脂多糖、TNFα、IL-6、地塞米松和胰岛素对人乳腺癌MCF7细胞GPR54表达的影响

目的:GPR54是下丘脑神经元调控下丘脑-垂体-性腺轴功能的门控,本文研究不同浓度脂多糖(LPS)、肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素6(IL-6)、地塞米松和胰岛素对人乳腺癌MCF7细胞GPR54 mRNA及蛋白表达的影响。方法:培养MCF7细胞,用LPS(10μg/ml和20μg/ml)、TNFα(20 ng/ml和100 ng/ml)、IL-6(10 ng/ml和20 ng/ml)、地塞米松(10-6mol/L和10-7mol/L)和胰岛素(0.01 IU/L和0.1 IU/L)干预72 h,评价干预6、24、48、72 h后GPR54 mRNA(实时荧光定量PCR)和蛋白表达量(Western印迹)的变化。结果:和对照组相比,LPS(10μg/ml和20μg/ml)、TNFα(20 ng/ml和100 ng/ml)、IL-6(10 ng/ml和20 ng/ml)、地塞米松(10-6mol/L和10-7mol/L)和胰岛素(0.01 IU/L和0.1 IU/L)均显著增加GPR54 mRNA(P均<0.05)和蛋白表达。结论:LPS、TNFα、IL-6、地塞米松和胰岛素显著增加MCF7细胞GPR54的表达,提示这些炎症因子和激素可能通过调节GPR54水平变化进而影响性腺轴功能。

人体乳腺癌细胞系BGaP-37和MGF-7的细胞遗传学研究

本文应用普通染色体G一显带技术和高分辨染色体显带技术对两个人体乳癌细胞系进厅了详尽的细胞遗传学研究。结果显示两个细胞系均具有较复,桀的染色体结构和数目_}辛常。Bcap一3 7细胞系染色体众数为62～63,具有23个可识别其结构的标记染色体。MCF一7细胞系染色体众效为55—56,具有l9个可识别其结构的标记染色体,进一步分析认为,第1、3、5、7、11、13和17号染色体的数目和结构改变,可能与乳腺癌的发生和演进有一定联系;染色体断点1p^(11)(1q^(11))、1p^(13)、3p^(21)、3q^(11)、5q^(11)、7p^(13)、7q^(22)及导致11p^-、17p^-6q^-、13q^-的断裂点可能通过癌基因的激活和抗癌基因的丢失而起一定怍用。

缺氧对乳腺癌细胞MMP-2、u-PAR、FN表达的影响

目的研究体外缺氧对乳腺癌细胞系MCF7浸润能力及其细胞表面金属蛋白酶MMP-2、丝氨酸蛋白酶u-PA受体u-PAR和细胞基质蛋白FN的表达的影响。方法本实验模拟体外缺氧环境,观察缺氧对乳腺癌细胞MCF7浸润穿透Metrigel的能力;以及采用半定量RT-PCR检测细胞表面MMP-2、u-PAR和FN表达情况。结果缺氧状态下MCF7细胞的浸润能力明显增强;其表面的MMP-2、u-PAR、FN基因表达升高。结论缺氧可以上调与乳腺癌浸润转移有关的基因的表达,缺氧条件促进乳腺癌细胞的浸润转移。

瘦素诱导乳腺癌细胞中端粒酶反转录酶表达的机制

目的探讨在乳腺癌细胞（MCF7）中瘦素诱导端粒酶反转录酶（hTERT）表达的分子机制。方法采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT．PCR）法测定瘦素对沉默信号转导和转录激活因子3（STAq3）基因后MCF7细胞hTERTmRNA表达水平的影响。采用Western印迹方法测定MCF7细胞经不同处理后hTERT蛋白的表达变化。采用染色质免疫共沉淀（ChIP）技术观察STA33与hTERT启动子的结合情况。应用双荧光素酶分析，探讨瘦素及P-STAT3抑制剂（AG490）对hTERT启动子转录活性的影响。结果STAT3小干扰片段RNA（siRNA）转染细胞后，瘦素诱导的hTERTmRNA的表达减少。Western印迹结果示hTERT蛋白在瘦素处理组及AG490联合瘦素处理组的蛋白表达分别为3．1094-0．051、1．025±0．031，加入P—STAT3抑制剂AG490后，瘦素诱导hTERT蛋白表达明显减少（P〈0．01）。ChIP结果显示对照组与瘦素处理组mRNA分别为1、3．311±0．017，瘦素（160ng／m1）作用MCF7细胞后，增加了STA33与hTERT启动子之间的结合（P〈0．01）。双荧光素酶分析结果示，经瘦素（160ng／m1）作用后，hTERT启动子活性的变化倍率为80．98±0．18，对照组为20．76±0．31，加入AG490后，hTERT启动子活性的变化倍率为18．65±0．32，瘦素诱导的hTERT启动子的活性明显下降。结论在乳腺癌MCF7细胞中，瘦素／STA33信号通路是上调hTERT表达的可能机制。

靶向信号转导和转录激活因子3的小干扰RNA对体内外乳腺癌细胞生长的抑制作用

目的 观察沉默信号转导和转录激活因子3（STAT3）基因对乳腺癌细胞MCF7体内外生长的抑制作用,探讨STAT3基因作为乳腺癌治疗靶点的可行性和有效性.方法 应用RNA干扰技术抑制MCF7细胞STAT3基因的表达,半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot法检测STAT3 mRNA及蛋白的表达,流式细胞仪检测MCF7细胞的凋亡率,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测MCF7细胞的增殖情况.在裸鼠皮下移植转染了STAT3 siRNA的MCF7细胞,观察其成瘤性.半定量RT-PCR和Western blot法检测成瘤标本的STAT3 mRNA和蛋白的表达.结果 转染48 h后,STAT3 siRNA转染组、非特异siRNA转染组和空白对照组的STAT3 mRNA表达量分别为0.327±0.020、1.035±0.050和1.093±0.018;转染72 h后,3组STAT3蛋白表达量分别为0.153±0.006、1.320±0.033和1.374±0.022,STAT3 siRNA转染组的STAT3 mRNA和蛋白表达水平,较非特异siRNA转染组和空白对照组均明显降低（P＜0.05）.MTT实验结果显示,STAT3 siRNA转染组和非特异siRNA转染组的细胞生长抑制率分别为（44.00±5.10）%和（16.10±1.05）%,STAT3 siRNA转染组的细胞增殖能力明显下降（P＜0.05）.流式细胞仪分析显示,STAT3 siRNA转染组、非特异siRNA转染组和空白对照组的细胞凋亡率分别为（14.79±0.22）%、（8.45±0.43）%和（7.06±0.71）%,STAT3 siRNA转染组明显高于非特异siRNA转染组和空白对照组（P＜0.05）.STAT3siRNA转染组、非特异siRNA转染组和空白对照组在裸鼠体内最终的成瘤体积分别为（41.15±12.17）mm3、（101.36±21.90）mm3和（118.45±24.68）mm3,移植瘤重量分别为（21.4±10.6）mg、（57.2±21.9）mg和（88.6±12.2）mg,STAT3 siRNA转染组的移植瘤体积和重量明显低于非特异siRNA转染组和空白对照组（P＜0.05）.STAT3 siRNA转染组移植瘤组织的STAT3 mRNA和蛋白表达水平均明显降低.结论 靶向STAT3的siRNA可以抑制乳腺癌MCF7细胞体内外的生长,STAT3有可能成为新的乳腺癌治疗靶点.

利多卡因和维拉帕米对药物增敏作用比较研究

目的比较利多卡因和维拉帕米对乳腺癌细胞抗肿瘤药物的增敏作用。方法应用微量细胞培养四氮唑(MTT)法检测乳腺癌细胞系MCF-7对三种抗癌药物5-FU、MMC和CDDP敏感性。观察利多卡因和维拉帕米对三种化疗药物的增敏作用,并比较两药增敏作用之差异。结果 MCF-7对三种化疗药物均敏感,并随药物浓度的升高存活率降低。利多卡因和维拉帕米与三种化疗药物合用后分别降低三种化疗药物的半数抑制浓度(IC50),利多卡因比维拉帕米增敏作用强(P<0.01),加入利多卡因的增效倍数分别为27.4、30.1、59.1,而加入维拉帕米的增效倍数分别6.09、11.2、5.47。结论 MCF-7对三种化疗药物(5-FU、MMC及CDDP)均敏感,利多卡因和维拉帕米对三种化疗药物均有增敏作用,利多卡因比维拉帕米的增敏作用强。