电针神庭、百会穴对MCAO/R大鼠γ-氨基丁酸受体Gabbr1表达的影响

目的通过观察电针神庭、百会穴对大脑中动脉缺血再灌注模型(middle cerebral artery occlusion and reperfusion,MCAO/R)认知功能障碍大鼠海马区γ-氨基丁酸B受体gabbr1表达的影响,探讨电针改善MCAO/R大鼠学习记忆能力的可能机制。方法27只雄性健康SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组;模型组、电针组采用longa线栓法制备MCAO/R模型,假手术组仅分离颈总、颈内及颈外动脉,不插入线栓,造模后通过longa五分法验证模型。电针组取神庭、百会穴在造模后24 h进行干预,治疗7 d;干预第3 d采用Morris水迷宫实验检测各组大鼠学习记忆能力,为期4 d;干预第7 d断头取大鼠完整海马组织,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组大鼠海马组织中gabbr1 mRNA的表达。结果与假手术组相比,模型组水迷宫实验的第三象限距离比显著减小(P<0.05),穿越平台次数减少(P<0.01);与模型组相比,电针组经治疗后第三象限距离比扩大(P<0.05),穿越平台次数增加(P<0.05)。与假手术组相比,模型组海马区gabbr1 mRNA表达量显著增高(P<0.01);与模型组相比,电针组海马区gabbr1 mRNA表达降低(P<0.01)。结论电针神庭、百会穴能改善脑缺血再灌注大鼠的学习记忆能力,其机制可能与调节gabbr1 mRNA在海马中的表达有关。

额尔敦-乌日勒对MCAO/R大鼠脑前额叶皮质BDNF及NGF表达的影响

目的:探讨额尔敦-乌日勒对大脑中动脉阻塞/再灌注损伤(Middle Cerebral Artery Occlusion/Reperfusion,MCAO/R)大鼠皮质脑源性神经营养因子(Brain-Derived Neurotrophic Factor,BDNF)及神经生长因子(Nerve Growth Factor,NGF)的影响。方法:取清洁级健康SD大鼠60只,随机分为假手术组、模型组、尼莫地平片组、额尔顿-乌日勒组,采用改良Zea-Longa法,制备MCAO/R模型。实验结束后,各组大鼠麻醉、取脑,采用HE染色、SP等免疫组化方法评价脑组织病理形态学的改变情况,并且采用双抗夹心ELISA法和荧光定量RT-PCR法检测大鼠脑前额叶皮质BDNF m RNA、NGF m RNA相对表达量及其蛋白含量。结果:与模型组相比,额尔敦-乌日勒组大鼠脑前额叶皮质坏死细胞数显著减少(P<0.05),BDNF、NGF蛋白含量及m RNA表达明显增加(P<0.05)。结论:额尔敦-乌日勒可上调MCAO/R大鼠脑前额叶皮质BDNF、NGF表达,促进星形胶质细胞活化,从而保护神经元,进而起到脑保护作用,这可能是额尔敦-乌日勒治疗"白脉"病的传统功效机制之一。

蒙成药额日敦-乌日勒对大脑中动脉阻塞再灌注模型(MCAO/R)大鼠血清及脑组织IL-6、IL-1β的影响

目的:探讨额日敦-乌日勒对大脑中动脉阻塞再灌注模型(MCAO/R)大鼠血清及脑内IL-6、IL-1β的影响。方法:选取144只wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、对照组、额日敦-乌日勒低、中、高剂量组共6组。除假手术组外其他组采用改良Zea-longa法,建立MCAO/R模型。手术造模成功后24h开始灌胃给药,治疗组(额日敦-乌日勒125mg/kg、额日敦-乌日勒250mg/kg、额日敦-乌日勒500mg/kg),对照组(血塞通236.25mg/kg)。假手术组、模型组wistar大鼠每日一次灌胃纯净水。分别再灌注1、3、7天给药后行神经功能评分、心脏取血、断头取脑组织。采用ELISA法检测血清、脑组织IL-6、IL-1β的含量进行统计学分析。结果:wistar大鼠再灌注1、3、7天模型组与假手术组相比血清、脑组织IL-6、IL-1β含量均明显升高,具有统计学意义(P<0.01)。再灌注1天额日敦-乌日勒各组和血塞通组与模型组相比血清、脑组织IL-6、IL-1β含量无明显差异,无统计学意义(P>0.05)。再灌注3、7天额日敦-乌日勒各组和血塞通组与模型组相比血清、脑组织IL-6、IL-1β含量明显降低,具有统计学意义(P<0.01)。再灌注3、7天额日敦-乌日勒高剂量组与血塞通组相比明显降低,具有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论:额日敦-乌日勒治疗缺血型脑卒中有一定的疗效,其作用途径可能是通过抑制IL-6、IL-1β的表达而起到神经功能恢复的作用。

VEGF提高MCAO/R小鼠的EPCs表达及促进脑梗死的康复

目的：观察局灶性脑缺血再灌注模型（MCAO/R）小鼠外周循环中血管内皮祖细胞（EPCs）的数量变化,并应用血管内皮生长因子（VEGF）动员小鼠自体骨髓中的EPCs,达到治疗脑梗死的目的。方法：以MCAO/R小鼠为研究对象,通过腹腔注射VEGF动员体内的EPCs,（每日一次,持续一周）,在动员过程中的第1d、4d、7d、14d从内眦静脉采血,使用流式细胞仪检测MCAO/R组及MCAO/R＋VEGF组小鼠外周血中EPCs的数量;然后断头取脑,用免疫组化法检测新生血管的密度,并对脑组织TTC染色后计算并比较小鼠脑梗死体积的变化。结果：MCAO/R＋VEGF组在动员过程中,外周血中的EPCs在给药第1d开始增加,第4d达到高峰并持续到第7d,第14d高峰持续存在;并且在这四个时间点上,MCAO/R＋VEGF组与其它两组比较均具有统计学意义（P〈0.01）。新生血管密度：MCAO/R＋VEGF组1d开始有新生血管生成,4d血管新生明显,14d达高峰,且各时间点MCAO/R＋VEGF组血管新生数量明显多于MCAO/R组。TTC染色后通过图像分析系统计算脑梗死体积：MCAO/R＋VEGF组在给药第14d较第1d、4d、7d梗死灶体积明显缩小（P〈0.01）,且MCAO/R＋VEGF组在给药第4d,7d、14d的梗死灶体积较同时间点的MCAO/R组有显著缩小（P〈0.01）。结论：在急性脑缺血/再灌注损伤的情况下,应用VEGF能显著动员小鼠骨髓中的EPCs,增强出生后的血管新生,达到缩小梗死灶,治疗脑梗死的目的。

远隔缺血预适应通过上调miR⁃21⁃5p减轻脑缺血模型大鼠细胞凋亡

目的:研究远隔缺血预适应(RIPC)对脑缺血模型大鼠的保护作用及分子机制。方法:18只成年雄性SD大鼠随机分为3组:假手术组(sham)、缺血再灌注组(MCAO/R)组、RIPC+MCAO/R组;术前利用间断夹闭双侧股动脉的方法给予大鼠RIPC处理,利用大脑中动脉栓塞法(MCAO)制备大鼠缺血性脑卒中模型,利用转棒实验检测大鼠运动功能,利用TUNEL染色检测缺血区细胞凋亡,利用real time RT⁃PCR检测大脑缺血区皮质中miR⁃21⁃5p及SPRY1和程序性细胞死亡因子4(PDCD4)mRNA的表达。结果:与MCAO/R组大鼠相比,RIPC处理组大鼠运动功能有所改善,皮质细胞凋亡减少。miR⁃21⁃5p表达增加,而SPRY1和PDCD4 mRNA表达下调(P<0.05)。结论:RIPC处理对减轻缺血性脑卒中大鼠miR⁃21⁃5p表达上调,后者通过抑制靶分子SPRY1和PDCD4的表达抑制细胞凋亡。

补阳壮通饮对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用及其可能机制研究

目的 研究补阳壮通饮对脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury, CIRI)大鼠的神经保护作用,并基于Nrf2信号通路探讨其作用机制。方法 将SD大鼠分为空白组、假手术组、模型组、补阳壮通饮组、阿司匹林阳性对照组、补阳壮通饮联合阿司匹林组,每日灌胃给药。采用线栓法构建大脑中动脉闭塞再灌注(middle cerebral artery occlusion/reperfusion, MCAO/R)大鼠模型,记录每日神经功能缺损评分,除空白组外,到达第1、3、7天时间节点后,检测大鼠体质量变化率、TTC染色观察脑梗死体积、HE染色观察脑组织病理学改变情况、免疫荧光和Western blot法检测Nrf2及HO-1蛋白表达的情况。结果与模型组比较,补阳壮通饮组大鼠体质量下降程度减轻(P<0.05),给药3天后,ZeaLonga评分显著降低(P<0.05),神经细胞水肿程度减轻,坏死神经细胞减少,补阳壮通饮可以明显上调Nrf2、HO-1蛋白表达(P<0.05),并促进Nrf2核移位。结论 补阳壮通饮可以减轻MCAO/R模型大鼠CIRI后的神经损伤,其作用可能是通过Nrf2/HO-1介导的抗氧化应激通路实现的。

三七皂苷Rg_1对脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨三七皂苷Rg1对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后大脑皮质中BDNFmRNA表达的影响。方法♂SD大鼠36只随机分为脑缺血再灌注模型组、三七皂苷Rg1组和尼莫地平组,采用线栓法制作模型,各组分别于术后1、3、5 d随机取4只大鼠处死后,取出脑组织,经石蜡包埋切片,片厚5μm。用地高辛标记的寡聚核苷酸探针进行原位杂交实验,用HPIAS-100高清晰度彩色病理图文报告分析系统测量分析大鼠大脑皮质的BDNFmRNA的含量和阳性神经元数目的变化。结果在脑缺血再灌注后不同的时间段上,与模型组比较,三七皂苷Rg1均能增加大脑皮质的BDNFmRNA含量及其阳性神经元的数量。用药3 d时,三七皂苷Rg1的作用达到高峰,且其作用在各时间段上均强于尼莫地平;5 d后,虽然BDNFmRNA的含量及阳性神经元的数量有一定程度的下降,但仍与三七皂苷Rg1组1 d时的表达水平相当,且三七皂苷Rg1组5 d时的表达水平仍强于模型组1 d和3 d时表达的水平及尼莫地平组1 d时的水平。结论三七皂苷Rg1通过上调大鼠脑缺血再灌注损伤后,大脑皮质BDNFmRNA的含量和阳性神经元的数量,可发挥其治疗作用,疗效强于阳性对照药尼莫地平。

人CR1-SCR1-3蛋白对急性大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨补体活化在大鼠急性脑缺血再灌注中的作用及人补体受体1型SCR1-3蛋白(CR1-SCR1-3)的保护作用。方法健康雄性SD大鼠75只,采用完全随机设计分组法分为假手术组(n=15)、CI/R组(n=30)及CI/R+CR1-SCR1-3组(n=30)。线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞模型,缺血1 h,再灌注24 h,对大鼠进行行为学检测,记录神经功能缺陷评分;TTC染色法测定脑梗死体积;制作脑匀浆测定大脑皮层髓过氧化物酶(MPO)活性、丙二醇(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性;制备切片观察大脑皮质区补体C4b沉积及病理改变。结果缺血再灌注24 h后,CR1-SCR1-3蛋白可明显改善CI/R+CR1-SCR1-3组大鼠神经功能(P<0.05);脑梗死体积亦明显减少(P<0.01);与CI/R组比较,CI/R+CR1-SCR1-3组MPO活力、MDA含量显著降低(P<0.01),而SOD活性显著增高(P<0.01);缺血脑组织皮质区原位补体C4b沉积显著减少(P<0.01),病理损伤亦明显减轻。结论补体活化参与了脑缺血再灌注损伤过程,CR1-SCR1-3蛋白对大鼠急性CI/R损伤具有保护作用。

TrkA介导电针抑制局灶性脑缺血再灌注大鼠模型神经元Src磷酸化的作用

目的探讨电针通过TrkA通路对脑缺血再灌注损伤诱导的Src磷酸化的影响。方法采用改良的血管内线栓技术制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,电针大鼠"水沟"、"承浆"穴,侧脑室注射TrkA受体及下游信号通路的拮抗剂,K252a拮抗TrkA的作用、Wortmannin拮抗PI-3K的作用、U0126拮抗MEK的作用;免疫组织化学技术检测缺血侧大脑皮层、海马Src磷酸化。结果脑缺血再灌注损伤诱导大鼠皮层和海马神经元Src磷酸化水平异常增加,与对照组相比,差异显著(P<0.05);电针抑制脑缺血再灌注损伤引起的Src磷酸化异常增加水平,与缺血再灌注组相比电针能明显减少Src磷酸化水平(P<0.05);分别脑室注射TrkA抑制剂、PI-3K抑制和MEK抑制剂预处理后,能有效翻转电针对皮层神经元Src磷酸化异常增加的抑制作用,统计学处理有显著性差异(P<0.05)。结论电针减少缺血再灌注导致的Src磷酸化,通过激活TrkA/PI-3K和TrkA/MAPK通路抑制Src的活性,发挥神经保护作用。

小鼠脑缺血再灌注损伤模型中circRNA的m^(6)A修饰及表达谱分析

本研究通过甲基化RNA免疫沉淀测序(methylated RNA immunoprecipitation sequencing,MeRIP-seq)、转录物组测序(transcriptome sequencing,RNA-seq)及生物信息学技术,分析小鼠大脑中动脉栓塞/再灌注(middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R)模型中环状RNA (circular RNA,circRNA)差异表达谱和m^(6)A修饰差异表达谱,为揭示circRNA表观遗传修饰与脑缺血再灌注损伤之间关系提供科学依据。采用Longa生物学评分评价小鼠神经功能缺损,TTC染色法计算小鼠脑梗死体积,Dot印迹检测m^(6)A整体甲基化水平。结果显示,MCAO/R组与sham组相比出现严重神经损伤,Longa生物学评分为(2.75±0.25)分,MCAO/R组的梗死体积显著高于sham组,所占百分比为(27.63%±4.24%),MCAO/R组m^(6)A整体修饰水平增加。与sham组相比,MCAO/R组有1 787个差异表达的circRNAs(|log_(2)FC|> 0.58,P<0.05)。其中,852个circRNA表达显著上调,935个circRNAs表达显著下调。基因本体(gene ontgology,GO)功能分析显示,差异表达circRNAs靶基因主要参与翻译、蛋白质糖基化、激素应答、IL-6介导的信号通路、高尔基体、内质网等生物学过程;京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路分析发现,差异靶基因主要与N-聚糖生物合成、Wnt信号通路、胃酸分泌、谷氨酸能突触、磷脂酶D信号通路、味觉传导、非洲锥虫病、甲状腺激素合成、胰岛素分泌等代谢途径和信号通路有关。与sham组比,MCAO/R组有22个circRNAs发生m^(6)A甲基化修饰差异(|log_(2)FC|> 0.58,P<0.05)。其中,14个circRNA显著上调,8个circRNA显著下调。GO和KEGG分析显示,差异甲基化circRNA主要与胞嘧啶代谢过程、骨骼肌收缩、髓样细胞分化、O-连接蛋白质糖基化等生物学过程有关,主要富集到范科尼贫血途径通路。最后,联合表达差异和m^(6)A修饰差异进行分析,共筛选到7个共表达差异(既有m^(6)A修饰差异,又有表达差异)的circRNA,经RT-qPCR验证,这些共表达差异circRNA表达趋势与测序一致。本研究通过对sham组和MCAO/R组测序分析,筛选有差异表达的circRNA和有m^(6)A修饰差异的circRNA,表明脑缺血再灌注可引起小鼠circRNA表达谱及m^(6)A修饰谱改变,差异表达的circRNA和差异甲基化circRNA靶基因涉及多种通路,为从表观遗传水平揭示脑缺血再灌注损伤的分子机制奠定基础,为后续研究脑缺血再灌注损伤提供了潜在的靶向位点。

远隔缺血预适应通过激活HIF-1α/VEGF通路保护大鼠缺血性脑卒中

目的:研究远隔缺血预适应(RIPC)对大鼠脑缺血模型的保护作用及分子机制。方法:30只成年雄性SD大鼠随机分为4组:假手术组(sham)、RIPC组、缺血再灌注组(MCAO/R)组、RIPC+MCAO/R组;术前通过夹闭双侧股动脉给予相应组RIPC处理,利用大脑中动脉栓塞再灌注法(MCAO/R)制备大鼠缺血性脑卒中模型,神经功能评分检测大鼠的神经功能,用2,3,5-三苯四唑氯(TTC)对脑切片进行染色以评估脑梗死的程度。利用real time RT-PCR检测大脑皮质中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF) mRNA的表达。结果:与MCAO/R组大鼠相比,RIPC处理组大鼠神经功能缺损症状较轻(P<0.05),脑梗死体积缩小(P<0.01),皮质中HIF-1α和VEGF mRNA的表达表达明显升高(P<0.05)。结论:RIPC处理对减轻缺血性脑卒中大鼠具有保护作用,其分子机制可能与激活HIF-1α/VEGF通路有关。

巴弗洛霉素A1对脑缺血再灌注损伤作用的初步研究

目的:探讨预防性给予SD大鼠巴弗洛霉素A(Bafilomycin A1,Baf A1)对局部脑缺血再灌注损伤(middle cerebral artery occlusion-reperfusion,MCAO/R),是否神经保护作用及初步机制研究.方法:健康雄性SD大鼠80只,随机分为:假手术组(sham)、对照组(Saline)、氟西汀组(Fluo)和Baf A1组.Fluo组和Baf A1组大鼠于术前分别给予氟西汀混悬液(2.0mg-1kg^(-1)d^(-1))灌胃和Baf A1(1.0mg-1kg^(-1)d^(-1)),连续14d;sham组和Saline组均于术前14天开始给予等体积生理盐水.再灌注24h后,进行神经神经功能相关检测,并用TTC染色法计算脑梗死面积,并提取新鲜脑组织总蛋白采用Western blot检测自噬相关蛋白Beclin 1的表达.结果:Baf A1可显著降低大鼠脑缺血再灌注后神经功能损伤症状,减少脑梗死面积,并降低自噬相关蛋白Beclin 1的表达.结论:Baf A1对大鼠脑缺血再灌注损伤有一定的保护作用,可能是通过降低自噬性死亡实现的.

缝隙连接胞间通讯对大鼠局灶性脑梗死体积的影响

目的探讨缝隙连接胞间通讯变化对大鼠局灶性脑梗死体积的影响。方法Wistar大鼠随机分为4组,干预组术前腹腔注射缝隙连接特异性阻滞剂辛醇,对照组及假手术组给予等量生理盐水,溶剂对照组给予等量溶剂。线栓法建立大脑中动脉闭塞／再灌注模型。采用Longa5分制评分法评价动物神经功能缺损程度、TTC染色考察脑梗死体积变化并在光镜下观察其病理变化。结果在缺血24h和缺血6h／再灌注6h条件下,辛醇干预组脑梗死体积百分比与手术对照组比较明显减小(P<0．05)。镜下可见辛醇组缺血中心区及半影区面积均明显缩小,半影区病理改变较轻,相对面积比显著减少。两组动物神经功能缺损程度虽有差异,但不具有统计学意义(P>0．05)。结论星形胶质细胞的缝隙连接在缺血性卒中半影区的病变进展中扮演重要角色。抑制缝隙连接胞间通讯对半影区神经元起到了保护作用,减小了梗死体积。探索下调缝隙连接胞间通讯功能的方法可能成为治疗脑梗死的新思路。

额尔敦-乌日勒对大脑中动脉阻塞/再灌注损伤大鼠的治疗作用研究

目的研究额尔敦-乌日勒对大脑中动脉/再灌注损伤大鼠的治疗作用。方法采用改良Zea-Longa法,造MCAO/R模型,将造模成功的动物随机分4组,分别为模型组、尼莫地平片组、银杏叶片组、额尔敦-乌日勒组,给予相应的药物进行治疗,第15日进行Bederson神经功能评分,行TTC染色后测定各组大鼠脑梗死率、含水率、脑指数。结果与模型组相比,各治疗组大鼠神经功能Bederson得分明显降低,神经功能明显好转(P<0.01);与假手术组相比,额日敦-乌日勒组大鼠神经功能恢复临近于正常,差异无统计学意义(P>0.05)。假手术组各脑片中未见苍白色组织,模型组苍白色组织较其他组明显,额尔敦-乌日勒组苍白色组织明显少于其他治疗组,而银杏叶片组与尼莫地平片组没有明显区别。模型组脑梗死率、脑含水率及脑指数仍然明显高于其他组(P<0.05),其中额尔敦-乌日勒组脑梗死率、脑含水率及脑指数较低(P<0.05),尼莫地平片组脑含水率较低(P<0.05),银杏叶片组脑指数较低(P<0.05)。结论额尔敦-乌日勒61.7 mg/100 g可明显减轻脑水肿,减少缺血再灌注脑梗死范围,减轻大鼠神经功能障碍,对局灶性脑缺血再灌注损伤有较好的保护作用。

中蒙医药对大鼠脑缺血/再灌注损伤影响的研究进展

回顾近些年关于缺血性中风的中外文献,总结了缺血性中风实验常用的大脑中动脉闭塞再灌注损伤大鼠模型制作方法与改进,同时概述了中蒙医药治疗大脑中动脉闭塞再灌注损伤大鼠模型的作用机制与研究现状,充分认识到中蒙医药治疗缺血性中风确实有其独特的优势,可通过药物或针灸等多种途径保护并修复脑组织,为进一步研究中蒙药治疗缺血性中风提供参考。

仙人掌多糖对大鼠局灶性脑缺血的神经保护作用

目的观察仙人掌多糖对大脑中动脉栓塞(MCAO)诱导的大鼠缺血-再灌注损伤的神经保护作用。方法雄性SD大鼠随机分为假手术组、缺血组、0.9%氯化钠溶液组、仙人掌多糖治疗组(200 mg·kg-1·d-1,ip)。采用MCAO法制作大鼠缺血-再灌注损伤模型。分别于大鼠缺血2 h再灌注3,6,8 h后进行神经行为学评分;8 h后2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色测定脑梗死体积;缺血2 h再灌注22 h后脑组织切片苏木精-伊红(HE)染色显微镜下形态学观察。结果与0.9%氯化钠溶液组相比,再灌注8 h后仙人掌多糖治疗组神经行为学评分平均下降(2.35±0.47)分(P<0.05),梗死灶体积减少(P<0.05);大鼠皮质及海马组织神经细胞丢失、神经胶质增生、核固缩、核深染等形态学均有明显改善(P<0.05)。结论仙人掌多糖可以缓解大鼠大脑中动脉栓塞症状,具有一定的神经保护作用。

Apelin-13对脑缺血再灌注损伤作用的初步研究

目的:研究Apelin-13对缺血/再灌注小鼠脑损伤的作用,并初步探讨其对自噬性细胞死亡的影响。方法:取健康雄性CD-1小鼠,随机分为假手术(sham)组、生理盐水(Saline)组、Apelin组;Apelin组和Saline组首先建立脑缺血再灌注(MCAO/R)模型,再灌注即刻给予同侧侧脑室注射Apelin-13或等量生理盐水,然后在再灌注48 h后,进行神经功能方面检测,同时利用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色评估脑梗死体积;缺血再灌注24 h和48 h后,采用West-blot法检测各组自噬相关蛋白LC3的表达情况。结果:Apelin-13可显著降低小鼠脑缺血再灌注后神经功能缺损症状,减少脑梗死体积,减低自噬相关蛋白LC3的表达及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值。结论:Apelin-13对小鼠脑缺血再灌注损伤有一定的保护作用,抑制神经细胞的自噬性死亡可能是其作用机制之一。

Boc5对脑缺血再灌注小鼠血脑屏障损伤的保护作用

目的探讨胰高血糖素样1受体(GLP-1R)小分子激动剂Boc5对脑缺血再灌注损伤(CIRI)后血脑屏障损伤的作用及机制。方法将C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、模型组和Boc5高、中、低剂量组。模型组以及Boc5高、中、低剂量组行大脑中动脉栓塞再灌注(MCAO/R)损伤,Boc5高、中、低剂量组在MCAO/R损伤前连续给药7 d不同剂量的Boc5,假手术组及模型组每日给予等体积生理盐水。神经功能评分、足误实验和转棒实验评价小鼠行为学损伤;检测血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和过氧化氢酶(CAT)水平;评价小鼠血液生化指标变化;2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色法检测缺血梗死面积;分光光度法检测脑组织伊文氏蓝含量;Western Blot法检测缺血半暗区闭合蛋白、紧密连接蛋白-5表达;免疫荧光法检测缺血半暗区星形胶质细胞标志物GFAP表达;酶联免疫吸附(ELISA)法检测星形胶质细胞氧糖剥夺损伤/复氧(OGD/R)后炎性因子水平。结果实验结果表明,Boc5能显著改善行为学缺陷,可降低MCAO/R损伤后SOD、MDA和CAT水平,显著减小梗死面积,显著减轻MCAO/R所致血脑屏障损伤,显著降低星形胶质细胞增生及活化水平及星形胶质细胞OGD/R损伤后的炎性因子水平。结论Boc5可减轻MCAO/R损伤所致小鼠血脑屏障损伤,其机制可能是通过减轻星形胶质细胞炎症。

Bafilomycin A1对脑缺血再灌注损伤小鼠的保护作用及其机制

目的:探讨洛霉素A(Bafilomycin A1, Baf A1)对脑缺血再灌注损伤(middle cerebral artery occlusion-reperfusion, MCAO/R)小鼠的保护作用及机制。方法:Atg7f/f-Mx1-Cre小鼠15只,随机分为:假手术组(C)、模型组(M)、氟西汀组(M + F)、Baf A1组(M + B)和ATG7敲除组(M + ATG7 KO)。M + B组术前24小时给与脑立体定位注射,M + F组给与氟西汀灌胃连续14 d;其他组均于术前14天开始给予等体积生理盐水。缺血2小时再灌注24 h后,对各组小鼠进行神经行为学评分、脑含水量测定和脑梗死面积检测,Western blotting检测自噬相关蛋白Beclin 1和LC3的表达。结果:与C组相比,M组神经行为评分、脑含水量、脑梗死面积、自噬相关蛋白Beclin 1和LC3的表达显著增加,M + F组、M + B组和M + ATG7 KO组逆转以上结果,差异具有统计学意义。结论:Baf A1通过降低前期和后期细胞自噬水平实现对脑缺血再灌注损伤小鼠的保护作用。

对羟基苯甲醇通过SIRT1/PGC-1α/TFAM信号通路抗脑缺血再灌注损伤的作用及机制研究

目的:基于SIRT1/PGC-1α/TFAM信号通路探讨对羟基苯甲醇(HBA)抗脑缺血再灌注损伤作用。方法:通过线栓法复制MCAO/R大鼠模型,分为假手术组、模型组(MCAO/R)、HBA组、抑制剂(EX527)组。其中抑制剂组是侧脑注射EX527(10 mmol·L^(-1),10μL),HBA治疗组给予HBA 20 mg·kg^(-1)进行药物干预。旷场实验、转棒实验、Morris水迷宫实验观察大鼠行为学变化;TTC法检测脑梗死体积;取缺血侧脑组织,电镜观察线粒体显微结构变化,检测组织中活性氧(ROS)、线粒体膜电位(MMP)、呼吸链酶复合体Ⅰ~Ⅳ活性、ATP水平;免疫组化法检测脑源性神经营养因子(BDNF)和神经生长相关蛋白(GAP-43)蛋白阳性表达;Western blot法检测脑组织中SIRT1、PGC-1a、NRF1/2、TFAM蛋白表达。结果:HBA干预后能改善MCAO/R大鼠记忆空间学习及运动能力等行为学变化,明显降低脑梗死体积;改善线粒体结构损伤,降低ROS水平,提高线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ~Ⅳ活性、MMP以及ATP水平。促进BDNF和GAP-43及SIRT1/PGC-1a途径相关蛋白表达。SIRT1抑制剂处理后可逆转HBA的治疗作用。结论:HBA可促进缺血再灌注过程中神经元的修复,其可能与激活SIRT1/PGC-1a/TFAM信号通路有关。