中国荷斯坦牛MBL-C蛋白生物信息学分析

为深入了解牛MBL-C蛋白的结构功能特点、作用机制及其结构基础,以中国荷斯坦牛的MBL-C蛋白序列为研究对象,使用多种软件工具对其进行生物信息学分析。结果表明,中国荷斯坦牛MBL-C蛋白由249aa构成,不稳定指数29.71,脂肪系数68.19,亲水性氨基酸占68.46%,疏水性氨基酸占31.54%,总平均亲水性-0.403,为亲水性稳定蛋白。含Sec/SPⅠ常规信号肽,无跨膜结构域,主要定位于胞外,为经典分泌蛋白。预测到23个磷酸化位点及其对应激酶,未预测到N-糖基化位点和O-糖基化位点。分别有27.71%、4.82%、51.41%、16.06%的氨基酸参与形成α-螺旋、β-转角、无规则卷曲、延伸链,获得了可信度和质量较高的三聚体三维立体结构模型。本研究可为牛MBL-C蛋白结构与功能、作用机制阐释乃至牛抗性遗传、分子育种等深入研究提供参考。

猪MBL-C及DUSP1基因变异对猪繁殖与呼吸综合征病毒抗性影响的初步分析

分析了MBL-C-exon6-A296G和DUSP1-exon4-C308T2个SNP对猪繁殖与呼吸综合征病毒抗性的影响。首先从猪的尾组织及血液中提取DNA,然后利用等位基因特异性聚合酶链反应(allele specific-polymerase chain reaction,AS-PCR)技术和SAS(9.1)软件在98头大约克猪和166头长大猪群体中进行上述2个SNP位点多态性与猪繁殖与呼吸综合征病毒抗性之间的相关性分析。结果显示,MBL-C基因突变位点与DUSP1基因突变位点在两个群体中都存在3种基因型,分别为AA、AG、GG和CC、CT、TT基因型。相关性分析表明,在大约克群体中MBL-C基因位点AG基因型发病风险可能只有GG基因型的0.37倍(P=0.039);在长大群体中该位点AA基因型发病风险可能只有GG基因型的0.11倍(P=0.04),并且在该群体中的初生死仔率方面(含木乃伊、死胎),这3种基因型的差异虽然没有达到显著水平,但是AA基因型的平均数初生死仔率(0.14)低于AG基因型(0.45)和GG基因型(0.44)。DUSP1基因SNP位点各个基因型在两个群体中的猪繁殖与呼吸综合征病毒抗性及产死仔率均没有显著的影响。本研究认为MBL-C-exon6-A296G这个SNP位点对猪繁殖与呼吸综合征病毒的抗性有影响且A等位基因可能为抗性基因。

我院脑膜败血伊丽莎白菌的临床分布、产酶情况及耐药性分析

目的:探讨我院脑膜败血伊丽莎白菌的临床分布、产酶情况及耐药特征,为临床治疗和预防感染提供参考。方法:回顾性分析我院2011-2015年脑膜败血伊丽莎白菌致医院感染患者的临床资料,采用全自动细菌鉴定仪进行细菌鉴定,采用纸片扩散(K-B)法进行药敏试验,采用K-B法、双纸片增效法、改良三维试验法进行超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、头孢菌素酶(AmpC)、金属β-内酰胺酶(MBL)的表型确证。结果:共检出脑膜败血伊丽莎白菌76株,主要来源于痰液标本(75.0%),其患者主要来自于重症医学科(57.9%);76株脑膜败血伊丽莎白菌对亚胺培南、美罗培南、多黏菌素B、妥布霉素、庆大霉素、阿米卡星、头孢吡肟等7种抗菌药物的耐药率为100%,对利福平、复方磺胺甲噁唑等及3种含酶抑制剂的耐药率均<30%,对万古霉素、米诺环素的耐药率为0;58株细菌产ESBLs(76.3%),47株细菌产MBL(61.8%),未检出细菌产AmpC。结论:脑膜败血伊丽莎白菌可导致免疫力低下患者发生医院感染;该菌具有较高的耐药水平,可能与ESBLs、MBL高检出率有关;万古霉素与米诺环素是治疗该菌感染的首选药物。

长白猪甘露聚糖结合凝集素-C基因启动子区的克隆与序列分析

为了分析猪甘露聚糖结合凝集素C基因的多态性,根据GenBank上已发表的猪甘露聚糖结合凝集素C基因启动子区序列,设计一对特异性引物,通过RT-PCR法成功地从长白猪肝脏中克隆到MBL-C基因启动子区序列。结果表明扩增序列全长2030bp,与已发表的该序列相比具有3个SNPs位点,即-1636位点为T,-1614位点为A,-251位点为C,在-251位点与高水平表达的pMBL-C启动子区位点不同,从A突变为C。研究为下一步分析pMBL-C的启动子区多态性奠定了基础。

类风湿关节炎患者血清MBL、MASP-2、HsCRP与C_3水平的相关性

目的研究类风湿关节炎(RA)患者血清中甘露糖结合凝集素(MBL)/MBL相关的丝氨酸蛋白酶-2(MASP-2)、Hs CRP和C3水平的相关性。方法收集50例RA患者(活动期和非活动期各25例)和40例健康对照者空腹静脉血,用酶联免疫吸附试验和免疫比浊试验分别检测血清MBL、MASP-2、Hs CRP和C3的水平。结果 RA组活动期和非活动期患者血清中MBL水平均显著低于健康对照组(10.05±2.14 ng/m L vs 26.97±11.78 ng/m L;14.79±3.93 ng/m L vs 26.97±11.78 ng/m L,P<0.05);RA组活动期和非活动期患者血清中MASP-2水平均显著低于健康对照组(75.90±9.21 ng/m L vs 251.78±34.50 ng/m L;107.8±14.90 ng/m L vs251.78±34.50 ng/m L)(P<0.05);RA组活动期和非活动期患者血清中Hs CRP水平显著高于健康对照组(40.53±34.81 mg/L vs1.42±1.70 mg/L;2.97±2.51 mg/L vs 1.42±1.70 mg/L,P<0.05),C3水平3组无差异;双变量Pearson相关性分析,RA患者组MBL与MASP-2含量均呈显著正相关(r=0.550,P=0.001)、与Hs CRP含量呈低度负性相关(r=-0.323,P=0.022);与C3含量无相关(r=0.022,P=0.882)。RA组MASP-2与Hs CRP含量呈低度负性相关(r=-0.453,P=0.001);与C3含量无相关(r=0.049,P=0.738)。经ROC曲线分析,Hs CRP曲线下面积最大(0.844,P=0.001),MASP-2和MBL曲线下面积较小(0.025,P=0.001;0.266,P=0.001),Hs CRP(84%)对RA诊断的敏感性高于MBL(10%)、MASP-2(40%)。结论 MBL与MASP-2水平与Hs CRP呈负相关关系,RA患者关节的炎症损伤程度越重,则血清MBL与MASP-2水平越低,提示MBL与MASP-2参与RA病理损伤过程,但二者的敏感性均较低,不能做为RA诊断及疾病活动程度评价的独立指标。

七彩神仙鱼C型凝集素家族成员CD302和MBL的克隆及在病原刺激下的免疫应答

七彩神仙鱼(Symphysodon aequifasciatus)具独特的亲代抚育行为,前期研究发现2种C型凝集素在育幼亲本皮肤中高表达,但表达模式不同,预示着潜在的功能分化。为探究两者潜在免疫功能的差异性,克隆获得了七彩神仙鱼C型凝集素基因SaCD302和SaMBL,并分析了病原刺激下的免疫应答模式。结果显示,SaCD302和SaMBL的开放阅读框(ORF)长度分别为741和795 bp,分别编码246和264个氨基酸。SaCD302的氨基酸序列包含一个信号肽(aa 1—29),一个CTL结构域(aa 32—169)和一个跨膜结构域(aa 184—206)。SaMBL的氨基酸序列包含两个低复杂度区域(aa 32—92和aa 104—121)和一个典型的CTL结构域(aa 137—263)。SaCD302和SaMBL的氨基酸序列与尼加拉瓜湖始丽鱼(Archocentrus centrarchus)对应氨基酸序列的同源性最高。SaCD302在各组织中均有表达,头肾中表达量最高,其次为肝脏和鳃;SaMBL在皮肤中高表达,在肠道、肝脏、脾脏和性腺中低表达。嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)感染后,SaCD302在脾脏、头肾、肠道和皮肤中的表达量均显著上调,SaMBL仅在头肾、肠道和皮肤中表达上调,且时序性不同,表明二者可能在七彩神仙鱼免疫防御中发挥不同作用。

慢性丙型肝炎患者血浆内毒素和血清MBL变化及临床意义

目的:探讨了慢性丙型肝炎患者血浆内毒素和血清甘露聚糖结合凝集素(MBL)水平的变化及意义。方法:应用鲎试验和酶联法对31例慢性丙型肝炎患者进行了血浆内毒素和血清MBL测定,并与35名正常健康人作比较。结果:慢性丙型肝炎患者血浆内毒素和血清MBL水平均非常显著地高于正常人水平(P<0.01),且内毒素水平与MBL呈正相关(r=0.4784,P<0.01)。结论:血浆内毒素和血清MBL可反映HCV感染导致慢性病理状态,它可能也参与肝脏纤维化的过程。