解脲支原体Ⅰ型MB抗原主蛋白氮端基因的克隆及原核表达

目的 从新鲜培养的解脲支原体 ( URA) 型培养液获得其 MB抗原主蛋白 N端 1 /3保守区的基因 ,并体外表达 ,获得具有抗原活性的原核表达蛋白 ,为研制广谱、低廉及方便准确的 URA感染的诊断及治疗方法提供物质基础。方法 从新鲜培养的 URA标准株 型培养液提取 DNA模板 ,采用特异引物及聚合酶链方法获得其 MB抗原主蛋白 N端 1 /3保守区的基因 ,经克隆入测序载体验证 DNA大小及序列后 ,将 MB抗原主蛋白 N端 1 /3保守区的基因克隆入高效原核表达载体 ,并在大肠杆菌中表达 ,初步以Western- blot测定表达产物的抗原性即与感染者阳性血清的反应活性。结果 以笔者设计的特异引物 ,能得到预期大小的 PCR产物 ,并能插入预定的克隆载体中测序 ,所得基因的序列符合目的基因的序列 ,其插入原核表达载体能获得表达 ,且表达产物具有抗原活性 ,能与感染患者的血清发生抗原抗体反应。结论 所得到的 MB抗原主蛋白 N端 1 /3保守区片段的基因 ,与 GENE BANK检索序列一致。在大肠杆菌中表达此片段所获得的表达产物 ,有抗原活性 ,有望用于

解脲支原体血清3型MB抗原N端的表达纯化及免疫学检测

目的 对解脲支原体（ＵＵ）血清３型ＭＢ抗原Ｎ端作蛋白的表达、纯化。方法 采用pGEX2T载体构建的重组质粒，用化学诱导剂 IPTG诱导表达，应用 Western斑点印迹法检测纯化融合蛋白的免疫学活性。结果 得到的ＵＵ ３型 ＭＢ抗原基因 ５'端重组克隆菌株，成功地诱导表达并纯化了 Ｎ端 ４３ＫＤ的融合蛋白，通过斑点印迹法证实该蛋白具有很好的免疫活性。结论 本实验成功地对解脲支原体血清３型ＭＢ抗原Ｎ端作了蛋白的表达与纯化，并证明具有很好的免疫活性。

解脲支原体金标免疫层析检测试剂盒的研制

目的研制一种解脲支原体(Uu)胶体金免疫层析试剂盒,用于临床快速检测、流行病学调查。方法原核表达解脲支原体MB(Uu-MB)蛋白,制备Uu-MB单抗后胶体金标记,采用双抗体夹心法制备试剂盒,评价试剂盒的特异性、敏感性、稳定性及符合率。结果对Uu阳性培养物和Uu-MB具有良好特异性;37℃放置12d质量稳定;试剂盒与(Uu)支原体分离鉴别管的检测阳性率分别为29.59%和71.42%;Uu金标检测试剂盒与Uu分离鉴别管的阳性、阴性符合率为41.28%、100.0%;Uu分离鉴别管培养物经PCR鉴定,两者的阳性、阴性符合率为100%、75.65%。结论研制的试剂盒操作简便,具有特异性强、敏感性高等特点,是一种适宜普及推广的Uu感染检测产品。