解脲支原体Ⅰ型MB抗原主蛋白氮端基因的克隆及原核表达

目的 从新鲜培养的解脲支原体 ( URA) 型培养液获得其 MB抗原主蛋白 N端 1 /3保守区的基因 ,并体外表达 ,获得具有抗原活性的原核表达蛋白 ,为研制广谱、低廉及方便准确的 URA感染的诊断及治疗方法提供物质基础。方法 从新鲜培养的 URA标准株 型培养液提取 DNA模板 ,采用特异引物及聚合酶链方法获得其 MB抗原主蛋白 N端 1 /3保守区的基因 ,经克隆入测序载体验证 DNA大小及序列后 ,将 MB抗原主蛋白 N端 1 /3保守区的基因克隆入高效原核表达载体 ,并在大肠杆菌中表达 ,初步以Western- blot测定表达产物的抗原性即与感染者阳性血清的反应活性。结果 以笔者设计的特异引物 ,能得到预期大小的 PCR产物 ,并能插入预定的克隆载体中测序 ,所得基因的序列符合目的基因的序列 ,其插入原核表达载体能获得表达 ,且表达产物具有抗原活性 ,能与感染患者的血清发生抗原抗体反应。结论 所得到的 MB抗原主蛋白 N端 1 /3保守区片段的基因 ,与 GENE BANK检索序列一致。在大肠杆菌中表达此片段所获得的表达产物 ,有抗原活性 ,有望用于