MBP不同cDNA序列真核表达载体的构建及鉴定

目的以pEGFP-N1质粒载体为介导,构建针对髓鞘碱性蛋白(MBP)不同isoform cDNA的表达载体。方法将三段不同MBPcDNA序列克隆入pEGFP-N1质粒,转化DH5α感受态细胞,酶切鉴定及测序。结果测序结果显示插入的三段目的片段的序列与理论序列一致。结论笔者成功构建了pEGFP-N1-MBP21.5,pEGFP-N1-MBP18.5和pEGFP-N1-MBP17.3三个重组真核表达载体,为进一步研究不同MBP cDNA在真核细胞中的表达情况和功能差异奠定基础。

人脑髓鞘碱性蛋白基因cDNA在大肠杆菌中表达的初步研究

将ＢａｍＨⅠ酶切的人脑髓鞘碱性蛋白（ＭＢＰ）基因ｃＤＮＡ克隆片段和表达载体ｐＧＥＸ－５Ｔ重组后转化大肠杆菌，再筛选、增殖和ＩＰＴＧ诱导。结果显示：阳性克隆１０％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ有２条特异区带（４９ｋｄ和３５ｋｄ）；Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹杂交证实该区带具ＭＢＰ抗原特异性；蛋白质含量测定、免疫斑点杂交和ＥＬＩＳＡ分析，该膜蛋白表达量占菌体裂解液蛋白质总量６％（５０ｍｇ／Ｌ菌液）。