MBD2通路在重症哮喘中作用的研究进展

重症哮喘是一种对糖皮质激素治疗不敏感的慢性炎性疾病。在重症哮喘的发病过程中,辅助性T细胞17(Th17)及白细胞介素17(IL-17)起着重要的作用,主要是通过以聚集中性粒细胞浸润来加重哮喘的严重程度。甲基-CpG结合域蛋白2(MBD2)在Th17细胞由初始CD4+T细胞分化而来的过程中起着重要作用,能正向调控Th17分化和IL-17表达。MBD2与干扰素调节因子4(IRF4)、细胞因子信号转导抑制蛋白3(SOCS3)、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)及畸胎样激酶1(MINK1)启动子区的CpG岛结合,进而可导致甲基化,调节Th17细胞分化,并参与严重哮喘的发病机制。

MBD4蛋白在子宫内膜腺癌中的表达及临床意义

目的探讨MBD4蛋白在子宫内膜腺癌中的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学SP法检测45例正常子宫内膜和60例子宫内膜腺癌中MBD4蛋白的表达,并分析其与临床分期和病理分级的关系。结果 MBD4蛋白在正常子宫内膜和子宫内膜腺癌中的阳性表达率分别为60%及25%,呈降低趋势,差异具有统计学意义(P<0.05)。MBD4蛋白的表达与子宫内膜腺癌的临床分期、病理分级、子宫肌层浸润深度、淋巴转移无相关性。结论 MBD4蛋白的缺失在子宫内膜腺癌发病及治疗中有一定作用。

重组人MBD4蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化及活性分析

为获得重组人MBD4蛋白,将编码MBD4的开放式阅读框(ORF)插入原核表达载体pGEX-6P1GST基因下游的多克隆位点(MCS).将获得的表达质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)菌株扩大培养并用IPTG诱导融合蛋白的表达.用谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B亲和介质从菌体裂解液中纯化了GST-MBD4融合蛋白.经过Prescisionprotease专一性裂解成功去除了融合蛋白上的GST标签.通过MonoQ阴离子交换层析获得了纯度达94%以上的MBD4蛋白,该蛋白具有甲基化DNA结合和糖苷酶生物活性.

DNA甲基化结合蛋白

DNA甲基化是哺乳动物细胞中最重要的表观遗传学修饰之一,大约70%—80%的CpG发生这种甲基化修饰.异常的甲基化在许多癌症中频发,启动子CpG岛的高甲基化作为普遍的失活机制介导抑癌基因沉默.甲基化信号由甲基化结合蛋白来转译,它们能够特异性识别并结合至甲基化位点通过募集辅阻遏复合物例如组蛋白去乙酰化酶(Histone Deacetylase,HDAC)等建立沉默的染色质,从而在DNA甲基化和基因沉默中起桥梁作用.目前,哺乳动物中已鉴定出的甲基化结合蛋白有三类,分别是:MBD(Methyl-CpG-Binding Domain)、Kaiso以及SRA(Set and Ring finger-associated)家族.本文就这三大家族(以MBD为主)各自的结构、功能、结合甲基化DNA的特性以及它们在某些疾病发生中的作用做一综述.

DNA甲基化结合蛋白MBD家族的生物信息学分析

为了鉴定MBD基因家族成员,应用在线数据库资源,结合生物信息学方法进行搜索和鉴定MBD基因家族成员,搜索后获得6个MBD蛋白序列,为了后续研究方便命名为MBD1~MBD6。并对其氨基酸序列的理化性质、基因结构、蛋白结构、保守结构域和表达模式进行了预测和分析,并构建了MBD家族系统发生树。结果表明,MBD家族成员在进化过程中相对保守,但MBD1和MBD4相对其他4个家族成员向不同方向进化。通过对所有MBD基因的表达谱分析得知该基因家族在各组织中均有表达,个别组织和细胞中表达量高低不同表明该家族基因具有一定的时空性和组织特异性,不同基因之间的表达模式差异明显。通过分析家族成员特点为后续实验研究提供理论基础。

植物甲基结合蛋白(MBD)

DNA甲基化是生物体内普遍存在的一种基因修饰,甲基结合蛋白(MBD)是与甲基化DNA结合的反式作用因子,在植物生长发育过程中起调控作用。本文介绍了植物DNA甲基化和MBD蛋白在植物生长发育调控中的研究进展,并对其研究前景作了展望。

一种快速高效的全基因组甲基化CpG岛富集方法的建立

高甲基化的CpG岛所致基因表观遗传学转录失活已经成为肿瘤表观基因组学研究的重要内容,但尚未建立一种能快速在全基因组水平上进行甲基化CpG岛的富集方法。利用甲基化结合蛋白MBD2b具有特异性结合甲基化DNA的特性,建立了一种基于DNA免疫共沉淀技术的全基因组甲基化CpG岛的富集方法。在大肠杆菌中表达重组的GST-MBD2b蛋白,通过Glutathione Sepharose 4B对重组蛋白进行纯化,制备成亲和层析柱,利用在不同的盐离子强度下甲基化DNA和非甲基化DNA的结合能力不同,对甲基化DNA进行富集。用甲基化酶SssI处理过的DNA片段与非甲基化DNA片段进行富条件的摸索,发现0.5mol/L KCl的浓度是甲基化DNA片段和非甲基化DNA片段得以分开的临界条件。样品的富集效率用Real Time PCR进行检测。结果表明,这种方法能够实现对全基因组甲基化DNA的有效富集且最高的富集倍数可达到100多倍。富集到的甲基化DNA可以进行后续的定量PCR,DNA测序和全基因组芯片的分析等工作,为大规模分析全基因组CpG岛甲基化的改变奠定了基础。