解脲支原体Ⅰ型MB抗原主蛋白氮端基因的克隆及原核表达

目的 从新鲜培养的解脲支原体 ( URA) 型培养液获得其 MB抗原主蛋白 N端 1 /3保守区的基因 ,并体外表达 ,获得具有抗原活性的原核表达蛋白 ,为研制广谱、低廉及方便准确的 URA感染的诊断及治疗方法提供物质基础。方法 从新鲜培养的 URA标准株 型培养液提取 DNA模板 ,采用特异引物及聚合酶链方法获得其 MB抗原主蛋白 N端 1 /3保守区的基因 ,经克隆入测序载体验证 DNA大小及序列后 ,将 MB抗原主蛋白 N端 1 /3保守区的基因克隆入高效原核表达载体 ,并在大肠杆菌中表达 ,初步以Western- blot测定表达产物的抗原性即与感染者阳性血清的反应活性。结果 以笔者设计的特异引物 ,能得到预期大小的 PCR产物 ,并能插入预定的克隆载体中测序 ,所得基因的序列符合目的基因的序列 ,其插入原核表达载体能获得表达 ,且表达产物具有抗原活性 ,能与感染患者的血清发生抗原抗体反应。结论 所得到的 MB抗原主蛋白 N端 1 /3保守区片段的基因 ,与 GENE BANK检索序列一致。在大肠杆菌中表达此片段所获得的表达产物 ,有抗原活性 ,有望用于

解脲支原体MB抗原的研究进展

解脲支原体与多种疾病有关,但引起疾病的确切机制尚不清楚。MB抗原是解脲支原体感染时被识别的主要外膜抗原,具有种特异性,包含血清型特异的和交叉反应的抗原决定簇。编码MB抗原的基因长1200多个碱基,N端1/3为保守区,包含群特异的抗原决定簇;C端2/3是由重复序列组成的可变区,包含型特异的抗原决定簇,对该抗原的研究及对于研究疾病的发病机制和免疫机制起重要作用。

解脲支原体血清3型MB抗原N端的表达纯化及免疫学检测

目的 对解脲支原体（ＵＵ）血清３型ＭＢ抗原Ｎ端作蛋白的表达、纯化。方法 采用pGEX2T载体构建的重组质粒，用化学诱导剂 IPTG诱导表达，应用 Western斑点印迹法检测纯化融合蛋白的免疫学活性。结果 得到的ＵＵ ３型 ＭＢ抗原基因 ５'端重组克隆菌株，成功地诱导表达并纯化了 Ｎ端 ４３ＫＤ的融合蛋白，通过斑点印迹法证实该蛋白具有很好的免疫活性。结论 本实验成功地对解脲支原体血清３型ＭＢ抗原Ｎ端作了蛋白的表达与纯化，并证明具有很好的免疫活性。

解脲支原体1型MB抗原保守区基因片段的克隆、表达及纯化

目的 以解脲支原体1型培养液为模板，PER获得其MB抗原保守区部分基因，进行体外表达和纯化。方法用ExPasy网上软件Protscale分析Uu14个血清型的MB蛋白结构特点及抗原特性，选定14个血清型均在该蛋白同一保守区域有较好的抗原性，针对该序列设计特异性引物，并以UU血清1型DNA为模板进行PER，获得其MB抗原基因相应的片断，克隆入表达载体经测序鉴定后。在大肠杆菌中表达并纯化，以Western—blot鉴定表达产物。结果 准确扩增了解脲支原体1型MB抗原保守区基因片段，并在大肠杆菌中获得表达。结论 成功构建了pQE30／MB抗原部分保守序列的原核表达载体，在体外成功表达并纯化。表达和纯化的产物具有免疫反应性。

解脲支原体金标免疫层析检测试剂盒的研制

目的研制一种解脲支原体(Uu)胶体金免疫层析试剂盒,用于临床快速检测、流行病学调查。方法原核表达解脲支原体MB(Uu-MB)蛋白,制备Uu-MB单抗后胶体金标记,采用双抗体夹心法制备试剂盒,评价试剂盒的特异性、敏感性、稳定性及符合率。结果对Uu阳性培养物和Uu-MB具有良好特异性;37℃放置12d质量稳定;试剂盒与(Uu)支原体分离鉴别管的检测阳性率分别为29.59%和71.42%;Uu金标检测试剂盒与Uu分离鉴别管的阳性、阴性符合率为41.28%、100.0%;Uu分离鉴别管培养物经PCR鉴定,两者的阳性、阴性符合率为100%、75.65%。结论研制的试剂盒操作简便,具有特异性强、敏感性高等特点,是一种适宜普及推广的Uu感染检测产品。

胎盘组织中解脲脲原体感染的检测与分型

应用扩增解脲脲原体（Ｕｕ）ＭＢ抗原基因的ＰＣＲ方法与培养法对照检测了３２例新鲜胎盘组织，结果ＰＣＲ扩增阳性８例，其中属于生物Ⅰ型Ｕｕ５例，生物Ⅱ型３例，ＰＣＲ扩增阳性的新生儿出生时体重平均比扩增阴性的新生儿低０６２ｋｇ，且以感染Ｕｕ生物Ⅰ型者更为显著，培养法检出Ｕｕ阳性５例。结果提示胎盘组织中Ｕｕ检出率，ＰＣＲ法显著高于培养法，感染胎盘的Ｕｕ可引起新生儿体重降低，可能与Ｕｕ生物Ⅰ型有关。