姜黄素对乳腺癌MCF-7与MCF-7/DOX细胞中P-糖蛋白表达的影响及其机制研究

目的:研究姜黄素对人乳腺癌MCF-7与MCF-7/DOX细胞中P-糖蛋白表达的影响及其作用机制。方法:MTS比色法检测姜黄素对MCF-7与MCF-7/DOX细胞多柔比星敏感性的影响;实时定量PCR与Western Blot方法检测姜黄素处理后,MCF-7与MCF-7/DOX细胞中P-糖蛋白在mRNA与蛋白质水平的表达变化;流式荧光法检测姜黄素对MCF-7与MCF-7/DOX细胞中多柔比星药物浓度的影响;亚硫酸氢盐处理后测序(bisulfite sequencing PCR,BSP)法检测姜黄素处理前后MCF-7与MCF-7/DOX细胞中P-糖蛋白编码基因多药耐药基因1(multidrug resistance protein1,MDR1)启动子区甲基化状态的改变。结果:与对照组相比,姜黄素处理后,MCF-7和MCF-7/DOX细胞多柔比星IC50值显著下降(P<0.05);姜黄素处理后,MCF-7和MCF-7/DOX细胞中的P-糖蛋白在mRNA及蛋白质水平的表达均有显著上调(P<0.05),而细胞内多柔比星的药物浓度下降;MCF-7和MCF-7/DOX细胞中MDR1基因启动子区域的甲基化程度在姜黄素处理后明显降低(P<0.05)。结论:姜黄素可增强乳腺癌MCF-7与MCF-7/DOX细胞多柔比星敏感性,但同时可显著诱导P-糖蛋白表达水平增高,从而降低细胞内多柔比星药物浓度,此作用与其对MDR1基因去甲基化功能密切相关。

姜黄素衍生物T63提高MCF-7/DOX细胞株对多柔比星敏感性的研究

目的:以人乳腺癌细胞MCF-7和耐多柔比星(doxorubicin,DOX)的人乳腺癌细胞MCF-7/DOX为研究对象,观察新型多芳烯姜黄素衍生物T63对这两株细胞系的影响,探讨T63能否逆转MCF-7/DOX细胞对多柔比星(DOX)的耐药性。方法:用MTT法检测T63的细胞毒性,同时检测T63对细胞株MCF-7/DOX药物敏感性的影响。用流式细胞术PI单染法分析T63或T63联合DOX对细胞周期的影响,观察细胞凋亡情况。用Western blot检测细胞凋亡相关蛋白表达。用Real-time PCR法检测相关基因的转录情况。结果:T63能够有效抑制MCF-7和MCF-7/DOX的增殖,且药效强于姜黄素,而T63对MCF-7和MCF-7/DOX的抑制增殖的效应差异不大。使用非细胞毒性剂量(0.75μmol/L)的T63能有效提高MCF-7/DOX对多柔比星的敏感性。PI单染法显示单独使用T63或者非细胞毒性剂量T63与多柔比星联合使用均能促进细胞凋亡。Western blot结果显示T63能够上调p53、p21、p27、Bim、Bax的表达,下调Bcl-2的表达。Real-time PCR结果表明T63对p53无显著影响。结论:T63可通过促进细胞凋亡的方式逆转MCF-7/DOX对多柔比星的耐药性,从而提示其可能具有临床应用价值,其具体分子机制有待进一步研究。

姜黄素通过调控组蛋白乙酰化修饰上调乳腺癌MCF-7和MCF-7/DOX细胞中MDR1表达

目的:从组蛋白乙酰化修饰角度探讨姜黄素上调乳腺癌MCF-7和MCF-7/DOX细胞中多药耐药基因1(multidrug resistance protein 1,MDR1)表达水平的作用机制。方法:CCK-8(Cell Counting Kit-8)法观察姜黄素对MCF-7和MCF-7/DOX细胞生长增殖以及多柔比星敏感性的影响;Realtime PCR和Western blot方法检测姜黄素处理前后两种细胞中MDR1 mRNA和蛋白质表达水平的变化;染色质免疫共沉淀技术(chromatin immunoprecipitation assay,CHIP)检测姜黄素对两种细胞中MDR1启动子区相关组蛋白H3、H4乙酰化水平的影响。结果:不同浓度姜黄素处理72 h对MCF-7和MCF-7/DOX细胞的生长增殖有显著抑制作用,其IC50值分别为22.03μmol/L和27.46μmol/L;10μmol/L姜黄素处理72 h可显著提高两种细胞多柔比星敏感性,多柔比星IC50值分别下降了57.14%和54.52%(P<0.05);姜黄素处理MCF-7和MCF-7/DOX细胞后,MDR1在mRNA水平分别上调(32.90±0.96)和(5.70±0.55)倍(P<0.05),在蛋白质水平分别上调(2.26±0.18)与(2.90±0.21)倍(P<0.05);CHIP结果显示姜黄素对两种细胞中MDR1启动子区相关组蛋白H3、H4的乙酰化水平均有显著上调作用。结论:姜黄素在增强MCF-7和MCF-7/DOX细胞多柔比星敏感性的同时,可通过调控MDR1启动子区相关组蛋白H3、H4的乙酰化水平而上调MDR1的表达。

DCN通过VEGF因子抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖的实验研究

目的探讨核心蛋白聚糖(decorin,DCN)通过下调血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)表达抑制乳腺癌MCF-7肿瘤细胞增殖的分子机制。方法体外培养MCF-7细胞,质粒转染诱导MCF-7细胞高表达核心蛋白聚糖为DCN组,不转染的MCF-7细胞为正常对照组。MTT法、流式细胞术细胞观察各自细胞增殖情况,RT-PCR、Western blot法检测各组细胞VEGF mRNA和蛋白表达变化。结果与对照组比较,流式细胞术检测DCN转染24、48、72 h后DCN组MCF-7细胞数目明显减少(P<0.05),MTT结果显示DCN组细胞增殖能力受到显著抑制(P<0.05),Western blot检测DCN组细胞VEGF蛋白表达水平有下降趋势。结论核心蛋白聚糖通过降低VEGF mRNA表达水平,使细胞内生成的VEGF蛋白减少,抑制MCF-7细胞增殖。

TNF-ɑ调控LRG1促进乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移

目的:研究TNF-α对乳腺癌MCF-7细胞中LRG1蛋白表达的调控及其对乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及相关分子机制。方法:MTT实验检测不同浓度TNF-α处理后MCF-7细胞活力;EdU实验、Transwell实验和划痕实验分别检测抑制LRG1表达后细胞增殖、侵袭以及迁移能力;Western blot检测细胞内MAPK信号通路中p-p38蛋白表达。结果:低浓度TNF-α处理乳腺癌MCF-7细胞,细胞活力增强;抑制LRG1表达后细胞增殖能力下降,侵袭细胞数、细胞迁移率以及p-p38蛋白表达均下降。结论:TNF-ɑ通过调控LRG1的表达促进乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移,这一过程可能通过激活p38MAPK信号通路来实现。

灵菌红素对耐阿霉素人乳腺癌细胞MCF-7/ADR的作用研究

目的探讨灵菌红素对耐阿霉素人乳腺癌细胞MCF-7/ADR的作用。方法采用平板发酵粘质沙雷氏菌WA12-1-18生产灵菌红素,CCK-8测定灵菌红素的体外活性及MCF-7/ADR的耐药指数。构建裸鼠皮下移植瘤模型,灵菌红素高、低剂量组分别腹腔注射5.0、2.5 mg/kg灵菌红素,生理盐水对照位腹腔注射等体积生理盐水,每4天1次,连续用药24 d,观察移植瘤的体积、质量及裸鼠体质量,HE染色观察移植瘤组织及裸鼠主要脏器的病理情况,免疫组织化学检测移植瘤Ki-67的表达。结果获得的灵菌红素质量分数为95.18%,对MCF-7和MCF-7/ADR的IC50分别为0.484μg/mL和0.264μg/mL。MCF-7/ADR耐药指数13,符合细胞耐药株的要求。灵菌红素处理组裸鼠移植瘤增长速度较生理盐水组慢,肿瘤细胞排列稀疏,核小且着色较浅,Ki-67染色后棕色明显减少。灵菌红素2.5 mg/kg组和灵菌红素5 mg/kg组,在荷MCF-7/ADR裸鼠中抑瘤率分别为37.23%和53.72%。另外,各组裸鼠体质量差异无统计学意义,主要脏器无明显病理变化。结论灵菌红素可抑制裸鼠体内耐阿霉素人乳腺癌细胞MCF-7/ADR的生长,对心、肝、脾、肺和肾等主要脏器无明显毒副作用,为灵菌红素在耐阿霉素乳腺癌的临床应用提供了实验依据。

香豆酸诱导MCF-7细胞凋亡的代谢与氧化应激影响

目的 探讨香豆酸诱导乳腺癌细胞MCF-7凋亡的机制及氧化应激与代谢的影响。方法 采用氧化相关蛋白活性研究香豆酸对MCF-7氧化应激的影响;液相质谱仪结合代谢组学探索香豆酸对MCF-7细胞代谢的影响。结果 香豆酸呈浓度依赖式对MCF-7细胞凋亡具有一定的促进作用,并上调细胞的氧化应激性导致MCF-7细胞氧化系统失衡;同时香豆酸影响MCF-7的细胞代谢,主要是体现糖代谢,富集显著通路集糖酵解;并筛选到差异代谢物563个,其中上调463个,下调100个。结论 香豆酸诱导MCF-7细胞凋亡作用机制可能是通过影响细胞的氧化应激性以及调控细胞糖代谢来实现。

毛酸浆内酯通过抑制STAT3诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡

[目的]旨在探讨信号转导和转录激活因子3(STAT3)在毛酸浆内酯(PPB)诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡中发挥的作用。[方法]采用荧光染色法分析PPB诱导MCF-7细胞凋亡;使用生物信息学方法预测PPB抗乳腺癌的潜在机制;采用噻唑蓝(MTT)法考察STAT3抑制剂S3I-201以及STAT3小干扰RNA(siRNA)对PPB抑制MCF-7细胞生长的作用;采用蛋白免疫印迹(Western Blot)法考察PPB单独处理或STAT3 siRNA预处理后对MCF-7细胞中STAT3、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8(Caspase8)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(Caspase9)、细胞色素c(Cytochrome c)以及多聚ADP核糖聚合酶(PARP)蛋白表达的影响。[结果]MCF-7细胞经PPB作用后凋亡形态特征明显,凋亡比例上升;生物信息学结果显示PPB与乳腺癌疾病的共同靶点STAT3在乳腺癌组织中高表达,单基因GSEA结果提示STAT3高表达与凋亡信号通路呈负相关;Western Blot法检测结果显示PPB能够抑制STAT3的磷酸化;S3I-201抑制剂或siRNA敲降STAT3均能进一步促进PPB抑制MCF-7细胞生长;此外,敲降STAT3进一步增加PPB对促凋亡蛋白Bax、Cytochrome c、裂解的Caspase8(Cleaved-Caspase8)、裂解的Caspase9(Cleaved-Caspase9)以及裂解的PARP(Cleaved-PARP)的促进作用,并增加PPB对抗凋亡蛋白Bcl-2的抑制作用。[结论]PPB通过抑制STAT3诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡。

LMAN2在HR阳性乳腺癌组织中的表达与患者预后的关系及其对MCF-7细胞增殖和迁移的影响

目的:探究甘露糖结合凝集素2(LMAN2)在激素受体(HR)阳性乳腺癌组织中的表达水平与乳腺癌患者预后的关系及其对MCF-7细胞增殖和迁移的影响。方法:通过TCGA、Bc-GenExMiner、GEPIA和Kaplan-Meier Plotter数据库分析LMAN2在乳腺癌组织和正常乳腺组织中的差异性表达及其与患者预后的关系。采用小RNA干扰技术将si-LMAN2#1、si-LMAN2#2及si-NC转染至MCF-7细胞,将过表达LMAN载体(pc-LMAN)及空载体pcDNA3.1阴性对照(pc-NC)转染至MCF-7细胞,实验分为si-LMAN2#1、si-LMAN2#2、si-NC、pc-LMAN2和pc-NC组。通过qPCR和WB实验检测各组细胞中LMAN2 mRNA和蛋白的表达水平,CCK-8、克隆形成、Transwell迁移、WB等实验检测敲低和过表达LMAN 2对MCF-7细胞增殖、克隆形成、迁移及AKT信号通路相关蛋白表达的影响。结果:LMAN2在乳腺癌组织中的表达水平显著高于正常乳腺组织(P<0.001)。HR阳性乳腺癌组织中LMAN2表达水平显著高于HR阴性乳腺癌组织(P<0.001);LMAN2高表达与HR阳性乳腺癌患者不良预后有关联。敲低LMAN2可显著降低MCF-7细胞的增殖和迁移能力(P<0.01或P<0.001),过表达LMAN2可显著提高MCF-7细胞的增殖和迁移能力(均P<0.001)。敲低LMAN2组MCF-7细胞中PTEN和P21蛋白表达水平均显著升高,p-AKT蛋白表达水平显著降低(均P<0.01)。结论:LMAN2在乳腺癌组织和HR阳性乳腺癌组织中高表达,且与不良预后有关联。LMAN2高表达与MCF-7细胞增殖和迁移有关联,其作用机制可能涉及AKT信号通路。

羟基积雪草酸对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡和自噬的影响

目的探讨羟基积雪草酸(madecassic acid,MA)对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡及自噬的影响。方法将MCF-7细胞分为阴性对照组、不同浓度的MA(80、100、120、140、160μmol/L)组、不同浓度的他莫昔芬(10、20、30、40、50、35μmol/L)组,干预24、36、48 h。初步确定MA发挥抗乳腺癌作用的最佳浓度和最佳时间后,采用MTT法检测细胞活力,计算相应的半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)值;流式细胞术检测细胞凋亡;JC-1荧光探针检测线粒体膜电位变化;Western blot法检测细胞增殖蛋白细胞核抗原蛋白(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、自噬蛋白苄氯素-1(Beclin-1)、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ/Ⅰ(microtubule-associated protein1 light chain 3Ⅱ/Ι,LC3Ⅱ/Ι)、螯合体1(protein 62,p62)的蛋白相对表达水平。透射电镜检测自噬小体。结果发挥抗肿瘤作用的他莫昔芬最佳浓度为35μmol/L,MA最佳浓度为140μmol/L,最佳时间均为48 h。与阴性对照组相比,MA140μmol/L组和他莫昔芬35μmol/L组的细胞凋亡率,细胞荧光相对强度以及LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1蛋白相对表达水平均升高(P<0.05,P<0.01);PCNA、P62蛋白相对表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。与MA 140μmol/L组相比,他莫昔芬35μmol/L组细胞凋亡率、细胞荧光相对强度以及Beclin-1蛋白相对表达水平明显升高(P<0.01),PCNA蛋白相对表达水平明显降低(P<0.01)。阴性对照组MCF-7细胞膜完整,核膜清晰,细胞形态良好;MA 140μmol/L组细胞膜、细胞核形态不规则,线粒体基质密度较高、嵴扩张,可见自噬小体;他莫昔芬35μmol/L组细胞膜局部溶解、破损,可见双核仁,线粒体肿胀、基质溶解,可见自噬小体。结论MA可抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖、诱导细胞凋亡和自噬。

蒽贝素对MCF-7乳腺癌细胞荷瘤裸鼠肿瘤生长的影响

目的探讨蒽贝素对7乳腺癌MCF-细胞荷瘤裸鼠肿瘤生长的影响。方法取Balb/c-nu雌性裸鼠30只,随机分为模型组[等体积0.025%氨水溶液(pH 8.2)],5-氟尿嘧啶组(20 mg/kg),以及(蒽贝素)高、中、低剂量组(400,200,100μg/kg),各6只。取0.1 mL MCF-7细胞悬液皮下接种于裸鼠双侧腋下,以复制乳腺癌荷瘤裸鼠模型。建模成功后,各组裸鼠灌胃(或腹腔注射)相应药物或等体积0.025%氨水溶液(pH 8.2),均每日1次,连续14 d。末次给药后,称定瘤体质量并计算抑瘤率;苏木素-伊红(HE)染色观察肿瘤细胞形态学,Tunel染色分析肿瘤细胞凋亡情况并计算凋亡率;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)水平;免疫组化染色法检测Caspase-3蛋白表达水平。结果与模型组比较,5-氟尿嘧啶组和高剂量组裸鼠瘤体质量显著减小(P<0.01或P<0.05);各给药组细胞凋亡率显著升高;5-氟尿嘧啶组和高、中剂量组裸鼠血清TNF-α水平显著升高(P<0.01或P<0.05);各给药组Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。结论蒽贝素可促进荷瘤裸鼠MCF-7细胞凋亡,其机制可能与上调Caspase-3蛋白表达有关。

菊藻丸含药血清调控PTEN对乳腺癌MCF-7细胞生长和转移的作用研究

目的 研究菊藻丸含药血清调控10号染色体上缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因(PTEN)对人乳腺癌MCF-7细胞生长和转移的作用。方法 8周龄、体重(200±20)g的SPF级Wistar雌性大鼠12只,采用随机数字表法分为菊藻丸组和对照组,各6只。各组分别以5.4 g/(kg·d)菊藻丸和等量生理盐水灌胃,制备含药血清和空白对照血清。将培养好的人乳腺癌MCF-7细胞分为20%空白血清组、5%含药血清组、10%含药血清组、15%含药血清组和20%含药血清组,分别使用含20%空白对照血清和含5%、10%、15%、20%含药血清的培养基进行培养干预。采用CCK-8检测细胞增殖、集落形成实验观察克隆形成能力、TUNEL染色检测凋亡、流式细胞术检测周期分布、划痕实验和Transwell检测细胞迁移和侵袭能力,q PCR和Western blot检测PTEN m RNA和蛋白表达水平。结果 与20%空白血清组比较,10%、15%、20%含药血清组细胞增殖活性降低、克隆形成率减少、侵袭能力降低(P<0.05);5%、10%、15%、20%含药血清组细胞凋亡水平升高、迁移能力降低、细胞周期阻滞于G1期、PTEN的m RNA和蛋白表达水平均升高(P<0.05)。与5%含药血清组比较,10%、15%、20%含药血清组细胞增殖活性降低、克隆形成率降低、细胞凋亡水平升高、迁移能力降低、侵袭能力降低、细胞周期阻滞于G1期、PTEN m RNA和蛋白表达水平均升高(P<0.05)。结论 菊藻丸含药血清能抑制MCF-7细胞生长和转移,其机制可能与激活PTEN的表达有关。

β-苦茄碱通过Fas介导的死亡受体途径诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡

目的探讨β-苦茄碱(Beta-solamarine,BSM)诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡及其对Fas介导的死亡受体途径相关蛋白的影响。方法将不同浓度的BSM对体外培养的乳腺癌MCF-7细胞进行干预。采用MTT法测定细胞增殖抑制率,细胞侵袭试验观察细胞侵袭能力,TUNEL法检测细胞凋亡情况,采用Western Blot对Fas、FADD、Cleaved Caspase-8、Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP和PARP蛋白表达水平进行检测。结果BSM处理后的细胞组显示出了较高的抑制率、侵袭细胞数明显下降、细胞凋亡率显著增加,各BSM组的细胞抑制率、侵袭细胞数和凋亡率与正常对照组相比,差异均具有统计学意义(P<0.01)。Caspase-8抑制剂Z-IETD-FMK处理组的细胞凋亡率显著降低,相较于与BSM同剂量组,细胞凋亡率差异具有统计学意义(P<0.01)。在BSM的作用下,MCF-7细胞中Fas、FADD、Cleaved Caspase-8、Cleaved Caspase-3以及Cleaved PARP的表达水平显著提升,而PARP的表达水平下降明显,与正常对照组相比差异均具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论BSM在抑制MCF-7细胞的增殖、侵袭和促进细胞凋亡方面显示出显著效果,激活Fas介导的死亡受体途径可能是BSM诱导细胞凋亡的机制之一。

TO901317经LXRα/NF-κB抑制MCF-7乳腺癌细胞迁移

目的探究肝X受体(LXR)激动剂TO901317对MCF-7人乳腺癌细胞迁移能力的作用及机制。方法体外培养MCF-7细胞。先运用不同浓度的TO901317处理MCF-7细胞24 h,然后通过LXRαsiRNA转染或核因子κB(NF-κB)抑制剂PDTC处理细胞,划痕愈合实验检测MCF-7细胞迁移能力的改变,同时运用蛋白免疫印迹法检测LXRα、NF-κB p65与IκBα的表达。结果随着TO901317处理浓度的增加,MCF-7细胞的迁移能力明显得到抑制,差异具有统计学意义(P<0.05);同时LXRα与IκBα的表达逐渐增强,而NF-κB p65的表达则显著降低。LXRαsiRNA可显著延缓TO901317的上述作用,PDTC处理则进一步增强TO901317对乳腺癌细胞迁移的抑制作用。结论TO901317可激活LXRα,下调NF-κB p65、上调IκBα的表达,抑制乳腺癌细胞迁移。

苦参碱对人乳腺癌MCF-7细胞自噬及细胞凋亡的影响

目的:研究苦参碱对人乳腺癌MCF-7细胞自噬及凋亡的影响,并分析其机制,探索二者之间潜在的关系。方法:采用MTT法和Annexin V/PI双染法检测细胞增殖活力和凋亡率;自噬双标腺病毒法(mRFP-GFP-LC3)和透射电镜法检测细胞自噬水平;Western Blot检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC3及凋亡相关蛋白Caspase-3、cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase-9的表达;运用自噬抑制剂(3-MA)和凋亡抑制剂(Z-VAD-FMK)对上述相关指标进行干预。结果:苦参碱在未加入抑制剂干预的情况下可显著抑制MCF-7细胞的增殖,提高凋亡率和自噬水平,可上调自噬相关蛋白Beclin-1、LC3和凋亡相关蛋白cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase9的表达(P<0.05或P<0.01)。加入自噬抑制剂(3-MA)后,细胞存活率显著降低,凋亡率显著升高(P<0.05);加入凋亡抑制剂(Z-VAD-FMK)后,自噬水平显著升高(P<0.05)。结论:苦参碱可诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡和细胞自噬,二者之间可能存在着互相调控的关系。

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路的苦参碱诱导人乳腺癌MCF-7细胞自噬及其机制的研究

目的 研究苦参碱对人乳腺癌MCF-7细胞自噬及其相关信号通路的影响,为苦参碱的抗肿瘤作用提供更多依据。方法 采用自噬双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3)法、透射电镜法(TEM)检测给药后细胞自噬水平的变化;Western blot检测苦参碱对自噬相关蛋白LC3、Beclin-1,信号通路蛋白PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR表达水平的影响。结果 随着苦参碱浓度的上升,细胞中的自噬水平也在逐渐升高,自噬相关蛋白LC3-II/LC3-I、Beclin-1的表达量呈上升趋势,通路相关蛋白PI3K、Akt、mTOR无明显变化,p-PI3K、p-Akt、p-mTOR的表达量均呈现下降趋势。结论 苦参碱可剂量依赖性升高MCF-7细胞的自噬水平,机制可能与PI3K/Akt/mTOR介导的信号通路有关。

乳移平对乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和上皮间质转化的抑制机制研究

目的:研究中药复方乳移平对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和细胞周期的影响。方法:采用药物浓度递增法培养MCF-7细胞,随机分为空白对照组、乳移平组。CCK-8法检测细胞增殖水平,平板克隆形成实验检测细胞克隆能力,细胞迁移实验检测细胞水平迁移能力,流式细胞术检测不同药物对细胞周期及凋亡的影响,Western Blot检测蛋白水平的表达,明胶酶谱测定MCF-7细胞中MMP-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的活性。结果:CCK-8法显示,与空白对照组相比,乳移平组可抑制细胞增殖(P<0.0001)。平板克隆结果显示,与空白对照组相比,乳移平给药组细胞克隆率显著降低(P<0.0001)。划痕实验结果表明,乳移平给药组MCF-7细胞进入空腔的能力明显低于空白对照组(P<0.05)。侵袭实验表明,乳移平给药组同空白对照组相比,MCF-7细胞的侵袭细胞数明显减少(P<0.05)。流式细胞术结果显示,与空白对照组相比,乳移平给药组G2期细胞数量相对较少(P<0.05)。Western Blot结果表明,同阴性空白对照组相比,乳移平下调N-钙黏蛋白、Vimentin、Snail1和Snail2的表达,而上调E-钙黏蛋白的表达(P<0.05)。结论:乳移平对MCF-7乳细胞生长和侵袭的抑制作用,其机制可能是通过诱导细胞周期阻滞、减少MMP9的活性和抑制上皮-间质转化(EMT)。

Sprouty2蛋白在人乳腺癌MCF-7细胞中的表达及增殖情况研究

目的探究Sprouty2蛋白在人乳腺癌MCF-7细胞中的表达及增殖情况。方法回顾性选取2019年1月至2021年12月间就诊于海南省人民医院肿瘤内科的80例乳腺癌患者临床资料,收集乳腺癌组织标本,对Sprouty2蛋白表达的乳腺癌MCF-7细胞进行培养,根据培养方法的不同分为观察组与对照组,观察组应用Sprouty2蛋白特异性抗体孵育,对照组应用DPBS孵育。对比两组Sprouty2蛋白表达情况;利用siRNA技术对MCF-7细胞Sprouty2基因表达进行干预,根据结果分为siRNA干扰组与未干扰组;应用MTT法对细胞增殖活力予以检测,根据划痕试验结果分为沉默组、DMSO对照组;并采用蛋白质印迹法检测MMP-2、MMP-9、MMP-13表达。结果观察组患者MCF-7细胞中Sprouty2蛋白免疫细胞百分数及平均荧光强度为(31.56±0.55)%、3.21±0.16,均明显低于对照组[(37.31±1.32)%、3.29±0.06],差异均有统计学意义(P<0.05)。siRNA干扰组的Sprouty2相对变化量为0.19±0.05,明显低于未干扰组(1.00±0.14),差异有统计学意义(P<0.05)。MTT试验结果显示,经过siRNA干扰,MCF-7细胞活力较对照组显著升高,沉默组细胞迁徙能力明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。沉默Sprouty2基因的MCF-7细胞中MMP-2、MMP-9、MMP-13表达量为2.53±0.27、0.89±0.12、2.64±0.26,均明显高于对照组(1.26±0.17、0.48±0.11、1.72±0.13),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论Sprouty2蛋白表达失调与乳腺癌的发生密切相关,基因下调会提升MCF-7细胞增殖与侵袭能力。

丙泊酚对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭、迁移及相关标志物表达的影响

目的探讨不同浓度丙泊酚对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响及对程序性死亡配体1(PD-L1)、细胞增殖核抗原(Ki-67)等相关标志物的影响。方法体外培养人乳腺癌雌激素受体阳性细胞系MCF-7,随机将MCF-7分为3组,对每一组加入不同浓度的丙泊酚,即P_(0)组(空白对照组)、P_(25)组(25μg/ml丙泊酚组)和P_(50)组(50μg/ml丙泊酚组)。对三组细胞分别进行克隆形成实验、Transwell细胞迁移实验、侵袭实验、划痕愈合实验以研究各组细胞的增殖、以及细胞的迁移、侵袭变化差异。使用Western blot检测不同浓度丙泊酚做用下对人乳腺癌相关蛋白表达改变情况。结果与P_(0)组及P_(25)组相比,P_(50)组乳腺癌MCF-7细胞增殖及细胞迁移、侵袭能力显著升高(P<0.05)。通过Western blot实验发现:P_(50)组的PD-L1、Ki-67蛋白表达显著高于P_(0)组(P<0.05),其中PD-L1的表达随着丙泊酚浓度的增高而增高。结论丙泊酚并且能够导致相关标志物Ki-67、PD-L1表达增强,Ki-67、PD-L1可能参与丙泊酚对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭、迁移过程。

基于肉瘤基因信号通路探讨槲皮素对乳腺癌MCF-7细胞的作用机制

目的:探讨槲皮素通过RAS/RAF/MEK1信号通路对乳腺癌MCF-7细胞的作用机制。方法:将乳腺癌MCF-7细胞分为空白对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组、极高剂量组,采用CCK-8细胞活力检测法测定不同组别的MCF-7细胞24 h、48 h、72 h的细胞活性;采用流式细胞术检测不同组别MCF-7细胞的凋亡率;采用蛋白质印迹法检测不同组别MEK1、RAS、YAP蛋白的表达;采用免疫荧光染色观察雌激素受体、孕激素受体染色情况。结果:与空白对照组比较,低剂量组、中剂量组、高剂量组及极高剂量组的MCF-7细胞活力均出现下降,呈浓度依赖,不具有时间依赖性,差异有统计学意义(P<0.05);乳腺癌细胞MCF-7的晚期凋亡率明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);低剂量组、中剂量组和极高剂量组MCF-7细胞的MEK1、RAS、YAP蛋白的表达出现不同程度下降,差异有统计学意义(P<0.05);低剂量组、中剂量组、高剂量组及极高剂量组的MCF-7细胞中雌激素受体、孕激素受体表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:槲皮素具有针对乳腺癌MCF-7细胞的抗肿瘤作用,且具有浓度依赖性,其机制可能与对RAS/RAF/MEK1信号通路的抑制有关。