黄芪注射液对basal-like型乳腺癌细胞MDA-MB-468增殖的影响

目的:观察黄芪对basal-like乳腺癌细胞MDA-MB-468和小鼠骨髓基质干细胞(murine bone marrow stromal stem cells,mMSCs)增殖的影响及其异同。方法:用不同浓度的黄芪注射液(Astragalus injection,AI)分别干预MDA-MB-468和mMSCs,不加AI培养2d的MDA-MB-468细胞作为空白对照。用相差倒置显微镜观察细胞形态,透射电子显微镜观察细胞超微结构。运用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测AI对MDA-MB-468的细胞毒性作用。流式细胞术检测AI对细胞周期和细胞凋亡的影响。酶比色法监测MDA-MB-468细胞培养上清乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)含量。免疫细胞化学法检测AI对MDA-MB-468表皮生长因子受体(epider- mal growth factor receptor,EGFR)和p53蛋白表达的影响。结果:1g/ml AI对MDA-MB-468的增殖有明显的抑制作用,且具有时效关系。1g/ml AI对mMSCs的增殖有明显的抑制作用,但其抑制作用不及顺铂,而0.1g/ml AI对mMSCs的增殖有明显的促进作用。不同浓度的AI能诱导MDA-MB-468细胞凋亡。不同浓度AI组和顺铂组MDA-MB-468细胞培养上清LDH水平,与空白对照组相比,差异均无统计学意义。AI能显著下调EGFR和p53蛋白的表达。结论:AI对MDA-MB-468和mMSCs增殖的影响与药物浓度有关,其抑制MDA-MB-468增殖和诱导凋亡的机制可能通过下调EGFR和p53蛋白的表达而实现。

自噬抑制联合吉非替尼对MDA-MB-468细胞敏感性的影响

目的自噬是细胞内的一种溶酶体降解过程,通过降解损伤的蛋白以及衰老的细胞器来维持细胞稳态,也是肿瘤治疗耐药性产生的原因之一。本实验探讨自噬抑制剂联合吉非替尼(gefitinib,GE)对人三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)MDA-MB-468细胞敏感性的影响。方法常规复苏、传代培养MDA-MB-468细胞,待细胞处于对数生长期后分别以GE单药或联合自噬抑制剂3-methyladenine(3MA)或联合bafilomycin A1(BAF)处理细胞。MTT比色法检测细胞相对增殖率,克隆形成实验检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测自噬相关蛋白的表达。结果自噬抑制剂明显增加GE的细胞毒性,MTT比色法检测GE联合3MA、BAF处理MDA-MB-468细胞48h后半抑制率(IC50)分别为(4.1±0.2)和(3.8±0.3)μmol/L,显著低于单用GE组的(7.0±0.2)μmol/L,Z=-2.611,P<0.017。克隆形成实验显示,GE与自噬抑制剂联合3MA、BAF克隆形成率分别为(29.85±5.54)%和(33.58±6.31)%,显著低于单用GE组(63.46±8.32)%,Z=-2.309,P<0.017。细胞凋亡的研究显示,自噬抑制可促进细胞凋亡,GE联合3MA、BAF后,凋亡率分别为(23.37±2.71)%、(18.71±2.81)%,高于单用GE组(12.43±3.18)%,Z=-2.309,P<0.017。蛋白质印迹法检测结果显示,GE处理诱导自噬增加,自噬抑制剂联合GE后,MDA-MB-468细胞Cleaved Caspase-9和Cleaved Caspase-3蛋白的活性增加。结论自噬抑制可增加MDA-MB-468细胞对GE的敏感性,自噬抑制剂联合GE可能通过启动Caspase级联反应促进MDA-MB-468细胞凋亡。

腺病毒载体介导的p53基因可增强乳腺癌细胞系MDA—MB-468对表皮生长因子受体抑制剂的敏感性

目的观察腺病毒载体介导的p53基因（Ad—p53）能否增加三阴性乳腺癌细胞系MDA—MB-468对表皮生长因子受体（EGFR）抑制剂吉非替尼的敏感性。方法以Ad-p53和（或）吉非替尼处理MDA—MB-468细胞系，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡，Western blot法检测p53和EGFR蛋白的表达以及P13K／Akt通路和凋亡通路相关蛋白的表达。建立裸鼠移植瘤模型，观察Ad—p53联合吉非替尼对裸鼠移植瘤的治疗作用，免疫组织化学法检测裸鼠移植瘤组织中p53的表达。结果MTY法检测结果显示，Ad—p53感染MDA—MB-468细胞后，MDA—MB-468细胞对吉非替尼的敏感性增加，半数抑制浓度为4．5μmol／L。流式细胞术检测结果显示，对照组、Ad-p53组、吉非替尼组和联合组MDA—MB-468细胞的凋亡率分别为8．5％、17．4％、20．5％和32．6％，Ad—p53联合吉非替尼能够明显增加细胞凋亡（P〈0．05）。Westernblot法检测结果显示，Ad-053联合吉非替尼后，MDA—MB-468细胞中P—Akt蛋白的表达明显下调（P〈0．01），caspase-9和活化caspase-3蛋白的活性增加（均P〈0．01）。裸鼠体内实验的结果显示，Ad—p53组、吉非替尼组和联合组的肿瘤生长抑制率分别为35．7％、28．7％和74．4％，Ad-p53和吉非替尼对MDA—MB-468细胞裸鼠移植瘤的生长均具有抑制作用，且二者联合可明显抑制肿瘤生长（均P〈0．05）。免疫组化检测结果显示，对照组、Ad-p53组、吉非替尼组和联合组裸鼠移植瘤肿瘤组织中p53蛋白的阳性率分别为45．2％、80．1％、50．7％和90．6％，Ad-p53组和联合组裸鼠移植瘤中p53蛋白的表达明显增加（P〈0．01）。结论Ad-p53可能通过下调P13K／Akt通路相关蛋白的表达增加MDA-MB-468细胞对吉非替尼的敏感性；Ad—p53联合吉非替尼可能通过启动easpase级联反应促进MDA—MB-468细胞凋亡。