MCM3和MCM7基因在恶性肿瘤中的研究进展

为提高恶性肿瘤诊断科学性,本文针对恶性肿瘤与MCM3、MCM7基因的相关性进行研究,阐述了MCM3、MCM7基因的核心特点,分析MCM3、MCM7基因参与DNA复制过程、增加恶性肿瘤风险以及影响AKT1、mTOR磷酸化反应等作用机制,观察恶性肿瘤中MCM3、MCM7基因表达的主要表现,以及预后评估中MCM3、MCM7指标的应用方法,以供同行参考。

LncRNA MCM3AP-AS1调控miR-19b-3p对OGD/R诱导的神经元细胞损伤的影响

目的 探讨LncRNA MCM3AP-AS1对氧糖剥夺再复氧(OGD/R)诱导的神经元细胞损伤的影响及其对miR-19b-3p的调控作用。方法 采用OGD/R诱导小鼠海马神经元细胞HT22建立细胞损伤模型,si-NC、si-MCM3AP-AS1、miR-NC、miR-19b-3p mimics、si-MCM3AP-AS1与anti-miR-NC、si-MCM3AP-AS1与anti-miR-19b-3p分别转染入HT22细胞后再进行OGD/R处理;采用qRT-PCR法检测MCM3AP-AS1、miR-19b-3p的表达量;根据试剂盒检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6水平;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告基因实验检测MCM3AP-AS1与miR-19b-3p的靶向关系。结果 转染si-MCM3AP-AS1或转染miR-19b-3p mimics可降低OGD/R诱导的HT22细胞中MDA、TNF-α、IL-6水平和凋亡率,SOD水平明显升高(P<0.05);MCM3AP-AS1可靶向调控miR-19b-3p;共转染si-MCM3AP-AS1与anti-miR-19b-3p可提高OGD/R诱导的HT22细胞中MDA、TNF-α、IL-6的水平,细胞凋亡率明显升高(P<0.05),并可明显降低SOD水平(P<0.05)。结论 干扰MCM3AP-AS1表达可减轻OGD/R诱导的神经元细胞损伤。

NUDT9通过稳定MCM3的蛋白表达促进恶性肿瘤增殖

目的 探讨ADP-核糖焦磷酸酶NUDT9促进肿瘤增殖的分子机制。方法 分析GEPIA2数据库中NUDT9在多种肿瘤中的表达水平;利用Western Blot免疫印迹法检测蛋白表达水平;通过克隆形成数量检测细胞增殖速度;使用流式细胞术检测细胞周期变化;EdU染色实验检测S期细胞比例;转染外源质粒SFB-NUDT9联合免疫共沉淀法和定量质谱技术鉴定NUDT9的相互作用蛋白;分别设计两条sgRNA和siRNA在肿瘤细胞中沉默NUDT9基因的表达,结合免疫印迹法检测NUDT9蛋白表达水平及其对细胞增殖相关蛋白表达水平的影响。结果 GEPIA2数据库显示NUDT9在多种肿瘤细胞中高表达;利用CRISPR和小干扰RNA技术均有效沉默NUDT9基因的表达;克隆形成、流式细胞术及EdU增殖实验均表明敲低NUDT9后抑制癌细胞的增殖及G1/S期转换;转染外源质粒SFB-NUDT9结合免疫沉淀法和定量质谱技术鉴定出与细胞增殖相关的NUDT9互作蛋白MCM2-7;通过转染siRNA沉默NUDT9再结合免疫印迹法,发现NUDT9的敲低影响MCM复合物中MCM3的蛋白表达水平;最后转染siRNA沉默MCM3基因的表达,克隆形成和EdU增殖实验均显示MCM3的敲低影响肿瘤细胞的增殖,S期细胞比例减少。结论 NUDT9通过调控MCM3的蛋白表达,促进S期细胞周期进程,对肿瘤细胞的增殖过程起到非常重要的作用。

LncRNA MCM3AP-AS1靶向调控miR-16-5p表达对肺癌细胞增殖、迁移侵袭的影响及机制

目的研究LncRNA MCM3AP-AS1对肺癌细胞增殖、迁移侵袭的影响和潜在机制。方法以BEAS-2B为对照组,实时荧光定量(qRT)-聚合酶链反应(PCR)检测MCM3AP-AS1和miR-16-5p RNA的表达,四氮唑蓝(MTT)法测定A549细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,Western印迹检测增殖蛋白CyclinD1、p21和p27及迁移蛋白基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9和MMP-14,双荧光素酶报告系统验证MCM3AP-AS1和miR-16-5p的关系。结果与对照组相比,肺癌细胞系A549、SPC-A1和NCI-H460中MCM3AP-AS1表达量均显著升高(P<0.05),miR-16-5p表达量显著下降(P<0.05);抑制MCM3AP-AS1表达和过表达miR-16-5p均可抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭;MCM3AP-AS1靶向负向调控miR-16-5p的表达;抑制miR-16-5p表达逆转了下调MCM3AP-AS1表达对A549细胞增殖、迁移、侵袭的作用。结论LncRNA MCM3AP-AS1通过靶向miR-16-5p调控肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭。MCM3AP-AS1是肺癌潜在分子靶点。

MCM3与Ki-67在甲状腺、癌、结节性甲状腺肿中的表达及意义

为探讨MCM3和Ki-67在甲状腺乳头状癌、结节性甲状腺肿及正常甲状腺组织中的表达及意义。采用通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测MCM3在甲状腺乳头状癌、结节性甲状腺肿及正常甲状腺组织中的表达的方法,用免疫组织化学Sp法测定MCM3和Ki-67在甲状腺乳头状癌、结节性甲状腺肿及正常甲状腺组织中的表达。结果显示:(1)DRT-PCR:MCM3与Ki-67在正常甲状腺、癌、结节性甲状腺肿中均有表达。(2)免疫组化:MCM3在正常甲状腺、癌、结节性甲状腺肿组中表达水平有差异(P<0.001),癌和结节性甲状腺肿组与正常甲状腺组表达水平有差异(P<0.01 25);Ki-67在结节性甲状腺肿组和正常甲状腺组中表达尚无差异(P>0.0125),余两两比较表达水平有差异(P<0.0125);MCM3与Ki-67在甲状腺癌组和结节性甲状腺肿组中表达水平有差异(P<0.001)。由此可知,MCM3可作为一种新的甲状腺乳头状癌标记物,较Ki-67更为可靠,从而为判断甲状腺良恶性病变提供一条新的路径。

氟暴露患者外周血中MCM3的表达及肝肾功能变化

背景:前期研究发现MCM3与氟中毒相关,但其在氟中毒早期暴露者中的表达情况尚不清楚。目的:分析氟暴露患者及对照人群外周血中MCM3 mRNA的表达量。方法:选取饮水型氟中毒轻度患者(暴露组)、对照人群(非暴露组)各11例,采用SYBRGreen1嵌合荧光法实时定量PCR检测外周血单个核细胞中MCM3 mRNA的表达,同时测定两组肝肾功能指标。结果与结论:暴露组及非暴露组MCM3 mRNA表达量分别为0.573 60±0.102 59、0.550 0±0.171 81,两组差异无显著性意义(P>0.05)。所测的肝肾功能指标在两组中差异无显著性意义。结果显示轻度氟暴露对患者外周血单个核细胞中MCM3 mRNA表达无显著影响。氟对暴露者肝、肾功能的影响需要选取更多的指标综合分析。

AQP8和MCM3在子宫内膜癌中表达的临床意义

目的探究AQP8 和MCM3 在子宫内膜癌中表达的临床意义.方法：选取正常子宫内膜组织36 例,子宫内膜样腺癌组织63 例.采用分析免疫组化分析AQP8 及MCM3 结果.结果：子宫内膜样癌中AQP8 及MCM3 的阳性表达率明显高于正常子宫内膜组（P〈0.05）;AQP8的阳性表达率在病理分期Ⅲ＋Ⅳ期及组织学分级G2 ＋ G3 中高表达（P〈0.05）;而MCM3 的阳性表达率在组织学分级G2 ＋ G3 及肌层浸润深度〉1/2 中高表达（P〈0.05）结论：AQP8 和MCM3 在子宫内膜癌中高度表达,与肿瘤分期,分化以及浸润深度密切相关,考虑可以作为一组新的免疫组化组合,对于患者预后评估意义十分重大.

长链非编码RNA MCM3AP-AS1在老年晚期乳腺癌患者肿瘤组织中的表达及临床病理意义

目的:探讨长链非编码RNA(long noncoding RNA,LncRNA)MCM3AP-AS1在乳腺癌患者中的表达及其临床病理意义。方法:收集老年女性(年龄≥60岁)晚期乳腺癌患者肿瘤组织穿刺标本64例,应用qRT-PCR技术检测肿瘤组织中的LncRNA MCM3AP-AS1表达情况,免疫组化检测乳腺癌组织样本中的雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)、人表皮生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor-2,Her-2)、Ki-67抗原、Dickkopf相关蛋白1(Dickkopf-related protein 1,Dkk1)蛋白表达情况。Her-2免疫组化结果2+的患者进一步行荧光原位杂交试验(FISH)检测。分析LncRNA MCM3AP-AS1表达情况与乳腺癌患者临床病理之间的关系及对预后的影响。结果:组织分化差及ER、PR阴性的乳腺癌患者肿瘤组织中LncRNA MCM3AP-AS1的表达明显升高(P <0.01)。LncRNA MCM3AP-AS1的表达与是否存在肺、肝、脑转移均无相关性,但与骨转移关系密切(P <0.01)。激素受体阴性、Her-2阳性、Dkk1阳性的患者更容易发生骨转移(P <0.01)。LncRNA MCM3AP-AS1高表达的乳腺癌患者无进展生存期明显低于低表达组(P <0.01)。结论:LncRNA MCM3APAS1与女性乳腺癌的恶性生物学行为关系密切。检测LncRNA MCM3AP-AS1表达对明确乳腺癌发病、转移机制及判断乳腺癌患者预后具有潜在的价值。

miR-147a靶向MCM3抑制脉络膜黑色素瘤细胞增殖、迁移和侵袭

目的:研究miR-147a对脉络膜黑色素瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并探究其作用机制。方法:采用脂质体转染人脉络膜黑色素瘤MUM-2B细胞,设置miR-NC、miR-147a mimics、inhibitor-NC、miR-147a inhibitor四组。采用EDU染色法检测细胞增殖;Transwell实验检测细胞迁移、侵袭;Targetscan生物信息学网站预测分析miR-147a下游靶基因;双荧光素酶报告基因实验验证miR-147a是否靶向结合MCM3 mRNA 3'UTR区;蛋白质印迹法(Western Blot)检测靶基因MCM3蛋白表达。结果:过表达miR-147a可显著降低MUM-2B细胞的增殖数、迁移数和侵袭数,相反,敲减miR-147a提高细胞增殖数、迁移数和侵袭数。miR-147a直接靶向并负向调控MCM3蛋白表达。沉默MCM3可抑制MUM-2B细胞增殖、迁移和侵袭。结论:miR-147a通过直接靶向MCM3抑制脉络膜黑色素瘤MUM-2B细胞的增殖、迁移和侵袭。miR-147a/MCM3轴可能是治疗脉络膜黑色素瘤的新靶标。

长链非编码RNA MCM3AP-AS1靶向调控miR-876-5p促进人结直肠癌细胞系的增殖和迁移

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)微小染色体维持蛋白3相关蛋白-反义链1(MCM3AP-AS1)靶向调控miR-876-5p对结直肠癌(CRC)细胞的增殖和迁移的作用。方法实时定量聚合酶链式反应法(RT-qPCR)检测CRC组织和细胞中MCM3AP-AS1的表达;用MTT法、划痕愈合实验和Transwell小室法检测CRC细胞的增殖和迁移;采用生物信息分析、双荧光素酶基因报告实验、RT-qPCR验证MCM3AP-AS1和miR-876-5p的靶向关系。结果与非肿瘤组织和正常结直肠上皮细胞系相比,MCM3AP-AS1在CRC组织和细胞系中表达上调(P<0.05);敲低MCM3AP-AS1能抑制CRC细胞增殖和迁移(P<0.05);生物信息学分析、双荧光素酶基因报告实验和RT-qPCR表明MCM3AP-AS1与miR-876-5p可相互作用;miR-876-5p可削弱MCM3AP-AS1对CRC细胞增殖和迁移的促进作用(P<0.05)。结论MCM3AP-AS1可以通过吸附miR-876-5p促进CRC细胞的增殖和迁移。

合子基因mcm3在斑马鱼肝早期发育中的作用

目的研究斑马鱼合子基因mcm3是否参与了斑马鱼肝早期发育的调控。方法运用原位杂交分析mcm3在斑马鱼发育早期表达谱;运用mcm3 MO敲降mcm3基因功能,然后用原位杂交及转基因鱼胚胎分析肝的发育状况。结果 mcm3为合子表达基因,在中囊胚期后到尾牙期广泛表达,而在体节发生期及以后分别在体节、头部及内胚层组织高表达。进一步研究发现在mcm3功能敲降后肝变小,而中胚层器官血管心脏的发育并未受到明显影响。mcm3 mRNA回救实验表明mcm3特异的调控了肝的发育。结论斑马鱼合子基因mcm3参与了肝早期发育的调控。

下调lncRNA MCM3AP-AS1通过调控miR-205-5p/NEGR1轴抑制动脉粥样硬化的机制

目的探讨lncRNA MCM3AP-AS1对氧化型低密度脂蛋白(OX-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖和凋亡的影响及作用机制。方法用10 mg/L OX-LDL诱导HUVEC细胞48 h,qRT-聚合酶链反应(PCR)检测细胞中MCM3AP-AS1、miR-205-5p和神经生长调节因子(NEGR)1 mRNA表达水平,Western印迹检测NEGR1蛋白表达。分别转染MCM3AP-AS1小干扰RNA、NEGR1小干扰RNA、miR-205-5p模拟物(mimics)或共转染MCM3AP-AS1小干扰RNA与NEGR1过表达载体至HUVEC细胞,然后再用10 mg/L OX-LDL干预48 h后,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western印迹检测细胞中细胞周期蛋白(Cyclin)D1和活化的半胱天冬酶(Cleaved-caspase-3)蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证MCM3AP-AS1与miR-205-5p、miR-205-5p与NEGR1的调控关系。结果OX-LDL诱导HUVEC细胞后,细胞中MCM3AP-AS1水平、NEGR1 mRNA和蛋白水平明显升高,miR-205-5p水平明显降低(均P<0.05)。下调MCM3AP-AS1、下调NEGR1或上调miR-205-5p均提高了OX-LDL诱导的HUVEC细胞存活率和CyclinD1蛋白表达,而降低了细胞凋亡率和Cleaved-caspase-3蛋白表达(均P<0.05)。MCM3AP-AS1靶向负调空miR-205-5p表达,NEGR1是miR-205-5p的靶基因。上调NEGR1逆转了下调MCM3AP-AS1对OX-LDL诱导的HUVEC细胞增殖和凋亡的影响。结论下调MCM3AP-AS1可能通过调控miR-205-5p/NEGR1轴促进OX-LDL诱导的HUVEC细胞增殖,并降低细胞凋亡。

斑马鱼mcm3合子基因敲除实验模型的构建与鉴定

目的构建斑马鱼mcm3合子基因突变体,研究mcm3合子基因在斑马鱼胚胎早期发育中的作用。方法利用系统发育树分析不同物种间mcm3基因的保守性;利用国家生物技术信息中心(NCBI)网站及Jalview软件序列比对,分析斑马鱼MCM3蛋白与人类MCM3蛋白之间的氨基酸同源性;用CRISPR/Cas9技术构建可稳定遗传的斑马鱼mcm3合子基因缺失突变体;提取胚胎的基因组DNA后进行基因测序,检测斑马鱼mcm3合子基因突变类型;利用原位杂交检测mcm3突变体中mcm3 mRNA的表达水平。结果斑马鱼合子基因mcm3与人类mcm3基因同源,且高度保守;可稳定遗传的mcm3合子基因突变体成功构建;在mcm3突变体斑马鱼中,胚胎从第3天开始出现头和眼睛,其外部表型较野生型斑马鱼小,且mcm3纯合子胚胎在第8天后相继死亡;运用整胚原位杂交发现,mcm3在野生型斑马鱼的头部、眼睛、中后脑边缘、鳃、胸腺及内胚层组织中高表达,但在mcm3突变体斑马鱼中,mcm3 mRNA的表达水平明显降低。结论斑马鱼mcm3基因缺失突变体成功构建,并且mcm3基因在斑马鱼的早期胚胎发育中起重要作用。

lncRNA MCM3AP-AS1靶向miR-524-5p在CIK细胞诱导肺癌细胞A549凋亡中作用机制研究

目的探讨长链非编码RNA微小染色体维系蛋白3结合蛋白反义1(lncRNA MCM3APAS1)参与细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞杀伤肺癌细胞过程中的调控作用,并确定MCM3AP-AS1的发挥功能的靶基因和分子机制。方法细胞计数试剂盒(CCK-8)法测定CIK细胞对A549细胞的杀伤效应。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测与CIK细胞共培养前后A549细胞中MCM3AP-AS1和miR-524-5p的表达水平。流式细胞术检测CIK细胞共培养前后A549细胞凋亡情况。将MCM3AP-AS1过表达载体、miR-524-5p抑制物、pcDNA-MCM3AP-AS1+miR-524-5p分别转染A549细胞,与CIK细胞共培养后,流式细胞术检测A549细胞凋亡变化。双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR验证MCM3AP-AS1对miR-524-5p的靶向作用。结果 CIK细胞大体以时间、浓度依赖性方式杀伤肺癌细胞,选择效靶比20∶1作用12 h进行后续研究。与CIK细胞共培养后,A549细胞MCM3AP-AS1的表达显著降低,miR-524-5p的表达显著升高,A549细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。过表达MCM3AP-AS1或干扰miR-524-5p表达后,CIK细胞对A549细胞的凋亡促进作用显著降低(P<0.05)。MCM3AP-AS1靶向负性调控miR-524-5p表达。过表达miR-524-5p可以逆转过表达MCM3AP-AS1对CIK细胞诱导的A549细胞凋亡的影响(P<0.05)。结论 CIK细胞通过调控MCM3AP-AS1/miR-524-5p通路促进肺癌细胞凋亡,为CIK细胞治疗肺癌提供新的依据。

LncRNA MCM3AP-AS1调节miR-424-5p/PSAT1轴对乳腺癌恶性进展的影响

目的:探讨长链非编码核糖核酸(lncRNA)微小染色体维持蛋白3相关蛋白-反义链1(MCM3AP-AS1)调节微小核糖核酸(miR)-424-5p/磷酸丝氨酸氨基转移酶1(PSAT1)轴对乳腺癌恶性进展的影响。方法:采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测人正常乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌细胞株MDA-MB-231、BT549、BT20中LncRNA MCM3AP-AS1、miR-424-5p和PSAT1信使核糖核酸(m RNA)的表达水平。构建LncRNA MCM3AP-AS1低表达模型、miR-424-5p敲低与过表达模型,并使用RT-qPCR方法验证转染模型构建的成功。分别采用四氮甲基唑蓝(MTT)法、Transwell实验检测乳腺癌细胞株的增殖、迁移、侵袭能力。免疫印迹法检测各组MDA-MB-231细胞中细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和PSAT1蛋白的表达。经生物信息学分析后,采用双荧光素酶报告基因实验与RNA免疫共沉淀(RIP)实验分别验证LncRNA MCM3AP-AS1与miR-424-5p、miR-424-5p与PSAT1之间的靶向关系。结果:在乳腺癌细胞株MDA-MB-231、BT549、BT20中MCM3AP-AS1、PSAT1 m RNA的表达水平显著高于MCF-10A(P<0.05),miR-424-5p表达水平显著低于MCF-10A(P<0.05)。敲低MCM3AP-AS1或过表达miR-424-5p均可以降低MDA-MB-231细胞的吸光度(OD490)值、细胞迁移数目和细胞侵袭数目、CyclinD1、N-cadherin和PSAT1蛋白表达水平(P<0.05),提高细胞E-cadherin蛋白表达水平(P<0.05)。敲低miR-424-5p的表达逆转了下调MCM3AP-AS1对MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭以及相关蛋白表达的影响。双荧光素酶报告基因实验与RIP实验证实MCM3AP-AS1靶向负调控miR-424-5p表达,miR-424-5p靶向负调控PSAT1的表达。结论:LncRNA MCM3AP-AS1在乳腺癌中呈高表达,其低表达可通过靶向调节miR-424-5p/PSAT1轴抑制乳腺癌的恶性进展。

宫颈鳞状细胞癌组织LncRNA DCST1-AS1、LncRNA MCM3AP-AS1表达与增殖侵袭基因和预后的关系

目的:探讨宫颈鳞状细胞癌(CSCC)组织长链非编码核糖核酸(LncRNA)DC-STAMP结构域1-反义1(DCST1-AS1)、LncRNA MCM3AP反义RNA 1(MCM3AP-AS1)表达与增殖侵袭基因和预后的关系。方法:选择2018年1月至2020年1月苏州大学第二附属医院收治的124例CSCC患者,取CSCC组织及其癌旁正常组织,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测LncRNA DCST1-AS1、LncRNA MCM3AP-AS1以及增殖基因(YAP1、Piwil2、EZH2、PKCε)和侵袭基因(Rab11、TUG1、Gli1、FoxM1)m RNA表达。患者出院后随访3年。Pearson相关性分析Lnc RNA DCST1-AS1、Lnc RNA MCM3AP-AS1表达与增殖基因、侵袭基因的相关性。分析Lnc RNA DCST1-AS1、Lnc RNA MCM3AP-AS1表达与临床病理特征的关系。绘制Kaplan-Meier曲线分析预后情况,多因素COX回归分析影响CSCC患者预后的因素。结果:CSCC癌组织中Lnc RNA DCST1-AS1表达高于癌旁组织(P<0.05),Lnc RNA MCM3AP-AS1表达低于癌旁组织(P<0.05)。YAP1、Piwil2、EZH2、PKCε、Rab11、TUG1、Gli1、FoxM1 m RNA水平与CSCC癌组织中Lnc RNA DCST1-AS1表达呈正相关(P<0.05),与Lnc RNA MCM3AP-AS1呈负相关(P<0.05)。低中度分化、FIGO分期Ⅲa期、盆腔淋巴结转移CSCC患者癌组织中Lnc RNA DCST1-AS1表达高于高度分化、FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期、无盆腔淋巴结转移宫颈癌患者(P<0.05),Lnc RNA MCM3AP-AS1表达低于高度分化、FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期、无盆腔淋巴结转移宫颈癌患者(P<0.05)。Lnc RNA DCST1-AS1高表达、Lnc RNA MCM3AP-AS1低表达CSCC患者3年总生存率低于Lnc RNA DCST1-AS1低表达、Lnc RNA MCM3AP-AS1高表达患者(P<0.05)。多因素COX回归分析显示盆腔淋巴结转移、Lnc RNA DCST1-AS1高表达是CSCC患者预后不良的危险因素(P<0.05),Lnc RNA MCM3AP-AS1高表达是保护因素(P<0.05)。结论:CSCC组织中LncRNA DCST1-AS1表达上调,LncRNA MCM3AP-AS1表达下调,且与CSCC增殖侵袭和预后不良有关。

microRNA-520a靶向MCM3抑制急性淋巴细胞白血病细胞增殖的研究

目的阐述在急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)细胞中microRNA(miR)-520a的表达和临床意义。方法在非恶性血液肿瘤患者和B-ALL患者骨髓淋巴细胞及健康人外周血淋巴细胞、B-ALL患者细胞中利用实时定量PCR检测miR-520a的表达情况;在人急性B淋巴细胞白血病细胞株(BALL-1)中转染miR-520a模拟物,CCK-8观察细胞增殖能力变化,实时定量PCR检测miR-520a的表达变化。生物信息学分析MCM3是miR-520a的靶基因并预测位点;使用双萤光素酶报告基因检测miR-520a对MCM3的转录活性影响;在miR-520a mimics转染组中使用MCM3过表达质粒进行回补实验,观察MCM3蛋白和细胞增殖变化。结果同正常组织/细胞相比,B-ALL患者细胞/BALL-1细胞系中miR-520a表达水平显著降低(P<0.05),miR-520a过表达能够使BALL-1细胞增殖能力降低(P<0.05);miR-520a过表达降低MCM3的蛋白表达水平(P<0.05);通过双萤光素酶实验验证miR-520a能够作用MCM3的3′UTR区;miR-520a mimics能够使BALL-1细胞增殖能力下降,同时过表达MCM3能够提高细胞增殖能力。结论miR-520a可能通过下调MCM3的表达抑制B-ALL细胞增殖能力。

MCM3在甲状腺肿瘤中的表达及其临床意义

目的:探讨MCM3蛋白在甲状腺肿瘤组织中的表达及其临床意义。方法:选择甲状腺肿瘤术后新鲜组织标本150例为研究对象,其中甲状腺乳头状癌50例和单纯结节性甲状腺肿50例,另选择同期单纯结节性甲状腺肿切除术中周边正常甲状腺组织50例。应用免疫印迹方法检测MCM3蛋白的表达,分析MCM3蛋白的表达与甲状腺肿瘤的临床病理特征的关系。结果:甲状腺乳头状癌中MCM3阳性表达明显高于单纯结节性甲状腺肿和正常甲状腺组织,且结节性甲状腺肿组织中MCM3蛋白表达也高于正常甲状腺组织。结论:MCM3异常表达与甲状腺肿瘤的发生密切相关,且MCM3蛋白的表达越高越提示为恶性肿瘤,从中反映MCM3蛋白可作为甲状腺癌恶性生物学行为的重要标记物之一。

长链非编码RNA MCM3AP-AS1靶向调控miR-876-5p对卵巢癌细胞增殖和转移的影响

目的探讨长链非编码RNA MCM3AP-AS1(MCM3AP antisense RNA 1,MCM3AP-AS1)靶向调控微小RNA-876-5p(miR-876-5p)对卵巢癌SKOV3细胞增殖和转移的影响。方法选取2017年4月至2018年5月温州市中心医院妇产科收治的40例卵巢癌患者癌组织和相应癌旁组织标本,及卵巢癌细胞系(CaOV3、SKOV3、OVCAR3、OV90)和正常卵巢上皮细胞系(HOSE)。采用实时定量聚合酶链式反应法(qRT-PCR)检测卵巢癌组织和细胞中lncRNA MCM3AP-AS1的表达水平;建立lncRNA MCM3AP-AS1低表达模型,采用MTT实验检测卵巢癌细胞增殖,采用transwell检测卵巢癌细胞的迁移和侵袭水平;采用生物信息分析、荧光素酶实验、qRT-PCR验证lncRNA MCM3AP-AS1和miR-876-5p的靶向关系。结果lncRNA MCM3AP-AS1在卵巢癌组织中的水平为(8.45±0.86),高于癌旁组织(4.45±0.45);在卵巢癌细胞中的水平为CaOV3(1.53±0.12),SKOV3(1.82±0.23),OVCAR3(1.34±0.12),高于正常卵巢上皮细胞HOSE(1.00±0.10);下调lncRNA MCM3AP-AS1能降低卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭;lncRNA MCM3AP-AS1能与miR-876-5p相互作用并下调其表达。结论lncRNA MCM3AP-AS1可通过靶向抑制miR-876-5p促进卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

LncRNA MCM3AP-AS1/miR-335对骨肉瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨长链非编码RNA MCM3AP反义RNA 1(LncRNA MCM3AP-AS1)对骨肉瘤细胞增殖、凋亡的影响及其对miR-335的调控作用。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测骨肉瘤组织、瘤旁组织中MCM3AP-AS1、miR-335的表达量;体外培养人骨肉瘤细胞U2OS,分别将si-NC、si-MCM3AP-AS1、si-MCM3AP-AS1与NC-inhibitor、si-MCM3AP-AS1与miR-335 inhibitor转染至U2OS细胞;采用qRT-PCR法检测U2OS细胞中MCM3AP-AS1、miR-335的表达量;采用MTT实验与平板克隆形成实验检测细胞增殖能力;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测MCM3AP-AS1、miR-335的靶向关系;蛋白质印迹法检测B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达量。结果:与瘤旁组织比较,骨肉瘤组织中MCM3AP-AS1的表达水平升高(P<0.05),miR-335的表达水平降低(P<0.05);转染si-MCM3AP-AS1可明显降低光密度值及Bcl-2蛋白水平、减少克隆形成数、提高凋亡率及Bax蛋白水平(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实MCM3AP-AS1可靶向结合miR-335;转染miR-335 inhibitor可明显逆转干扰MCM3AP-AS1对U2OS细胞增殖及凋亡的作用。结论:MCM3AP-AS1可通过负向调控miR-335的表达调节骨肉瘤细胞增殖及凋亡。