MBL的提纯及初步鉴定

目的 :本研究拟从人混合血浆中提取MBL并初步鉴定 ,为进一步深入研究MBL的一些特性奠定基础。方法 :取混合血浆通过前处理后经过Mannan -Agarose亲和层析的方法纯化 ,收集含蛋白的洗脱液 ,充分透析、浓缩即得 ,用SDS -PAGE对提取物质进行鉴定。结果 :用纯化后的产物经过SDS -PAGE ,在 30kDa处显示两条谱带 (对应的分子量约为 2 8kDa和32kDa处 ) ,回收率为 2 0 %。结论 :成功用二步亲和层析法从健康人血浆中提纯MBL ,取得了比较满意的结果。

自制肝素亲和柱分离纯化载脂蛋白H及其抗体制备与鉴定

目的:自制肝素-琼脂糖6B亲和柱提纯人血清载脂蛋白H(apoH),免疫制备多克隆抗体,为大量制备与进一步研究做准备。方法:利用间接还原胺化法制备亲和层析柱,并优化反应条件。运用高氯酸沉淀、离子交换及亲和层析从人血清中纯化抗原,制备兔源多克隆抗体。结果:自制亲和柱肝素结合量约5mg/g(介质体积)。纯化的抗原经SDS-PAGE鉴定分子量约50kD,无杂带;16种氨基酸组成分析结果与报道一致。多克隆抗体与购置的国外抗体一样,在进行ELISA与dot-ELISA时与小牛血清白蛋白有交叉反应;但在变性且还原的条件下,Western blot结果显示无交叉反应。结论:自制亲和柱成本低、亲和性好、肝素结合稳定,用之分离纯化得到了高纯度apoH;兔多克隆抗体用于检测血清中载脂蛋白H含量时需进一步纯化。

亲和层析技术在现代蛋白质研究中的应用及新发展

亲和层析技术是目前重要的蛋白质研究技术之一。本文介绍了免疫亲和层析、凝集素亲和层析、核酸亲和层析、金属螯合亲和层析以及染料配体亲和层析等几类常规亲和层析的原理及在蛋白质分离纯化以及分析鉴定方面的应用;简要叙述了当今蛋白质组研究中新出现的两种与亲和层析有关的技术,串联亲和层析技术和SELDI芯片技术。并且提出了存在的问题以及今后发展趋势。

链霉亲和素纯化和鉴定方法的研究

对链霉亲和素进行纯化、鉴定，采用冷钝化的方法去除培养液中大部分杂蛋白，用亲和层析法从链霉菌L-183的培养液中纯化链霉亲和素（SA），经试验，SA回收率为75％～85％。鉴定表明，自制SA的分子量为74．5kD，每分子SA可结合3．2个生物素分子，活性为11．2U／mg，pI为7．4。自制SA各项生物学性质与文献报道相符。

CTLA-4/Ig融合蛋白在COS-7中的表达、纯化及鉴定

目的 探讨pCTLA 4/Ig融合蛋白表达载体在哺乳动物细胞中的表达及表达产物的鉴定、纯化 ,为其功能研究和临床应用奠定基础。方法 将pCTLA 4/Ig表达质粒转染COS 7细胞 ,双抗体夹心ELISA检测细胞培养上清中融合蛋白表达 ;ProteinA亲和层析纯化 ,SDS PAGE、Western印迹、3H TdR掺入等进行分子量、纯度、抗原特异性及生物学活性鉴定。结果 在pCTLA 4/Ig质粒转染后的 48h和 96h上清中 ,均能检测到CTLA 4/Ig融合蛋白表达 ;经亲和层析纯化后 ,在SDS PAGE胶上出现一条分子量约 5 0× 10 3 的与预期分子量大小相符的蛋白条带 ,该蛋白能与抗人CTLA 4单抗特异结合 ;该纯化融合蛋白能抑制人MLR ,抑制率为6 0 %～ 70 %。结论 在哺乳动物细胞中成功地表达并纯化了有生物学活性的重组人CTLA 4/Ig融合蛋白。