达,进一步验证TO90在AngⅡ炎症模型中的作用.结果 AngⅡ刺激ARPE-19细胞后,IL-6、IL-8及MCP-1在mRNA及蛋白水平表达升高(P<0.05),TO90预处理ARPE-19细胞能显著减少IL-6、IL-8及MCP-1在mRNA及蛋白水平的表达(P<0.05),同时升高ACE2及MAS受体表达水平(P<0.05).A779抑制后,与TO90+AngⅡ治疗组相比,IL-6、IL-8及MCP-1在mRNA及蛋白水平表达量均显著升高(P<0.05),ACE2及MAS受体表达水平降低(P<0.05).结论 TO90通过ACE2/Ang-(1-7)/MAS受体轴减轻AngⅡ诱导人视网膜色素上皮细胞产生的炎症反应.

ACE2/Ang(1-7)Mas受体轴对心脏重塑、心功能影响及其机制的研究进展

在致病因素刺激下,心脏在结构、代谢和功能等方面发生慢性综合性适应性反应,即心脏重塑。心脏重塑是心力衰竭的病理学基础,二者相互促进,造成心功能恶化。近年来研究发现,肾素-血管紧张素系统中血管紧张素转化酶2(ACE2)/血管紧张素(1-7)/Mas受体轴[ACE2/Ang(1-7)/Mas受体轴]在心脏重塑和心功能调控过程中具有重要作用,机制涉及影响炎症及氧化应激反应、细胞外基质代谢及与细胞间相互作用、一氧化氮合酶/一氧化氮系统等。随着对ACE2/Ang(1-7)/Mas受体轴在心脏重塑和心功能障碍中病理生理学意义的深入认识,该轴有望为抑制心脏重塑、改善心功能提供更有效、更合适的新靶点。

肢体缺血再灌注后肺损伤小鼠肺组织AT1R和Mas受体蛋白表达变化

目的:通过观察小鼠肢体缺血再灌注(LIR)后不同时点肺组织血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)和Mas受体蛋白表达与肺损伤的变化,探讨局部组织AT1R和Mas受体蛋白表达失衡在LIR急性肺损伤(ALI)中的作用。方法:42只8周龄雄性ICR小鼠随机分为7组,每组6只,其中1组作为对照组,其余6组为再灌注0.5 h、1h、2 h、4 h、6 h和12 h模型组。模型组小鼠用橡皮圈结扎双后肢根部,缺血2 h后剪断橡皮圈,分别于再灌注后不同时点眼球取血处死小鼠。取肺组织计算脏器系数和湿/干重比;肺泡灌洗液细胞计数和蛋白浓度检测;肺组织病理切片常规HE染色观察肺组织形态变化并进行病理损伤评分;Western blot检测肺组织AT1R和Mas受体蛋白的表达。结果:模型组小鼠肺脏器系数、湿/干重比、肺泡灌洗液细胞计数和蛋白浓度在LIR后显著升高。病理学结果显示,LIR后不同时点小鼠肺组织出现肺泡壁毛细血管扩张和充血、间质和肺泡水肿、血管壁和支气管壁炎症细胞浸润、肺泡间隔增厚、炎症细胞浸润及肺气肿等不同程度的损伤变化,且随着再灌注时间的延长,肺损伤评分逐渐升高。Western blot结果显示,AT1R蛋白在再灌注0.5 h时开始升高,1 h达到最高,之后随再灌注时间的延长,AT1R表达逐渐降低;Mas受体蛋白随再灌注时间延长逐渐升高。结论:LIR引起急性肺损伤,并随再灌注时间的延长损伤逐渐加重;AT1R和Mas受体蛋白表达的变化可能与小鼠LIR后急性肺损伤有关。

MAS受体与AT1受体的相互作用

RAS的2个重要成员Ang-(1-7)和血管紧张素II(Ang II)主要作用于MAS受体和AT1受体发挥作用。Ang-(1-7)和Ang II之间存在着复杂的相互作用,两者的受体在细胞和组织中相互作用,其可能的机制之一是受体的寡聚化。

血管紧张素(1-7)/Mas受体轴通过调控ATP敏感性钾通道对抗高糖引起的人脐静脉内皮细胞损伤

目的研究血管紧张素(1-7)[Ang(1-7)]/Mas受体轴能否通过调控ATP敏感性钾通道(K_(ATP)通道)对抗高糖引起的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤。方法应用40 mmol/L葡萄糖(高糖)作用HUVEC 24 h建立糖尿病血管内皮细胞损伤模型,应用蛋白免疫印迹法检测K_(ATP)通道蛋白的表达水平,CCK-8检测细胞存活率,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测细胞培养液中LDH活性,Hoechst33258核染色荧光显微镜照相法检测凋亡细胞数量,双氯荧光素染色荧光显微镜照相法测定细胞内活性氧(ROS)水平,罗丹明123染色荧光显微镜照相法测定线粒体膜电位(MMP),ELISA检测培养液中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的分泌水平。结果高糖分别作用HUVEC 1~24 h,从3 h起K_(ATP)通道蛋白的表达水平呈时间依赖性降低,在24 h时K_(ATP)通道蛋白的表达下降最明显。20μmol/L Ang(1-7)和高糖共处理HUVEC 24 h可抑制高糖对K_(ATP)通道蛋白表达的下调。此外,20μmol/L Ang(1-7)共处理或100μmol/L吡拉地尔(K_(ATP)通道开放剂)预处理细胞均能对抗高糖引起的HUVEC损伤,使细胞存活率升高,LDH活性降低,凋亡细胞数量、ROS生成、MMP丢失及IL-1β和TNF-α的分泌减少。10μmol/L A-779(Mas受体拮抗剂)共处理或1 mmol/L格列本脲(K_(ATP)通道阻断剂)预处理均能阻断Ang(1-7)的上述细胞保护作用。结论 Ang(1-7)/Mas受体轴通过调控K_(ATP)通道对抗高糖引起的HUVEC损伤。