MCAO模型大鼠中医证候研究

目的:探讨大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型大鼠中医证候。方法:SD大鼠70只随机分为正常组、假手术组、手术组,假手术组与手术组按不同时间分为6 h、48 h、72 h组,每组10只。以大脑中动脉栓塞法建立MCAO大鼠模型,分别在手术完成后6 h、48 h、72 h时观察大鼠的一般状况、Zea-longa神经功能评分、放射免疫法检测大鼠血清皮质酮(cortisone,CORT)水平,光镜下观察大鼠脑组织形态结构变化。结果:模型大鼠偏瘫症状明显,行走呈顺钟向追尾状,甚则向一侧倾倒;精神萎靡、活动减少、身体蜷缩、体质量明显下降、舌质紫暗、神经功能Zea-longa评分明显增高,血清CORT水平明显增高,脑组织形态结构发生明显改变。结论:MCAO大鼠存在明显的肾虚血瘀证证候。

地黄饮子加减方对MCAO模型大鼠HPA轴影响的实验研究

目的:通过对MCAO模型大鼠缺血不同时点及地黄饮子灌胃后HPA轴水平的检测,观察其变化特点及地黄饮子的干预效应。方法:采用放射免疫分析法测定MCAO模型大鼠缺血后6h、48h和灌胃地黄饮子7d后的血浆HPA轴水平。结果:①脑缺血6h时模型组HPA轴水平低于正常组,其功能呈抑制状态;②脑缺血48h时,模型组ACTH、COR的含量较正常组明显升高,CRH含量进一步降低;③地黄饮子能够提高MCAO模型大鼠CRH、ACTH的血浆含量并降低COR的含量。结论:地黄饮子加减方能够提高MCAO模型大鼠CRH、ACTH的血浆含量并降低COR的含量,通过改善HPA轴功能的紊乱在脑缺血急性期发挥保护作用。

地黄饮子加减方对MCAO模型大鼠血清HPA轴及其脑组织细胞凋亡表达的干预效应研究

目的探讨地黄饮子加减方对MCAO模型大鼠血清HPA轴含量及其脑组织细胞凋亡表达的干预效应。方法 MCAO法制作SD大鼠脑缺血模型,造模成功后第二天开始给予地黄饮子加减方浓缩煎剂灌胃,对照组灌胃等量的生理盐水,连续7天,于最后一次灌胃后1小时取材,放射免疫法检测血清HPA轴含量,TUNEL免疫组化法检测脑组织细胞凋亡表达。结果经地黄饮子治疗后:MCAO模型大鼠血清COR含量明显低于正常组、模型组,差异有显著统计学意义(P<0.01),ACTH、CRH含量均明显高于模型组,差异有显著统计学意义(P<0.05),缺血侧脑组织细胞凋亡表达较模型组明显减少,差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论地黄饮子加减方能够通过纠正HPA轴的紊乱状态、抑制脑组织细胞凋亡表达等作用机制在脑缺血急性期发挥减轻脑损伤、改善预后的作用。

线栓法制备MCAO模型大鼠的经验体会

线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型具有不开颅、损伤小、重复性高等优点,是制备该模型最常用的方法,但目前仍存在很多因素的制约,如技术要求高、模型成功率和存活率较低、术后差异较大等,这些都是亟待解决的问题。笔者从实验动物的选择、术前禁食与否、麻醉剂的选择、线栓制备、手术操作、护理及并发症7个方面对模型制备进行探讨,以期能为各位同仁提供参考。

地黄饮子加减方对MCAO模型大鼠血浆HPA轴及脑组织HSP70表达的干预效应研究

目的探讨地黄饮子加减方对大脑中动脉线栓(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型大鼠血浆下丘脑—垂体—肾上腺轴(HPA轴)含量及其脑组织热休克蛋白70(heatshock protein 70,HSP70)表达的干预效应。方法 MCAO法制作SD大鼠脑缺血模型,造模成功后第二天开始给予地黄饮子加减方浓缩煎剂灌胃,对照组灌胃等量的生理盐水,连续7天,于最后一次灌胃后1小时取材,放射免疫法检测血浆HPA轴含量,免疫组化法检测脑组织HSP70表达。结果经地黄饮子治疗后:MCAO模型大鼠血浆皮质醇(COR)含量明显低于正常组、模型组,差异有统计学意义(P<0.01),促肾上腺皮质激素(ACTH)、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)含量均明显高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);地黄饮子组较模型组脑组织的HSP70表达更为明显,差异有统计学意义(P<0.01);模型组COR含量与脑组织HSP70表达存在显著的正相关关系,CRH、ACTH含量则与HSP70表达无明显相关性,地黄饮子组HPA轴各指标与脑组织HSP70表达无明显相关性。结论地黄饮子加减方可能通过纠正HPA轴的紊乱状态、提高大鼠脑组织HSP70表达等途径在脑缺血急性期发挥神经保护作用。

养血清脑颗粒对MCAO模型大鼠神经功能保护机制研究

目的 :探讨养血清脑颗粒对MCAO大鼠脑损伤的保护机制。方法 :选用 2 2月龄纯种健康大白鼠 ,采用线栓法阻塞大脑中动脉诱发脑缺血模型 ,治疗组给以养血清脑颗粒治疗 ,对照组和假手术组则给以等量生理盐水灌胃。结果 :治疗组可以显著减轻模型鼠神经缺损症状 ,改善阻断侧额顶区脑电图波幅降低和频率减慢 ;脑组织形态学观察发现 ,缺血区星形细胞增殖明显 ,神经元较对照组仅轻度减少。脑血流量也有显著改善 ,血中GSH、GSH PX水平升高 ,MDA水平则受抑制而降低。结论 :养血清脑颗粒对脑缺血损伤的保护机制是多方面的 ,而增强星形细胞活性 ,保护神经元缺血性损害 ,改善脑血流量及抗自由基损伤是其治疗缺血性脑损伤的主要机制之一。

大鼠栓线法MCAO模型中栓线插入深度的研究

为提高造模成功率提供参考,对大鼠大脑中动脉(MCA)距颈内动脉(ICA)起始部的距离进行了测定,并观察插线深度与MCA起始部距离及造模成功率的关系。栓线法制作大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)模型,插线深度组,进行动脉灌注显色铸型,测量MCA起始部距ICA起始部的距离;脑梗塞体积组,计算机图像分析脑梗塞区面积,计算脑梗塞体积。结果发现,MCA起始部到ICA起始部的距离在1.55～1.65cm之间,栓线插入深度小于等于1.60cm的造模成功率为28.57％,插入深度大于1.60 cm的造模成功率为83.33％。二者比较有显著差异(P<0.05)。提示栓线法制作大鼠MCAO模型的插线深度起码应达到1.65 cm。

c-fos在MCAO模型大鼠大脑中的表达

采用线栓法制成 Wistar大鼠永久性大脑中动脉闭塞 ( MCAO)模型 ,术后 7天断头取脑用免疫组化的方法显示 c-fos的表达情况。结果显示 ,c-fos在内侧皮质深面有较多表达 ,而皮质的其它部分、海马。

移植Noggin基因修饰的神经干细胞对于大鼠MCAO模型梗死区域生长相关蛋白GAP-43MAP-2表达的影响

目的探讨移植携带Noggin基因的神经干细胞对MCAO动物模型神经功能修复及相关蛋白表达的作用。方法应用RT-PCR技术扩增大鼠Noggin基因,构建载体pEGFP-N1-Noggin,转染入原代培养的大鼠神经干细胞(NSCs)。线栓法制作大鼠MCAO模型,造模后3 d,移植入Noggin基因修饰的NSCs。分别于移植后2 d、7 d、14 d,应用免疫组化方法检测移植后缺血脑组织中GAP-43、MAP-2的表达情况。结果转染神经干细胞后可以稳定表达Noggin,神经干细胞移植后2 d、7 d、14 d,NOG组MAP-2表达显著高于生理盐水移植组(NS组)和空质粒组(P<0.05),神经干细胞移植后2 d、7 d、14 d,NOG组GFAP表达显著低于生理盐水移植组(NS组)和空质粒组(P<0.05)。结论 Noggin可以促进脑梗死区域生长相关蛋白GAP-43及微管结合蛋白MAP-2的表达。

丹龙醒脑汤对MCAO模型大鼠血管新生及bFGF蛋白、Ang-1蛋白表达的影响

目的:探讨丹龙醒脑方对脑缺血再灌注(MCAO)大鼠血管新生情况及bFGF蛋白、Ang-1蛋白表达的影响。方法:制备大鼠MCAO模型,在2小时后进行血流放开并再灌注。将造模成功的大鼠分为4组,分别为模型组、尼莫地平组(10.78mg/kg)、小剂量组(丹龙醒脑汤3.70g/kg)、大剂量组(丹龙醒脑汤14.80g/kg)。每组大鼠均灌胃7日,然后处死取脑,测定缺血海马区内皮细胞数、微血管密度(MVD)、Ang-1及bFGF蛋白表达。结果:大剂量组、小剂量组与尼莫地平组比较,各指标差异不显著(P>0.05);用药组与模型组比较,各指标均明显升高,P<0.05;大剂量组、小剂量组与尼莫地平组比较,Ang-1蛋白、bFGF蛋白表达差异不显著(P>0.05);用药组与模型组比较,Ang-1蛋白、bFGF蛋白表达升高显著,P<0.05。结论:丹龙醒脑汤对MCAO模型大鼠血管新生有促进作用,且对缺血脑组织也有保护作用,作用机制与Ang-1蛋白、bFGF蛋白表达上调有关。

针刺足三里、曲池对MCAO模型大鼠梗死周围组织PI3K/AKT信号通路表达的影响

目的:评价针刺曲池穴及足三里穴对MCAO模型大鼠运动功能的影响及观察脑梗死灶周围组织PI3K/AKT信号通路表达的变化。方法:将45只SD大鼠随机分为假手术组、模型组及干预组,各15只。假手术组仅予切开皮肤分剥离神经血管后缝合,模型组及干预组大鼠予线栓法进行MCAO模型制备,造模成功后干预组大鼠予针刺曲池穴及足三里穴,1次/d,30 min/次,假手术组及模型组大鼠仅模仿捉拿、回笼,连续干预14 d,用Homecage Scan行为学评价大鼠不同时间段运动能力的变化,免疫组化检测PI3K、Bax的表达差异,免疫蛋白印迹(Western blotting)观察AKT、p-Akt的浓度变化。结果:1)Homecage Scan行为学检测显示:假手术组大鼠未见明显异常,造模大鼠出现明显偏瘫,随着时间的推移模型组及干预组大鼠花费在行走、后肢站立、舔毛3种行为的时间逐渐延长,其中干预组改善得更为明显(P<0.05)。2)造模组大鼠脑组织TTC染色出现明显白色梗死区域,干预组大鼠梗死区域明显小于模型组。3)免疫组化显示造模后大鼠PI3K降低,Bax升高,针刺足三里穴及曲池穴可上调PI3K及AKT的磷酸化程度,抑制了Bax的表达;4)Western blotting显示针刺足三里、曲池穴可上调造模大鼠AKT的磷酸化程度。结论:针刺曲池穴、足三里穴可改善脑缺血大鼠的神经缺损症状,其作用机制可能与PI3K/AKT信号通路有关。

补阳还五汤对MCAO模型大鼠炎症因子水平的作用研究

目的:观察补阳还五汤对缺血性脑损伤炎症因子水平的作用。方法:SD大鼠按体重随机分为假手术组,模型对照组,阿托伐他汀(10mg/kg),补阳还五汤高、中、低剂量组(20、10、5g/kg),用颈内动脉线栓法建立MCAO脑缺血再灌注模型;实验第10周期末,采血,取脑组织,ELISA法测定血清及脑组织中TNF-α、IL-6、IL-8、ROS、NF-κB含量。结果:20、10g/kg补阳还五汤能显著降低模型大鼠血清及脑组织TNF-α、IL-6、NF-κB含量,降低脑组织ROS水平。结论:补阳还五汤能有效降低MCAO大鼠的炎症反应;其对缺血性脑损伤的防治作用可能与降低炎症因子水平,抑制炎症反应有关。

参芎滴丸对MCAO模型大鼠脑梗死体积及脑组织NF-κB表达的影响

目的观察传统中药制剂参芎滴丸对大脑中动脉闭塞(MCAO)模型大鼠脑梗死体积及脑组织核因子κB(NF-κB)表达的影响。方法采用线栓法制备大鼠MCAO模型,169只SD大鼠以是否接受造模和造模前药物干预,随机分为空白组、假手术组、模型组、环磷酰胺组(造模前8d,15mg/kg,1次/d灌胃)和参芎滴丸组,其中参芎滴丸组大鼠按参芎滴丸临床剂量1g/(kg·次)的20倍(高剂量组)、10倍(中剂量组)、5倍(低剂量组)灌胃(造模前8d,1次/d)。除空白组外,各组再以时间节点随机分为48h、72h两个亚组。处死大鼠后用图像处理软件计算脑梗死体积,脑组织常规HE染色观察病理学改变,免疫组化染色观察NF-κB的表达。结果参芎滴丸高、中、低剂量组及环磷酰胺组与模型组相比,48h、72h梗死体积缩小(P<0.05)。空白组、假手术组脑组织中未见NF-κB阳性细胞,大鼠缺血损伤48h、72h后模型组内梗死区NF-κB阳性细胞增多,同时NF-κB积分光密度也明显增高。与模型组相比,参芎滴丸低、中、高剂量组在缺血梗死48h、72hNF-κB阳性细胞数和积分光密度值减少,即NF-κB的表达下调,差异有统计学意义(P<0.05);参芎滴丸高、低剂量组组间相比差异也有统计学意义(P<0.05)。结论参芎滴丸能减小脑梗死体积,可抑制脑缺血模型大鼠脑组织的炎性反应,减轻脑组织的病理损伤,对神经元具有保护作用,其抑制NF-κB的表达可能是其作用机制之一。

经颈总动脉和经颈外动脉制作大鼠MCAO模型的比较

大鼠大脑中动脉闭塞模型 (MCAO) 是局灶性脑缺血再灌注的标准动物模型,该模型为研究人类局灶性脑缺血的疾病特点、发病机制及防治策略提供了可靠平台。本文综述了 MCAO 模型成功的评价标准,并从动物、线栓、原理、制备方法及改进等方面比较了经颈总动脉进线法和经颈外动脉进线法分别制备大鼠 MCAO 模型的特点,并对影响大鼠 MCAO 模型制备成功率的主要因素进行了综述和优化配置。

醒脑开窍针刺法主穴内关对脑缺血模型(MCAO)大鼠脑神经细胞坏死的抑制作用研究

目的:分别从光镜和电镜两个角度探讨内关穴与非穴对脑缺血模型(MCAO)大鼠神经细胞坏死的抑制作用。方法:参照Zea-Longa线拴法复制大鼠大脑中动脉缺血模型(MCAO),分别对"醒脑开窍"针刺法主穴内关以及非穴(胁下非经非穴点),施以频率180次/s,持续时间5s的针刺干预,以光镜下神经细胞坏死率及电镜下神经细胞坏死程度作为评价效应指标。结果:光镜下,与模型对照组相比,非针刺组和非穴组神经细胞坏死率均无统计学意义(P>0.05),而内关组的神经细胞坏死率明显降低,且有统计学意义(P<0.05)。电镜下,非针刺组和非穴组神经细胞超微结构接近模型对照组,表现为神经细胞的高度水肿及细胞器的严重破坏;内关组则接近正常组和假手术组,神经细胞破坏程度均较低。结论:针刺内关可抑制MCAO大鼠神经细胞坏死,保护神经元,具有穴位特异性。

蒙成药额日敦-乌日勒对大脑中动脉阻塞再灌注模型(MCAO/R)大鼠血清及脑组织IL-6、IL-1β的影响

目的:探讨额日敦-乌日勒对大脑中动脉阻塞再灌注模型(MCAO/R)大鼠血清及脑内IL-6、IL-1β的影响。方法:选取144只wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、对照组、额日敦-乌日勒低、中、高剂量组共6组。除假手术组外其他组采用改良Zea-longa法,建立MCAO/R模型。手术造模成功后24h开始灌胃给药,治疗组(额日敦-乌日勒125mg/kg、额日敦-乌日勒250mg/kg、额日敦-乌日勒500mg/kg),对照组(血塞通236.25mg/kg)。假手术组、模型组wistar大鼠每日一次灌胃纯净水。分别再灌注1、3、7天给药后行神经功能评分、心脏取血、断头取脑组织。采用ELISA法检测血清、脑组织IL-6、IL-1β的含量进行统计学分析。结果:wistar大鼠再灌注1、3、7天模型组与假手术组相比血清、脑组织IL-6、IL-1β含量均明显升高,具有统计学意义(P<0.01)。再灌注1天额日敦-乌日勒各组和血塞通组与模型组相比血清、脑组织IL-6、IL-1β含量无明显差异,无统计学意义(P>0.05)。再灌注3、7天额日敦-乌日勒各组和血塞通组与模型组相比血清、脑组织IL-6、IL-1β含量明显降低,具有统计学意义(P<0.01)。再灌注3、7天额日敦-乌日勒高剂量组与血塞通组相比明显降低,具有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论:额日敦-乌日勒治疗缺血型脑卒中有一定的疗效,其作用途径可能是通过抑制IL-6、IL-1β的表达而起到神经功能恢复的作用。