miR-21a-5p靶向MATN2抑制LPS诱导的巨噬细胞损伤的实验研究

目的miR-21a-5p对脂多糖(LPS)处理的RAW264.7巨噬细胞的调控作用及分子机制研究。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测不同浓度LPS处理的巨噬细胞中miR-21a-5p水平;应用miR-21a-5p模拟物(mimics)和阴性对照(miRNA-NC)分别转染LPS处理的巨噬细胞,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡比例;ELISA检测炎性细胞因子水平;TargetScan数据库分析miR-21a-5p的潜在靶基因,蛋白免疫印迹技术(Western blot法)检测MATN2蛋白表达水平;双荧光素酶实验验证miR-21a-5p和MATN2之间的关系。结果随着LPS处理浓度的增加,miR-21a-5p水平逐渐降低。miR-21a-5p mimics转染RAW264.7巨噬细胞后miR-21a-5p水平显著升高。上调LPS处理的巨噬细胞miR-21a-5p水平后,细胞活力显著升高,细胞凋亡比例降低;促炎性细胞因子TNF-α、IL-6和IL-1β水平降低。qRT-PCR和Western blot法结果表明,上调miR-21a-5p水平后,MATN2蛋白表达和mRNA水平明显降低,而下调miR-21a-5p水平后,MATN2蛋白表达和mRNA明显升高。双荧光素酶报告实验显示miR-21a-5p靶向MATN2的mRNA的3′非编码区(3′UTR)。结论miR-21a-5p可以靶向MATN2抑制LPS诱导的巨噬细胞损伤。