沉默MAT1基因通过SDF1-CXCR4信号通路抑制骨肉瘤细胞增殖与迁移

目的探讨沉默MAT1基因表达对骨肉瘤细胞增殖与迁移的影响,以及对SDF1-CXCR4信号通路的作用。方法qRT-PCR检测人成骨细胞hFOB1.19与骨肉瘤细胞株Saos-2、MG63、U2OS、143B中MAT1 mRNA的表达水平。将对数生长期143B细胞分为空白对照组(不进行转染)、阴性对照组(转染阴性对照siRNA-NC)和siRNA-MAT1组(转染siRNA-MAT1),通过CCK-8、流式细胞术及Transwell小室法分别检测各组143B细胞增殖活力、细胞周期和迁移能力,Western blot法检测各组143B细胞中SDF1和CXCR4蛋白表达情况。结果与hFOB1.19细胞比较,骨肉瘤细胞株Saos-2、MG63、U2OS中MAT1 mRNA的表达水平明显升高(P<0.01),143B细胞中MAT1 mRNA的表达水平显著升高(P=0.000);siRNA-MAT1组143B细胞中MAT1 mRNA的表达水平较空白对照组(Blank组)和siRNA-NC组明显下降(P<0.01);与Blank组和siRNA-NC组比较,siRNA-MAT1组143B细胞增殖力明显降低,G 1期比例升高而S期比例降低,细胞迁移能力受到抑制,SDF1和CXCR4蛋白表达水平也明显下降(P<0.01)。结论沉默FOSL2基因的表达可抑制骨肉瘤细胞143B的增殖和迁移能力,机制可能与下调SDF1和CXCR4表达有关。

MAT1基因在癌症疾病中的作用与应用研究

癌症是以细胞周期调控机制紊乱导致细胞不断增殖的一类疾病.现代医学研究认为,癌症的发生与突变与受损的DNA连续异常分裂有关,携带有此类DNA的细胞不断增殖导致肿瘤发生.细胞周期蛋白依赖性激酶活化激酶（cyclin dependent kinase-activating kinase,CAK）在调节细胞生长、增殖和导致癌细胞形成过程中有重要作用.MAT1是CAK的组配因子之一,也是CAK的重要组成部分,MAT1在CAK调节细胞周期过程中起重要作用,在多数癌细胞中可见MAT1基因的过度表达现象.就目前的研究情况来说,MAT1基因与多种癌症的发展有关,可能参与到癌细胞的恶性增殖、转移等方面.恶性肿瘤的现代治疗方法不断进步,手段不断创新,从微创治疗已发展至基因水平的治疗,有望通过靶向基因疗法遏制癌细胞的发展,未来可能还会运用到癌症的预防方面.现针对MAT1基因在癌症疾病中的应用情况综述如下.

新生儿高甲硫氨酸血症的筛查结果及MAT1A基因突变分析

目的分析新生儿高甲硫氨酸血症的筛查结果及MAT1A基因突变情况。方法选取2015年1月至2022年12月于枣庄市进行串联质谱遗传代谢病筛查的168694例新生儿作为研究对象,应用高通量测序技术结合Sanger测序法对筛查出的高甲硫氨酸血症新生儿相关致病基因进行检测,并对其核心家系成员进行基因分析。结果共检出3例高甲硫氨酸血症新生儿,发病率约为1/56231。3例高甲硫氨酸血症新生儿血浆甲硫氨酸浓度在筛查、治疗以及随访期间均较高,且均有MAT1A基因突变,其中2例为c.791G>A杂合突变,1例为c.163G>A和c.451C>A复合杂合突变;c.163G>A和c.451C>A突变为未见文献报道的突变。Sanger测序结果显示,高甲硫氨酸血症新生儿的突变均来自其父母。结论枣庄市新生儿高甲硫氨酸血症的发病率约为1/56231;基因检测检出MAT1A基因3种突变位点,包括c.791G>A、c.163G>A和c.451C>A突变。

1例单纯性高甲硫氨酸血症的筛查和基因分析

单纯性高甲硫氨酸血症是由于体内甲硫氨酸代谢受阻造成血液中甲硫氨酸过多的疾病。多为MAT1A基因突变所致,发病率很低[1]。近年来,大部分患者是通过新生儿疾病筛查发现,多无明显临床表现,少数有神经系统症状。本中心在近期的新生儿疾病筛查中发现1例MAT1A基因突变引起的单纯性高甲硫氨酸血症患儿,对其临床表现、串联质谱检测及家系基因检测结果进行回顾性分析,为高甲硫氨酸血症的诊治随访提供依据。1病例介绍患儿女,汉族,1个月,因新生儿疾病筛查串联质谱检测甲硫氨酸升高召回于2021年9月4日在本院门诊就诊。

核盘菌交配型基因mat1-1敲除载体的构建及转化

利用根癌农杆菌介导真菌遗传转化方法对核盘菌的交配型基因mat1-1进行基因同源重组的敲除对比实验,获得了缺失mat1-1基因的转化菌株.先利用PCR方法获得mat1-1基因的左右两侧片段,将测序正确的两个侧翼片段分别重组到农杆菌转化载体PBI-G3C中,并将新霉素抗性标记引入农杆菌转化载体PBI-G3C中,构建成农杆菌介导转化核盘菌的打靶载体ΔPBI-G3CN-mat1-1,再将ΔPBI-G3CN-mat1-1质粒转化至根癌农杆菌EHA105中.利用核盘菌菌丝进行转化,将得到的转化菌株,利用PCR方法进行验证,证实有敲除菌株存在.通过对敲除菌株进行生理表型的测定发现,缺失mat1-1基因的敲除菌株其生长速度与野生核盘菌菌株相比无明显差异,但敲除菌株不能产生菌核与子囊盘.

新生儿高甲硫氨酸血症串联质谱筛查结果及MAT1A基因突变分析

目的回顾分析石家庄市新生儿高甲硫氨酸血症筛查情况,了解其发病率及MAT1A基因突变情况。方法采用串联质谱技术-非衍生法检测滤纸干血斑中甲硫氨酸水平,对石家庄市149094例活产新生儿进行筛查,进一步采用二代测序技术对筛查阳性患儿进行MAT1A基因突变检测,Sanger测序验证。结果149094例新生儿中确诊13例高甲硫氨酸血症患儿,发病率为1/11469。13例患儿中除1例伴有血同型半胱氨酸升高外,其余12例患儿均为单纯性高甲硫氨酸血症患儿。9例单纯性高甲硫氨酸血症患儿进行了基因检测,结果发现均携带MAT1A基因突变,其中杂合突变7例;复合杂合突变1例;基因整体杂合缺失1例。基因突变分析发现点突变9种,其中文献已报道4种,分别为c.791G>A、c.769G>A、c.1070C>T和c.874 C>T;文献尚未报道5种,分别为c.1086-3C>G、c.712G>A、c.188G>T、c.757G>A和c.178T>C。结论石家庄市新生儿高甲硫氨酸血症发病率为1/11469;基因测序发现了5种未报道基因突变,丰富了数据库。

MAT1-siRNA体外转染抑制胰腺癌细胞增殖和侵袭能力的研究

目的:观察siRNA沉默MAT1基因对胰腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响,探讨MAT1基因作为胰腺癌基因治疗标靶的可行性。方法:在脂质体介导下将MAT1基因序列特异性siRNA体外转染人胰腺癌BxPC-3细胞,采用RT-PCR和W estern印迹法分析MAT1基因的表达,锥虫蓝染色计数法和Boyden小室模型分别测定细胞的增殖和体外侵袭能力变化。结果:与对照各组相比,实验组BxPC-3细胞MAT1 mRNA和蛋白在一定时间内均表达下调,其中mRNA表达在24 h和48 h分别下调达55.2%和64.3%(P<0.01);细胞体外增殖和侵袭能力均明显受抑,差异具统计学显著性(P<0.01)。结论:针对MAT1基因的siRNA可抑制胰腺癌细胞的增殖和侵袭能力,MAT1可能是胰腺癌基因治疗的靶点。

一例单纯性高甲硫氨酸血症患儿的MAT1A基因突变分析

目的对1例串联质谱技术新生儿筛查发现的可疑单纯性高甲硫氨酸血症患儿进行致病基因突变检测，为临床诊断和遗传咨询提供依据。方法归纳整理1例单纯性高甲硫氨酸血症患儿的临床资料，提取其基因组DNA，应用半导体测序技术进行高通量测序，对可疑突变用Sanger测序进行验证。结果患儿除血甲硫氨酸升高外无其他临床症状。IonTorrent半导体测序结果显示患儿携带MAT1A基因C．345delA和C．529C〉T突变，二者均为未报道过的新突变，患儿父亲为C．345delA突变携带者，母亲为C．529C〉T突变携带者。结论MAT1A基因C．345delA和C．529C〉T突变可能为这例单纯型高甲硫氨酸血症患儿的致病原因，新一代半导体测序技术是遗传代谢病诊断的重要手段。

青岛地区一例单纯性高甲硫氨酸血症MAT1A基因突变分析

目的对1例在新生儿疾病筛查中利用串联质谱技术发现的可疑单纯性高甲硫氨酸血症患儿进行致病基因突变检测,为临床诊断和遗传咨询提供依据。方法从可疑单纯性高甲硫氨酸血症患儿外周血提取DNA,通过测序技术对可疑基因进行直接测序,对可疑突变进行Sanger验证。结果患儿只有足跟血甲硫氨酸指标升高,无其他临床症状。Ion Torrent半导体测序结果显示患儿携带MAT1A基因c.895C>T和c.1067G>C位点杂合突变,患儿父亲为c.895C>T突变携带者,母亲为c.1067G>C突变携带者。结论 MAT1A基因c.895C>T和c.1067G>C位点杂合突变为这例单纯性高甲硫氨酸血症患儿的致病原因,新一代半导体测序技术是遗传代谢病诊断的重要手段。

新生儿筛查确诊甲硫氨酸腺苷转移酶Ⅰ/Ⅲ缺陷症5例临床分析

目的探讨甲硫氨酸腺苷转移酶Ⅰ/Ⅲ缺陷症的临床和基因变异特点.方法回顾分析串联质谱新生儿筛查发现的5例甲硫氨酸腺苷转移酶Ⅰ/Ⅲ缺陷患儿的临床资料及基因检测.结果22万例新生儿筛查中发现甲硫氨酸腺苷转移酶Ⅰ/Ⅲ缺陷5例,发病率为1/44000.5例患儿中,3例血甲硫氨酸在70~150μmol/L之间.基因检测2例符合常染色体显性遗传、1例符合常染色体隐性遗传.3例随访至今预后良好,另2例血甲硫氨酸持续>500μmol/L;予以特殊饮食治疗,1例头颅磁共振成像和肝功能异常,1例伴有微缺失综合征,发育落后.结论甲硫氨酸腺苷转移酶Ⅰ/Ⅲ缺陷可通过串联质谱新生儿筛查结合基因检测而早期诊断,需要长期随访.

甲硫氨酸腺苷转移酶Ⅰ/Ⅲ缺乏症的新生儿筛查及基因变异研究

目的探讨甲硫氨酸腺苷转移酶Ⅰ/Ⅲ(methionine adenosyltransferaseⅠ/Ⅲ,MATⅠ/Ⅲ)缺乏症的新生儿筛查及MAT1A基因变异情况。方法应用串联质谱技术对泉州地区364545份新生儿样本进行遗传代谢病筛查,应用高通量测序技术结合Sanger测序法对MATⅠ/Ⅲ缺乏症患儿的相关致病基因进行检测,寻找可能的致病变异位点。采用MutationTaster和HSF软件对发现的新变异进行致病性分析预测。结果新生儿筛查检测出3例MATⅠ/Ⅲ缺乏症患儿,发病率为1/121515。氨基酸和酰基肉碱分析结果显示3例患儿的血甲硫氨酸浓度在筛查和随访期间均有不同程度的升高,随访期间生长发育正常。3例患儿均被检测到MAT1A基因变异,共发现3种变异类型,包括2种错义变异c.776C>T(p.Ala259Val)、c.791G>A(p.Arg264His),和1种同义变异c.360C>T(p.Cys120Cys)。MAT1A基因c.776C>T(p.Ala259Val)和c.791G>A(p.Arg264His)变异为已知的致病变异,c.360C>T(p.Cys120Cys)为尚未见报道的新变异。用MutationTaster和HSF对c.360C>T(p.Cys120Cys)进行预测分析,结果显示变异会引起剪接改变,进而影响蛋白的结构和功能。结论本研究较为系统的分析了本地区MATⅠ/Ⅲ缺乏症的新生儿筛查及MAT1A基因变异情况,阐明了本地区MATⅠ/Ⅲ缺乏症的发病率,发现1个新的MAT1A基因变异,丰富了MAT1A基因变异谱,为MATⅠ/Ⅲ缺乏症的诊断提供了依据。