MCM5在卵巢癌中的作用及机制分析

目的探讨MCM5在卵巢癌中的表达、作用机制和临床意义。方法利用GEO、TCGA等数据库分析MCM5 mRNA在卵巢癌中的表达与预后关系;采用免疫组化SP两步法染色分析卵巢癌中MCM5的表达;应用CCK-8法、EDU、平板克隆、Transwell小室和流式细胞术检测MCM5对细胞增殖、迁移侵袭和凋亡的影响。结果生物信息学分析发现MCM5在卵巢癌中mRNA水平明显升高,且高表达者无进展生存期短(P<0.01)。免疫表型:MCM5在输卵管上皮中不表达(0/6),在卵巢癌中阳性率为48.3%(57/118),MCM5在卵巢癌中的表达显著高于输卵管上皮,在高级别浆液性癌中呈弥漫强表达,MCM5^(+)与ER-、Ki67增殖指数高相关。敲低MCM5的表达,抑制卵巢癌细胞增殖(P<0.05)、克隆形成(P<0.05)、侵袭和迁移(P<0.05),促进凋亡。结论MCM5在卵巢癌细胞和组织中表达升高,与预后不良相关,有望成为治疗卵巢癌的新靶标。

MCM5和P16(INK4A)在宫颈鳞癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨微小染色体维持蛋白-5(MCM5)与P16INK4A在宫颈癌组织、宫颈上皮内瘤变和正常宫颈组织中的表达及其意义。方法采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和免疫组化法,分别检测MCM5和P16INK4AmRNA及蛋白在40例宫颈癌组织、11例低度宫颈上皮内瘤变(CINⅠ)、15例高度宫颈上皮内瘤变(CINⅡ~Ⅲ)和15例正常宫颈组织中的表达。结果 1各不同宫颈组织中MCM5和P16INK4AmRNA及蛋白的表达趋势一致。宫颈癌组织中MCM5和P16INK4AmRNA的表达量和蛋白表达率均高于CINⅠ、CINⅡ~Ⅲ和正常宫颈组织。MCM5基因和蛋白在宫颈癌组织中的表达均比正常宫颈组织、CINⅠ、CINⅡ~Ⅲ高,差异均具有统计学意义(P<0.05);P16INK4A基因和蛋白在宫颈癌中的表达比正常宫颈组织、CINⅠ高,差异均有统计学意义(P<0.01),而与CINⅡ~Ⅲ间差异无统计学意义(P>0.05)。2MCM5mRNA表达量和蛋白表达率与临床期别、分化程度相关,差异有统计学意义(P<0.01),与年龄无关(P>0.05);P16INK4AmRNA和蛋白表达与临床期别、年龄无关(P>0.05),而与分化程度相关,差异有统计学意义(P<0.01)。3在宫颈癌组织中MCM5和P16INK4A表达呈正相关(r=0.538,P<0.01)。结论MCM5和P16INK4A的高表达可能与宫颈癌的发生发展有关。MCM5可能成为宫颈癌肿瘤增生的新标志物;其与P16INK4A联合检测有助于进行CIN的分级和转归判断,有望提高宫颈癌的筛查率。

P16、Ki67和MCM5在宫颈上皮内瘤变中的表达及意义

目的探讨P16、Ki67、MCM5蛋白在宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)中的表达特征,与CIN分级和高危HPV感染的关系,及其提示CIN预后的意义。方法选取组织学诊断为CIN181例(其中CINⅠ54例,CINⅡ87例,CINⅢ40例),荧光PCR方法检测病变中高危HPV(HPV16/18/31/33/35/39/45/51/52/56/58/59/68)的感染情况;以非宫颈病变切除的子宫颈组织为正常对照,免疫组织化学EnVison法检测P16、Ki67和MCM5在宫颈CIN中表达情况;对患者进行随访,观察这些指标的表达与CIN临床病理特征关系以及其对CIN病变预后的意义。结果 (1)CIN病变中高危HPV阳性率为63.54%(115/181),在各级CIN中阳性率分别为:CINⅠ33.3%(18/54),CINⅡ73.56%(64/87)和CINⅢ82.5%(33/40),其差别有统计学意义。(2)P16在各级CIN病变中的阳性率分别为42.6%(23/54)、85.1%(74/87)和87.5%(35/40),并呈现不同的分布特征;Ki67在各级CIN病变中的阳性率分别为68.5%(37/54)、63.2%(55/87)和60%(24/40);两者的表达与CIN分级有关。MCM5在各级CIN病变中的阳性率分别为68.5%(37/54)、67.8%(59/87)和77.5%(31/40),其表达差别有统计学意义,但与CIN分级无关。(3)对其中86例患者进行1～126个月时间的随访,60患者经过锥切或者LEEP术治疗,其中35例病变持续存在或进展为高级别病变;而26患者未经治疗,其中14例患者病变持续存在或进展为高级别病变,2例发展为浸润癌。Ki67和MCM5表达与CIN病变的预后有提示作用。结论 P16,MCM5和ki67表达均与高危HPV感染有关,三者在不同级别CIN中表达率不同,有助于CIN的诊断,P16的不同分布特征与CIN病变级别有关;而MCM5的表达与P16和ki67一致,是有助于CIN诊断的有效标记物;ki67和MCM5表达能提示CIN的不良预后。

MCM5和Ki67在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中表达及意义

目的探讨微小染色体维持蛋白-5（minichromosome maintenance-5,MCM5）和Ki67在宫颈上皮内瘤变（cer-vical intraepithelial neoplasia,CIN）及宫颈癌组织中的表达及临床病理意义。方法采用免疫组化技术（S-P法）检测MCM5和Ki67在99例宫颈CIN和宫颈癌中的表达。结果MCM5和Ki67在正常宫颈黏膜上皮、CINⅠ-Ⅱ级、CINⅢ级、浸润癌表达的阳性率分别为26.7%、72.0%、80.0%、97.9%和10.0%、32.4%、84.0%、97.9%。各级CIN与浸润癌相比MCM5的表达率差异具有显著性（P〈0.05）;在CINⅢ级和宫颈癌中MCM5的表达与Ki67表达呈正相关（r=0.687,0.936,P〈0.05）。MCM5和Ki67表达率与临床分期及病理分级有关（P〈0.05）。结论MCM5和Ki67可作为反映宫颈上皮增生病变程度及生物学行为的指标,对宫颈非浸润性病变与浸润性病变的诊断及鉴别有参考价值。

MCM5在膀胱肿瘤组织和尿脱落细胞中的表达及临床意义

目的探讨微小染色体维持蛋白(MCM)在膀胱肿瘤组织和尿脱落细胞中的表达及临床意义。方法收集本院2012年8月—2013年8月住院患者及健康志愿者的尿脱落细胞或膀胱组织标本,对其进行MCM5检测。结果1膀胱癌患者在不同病理分级、临床分期MCM/β-actin的差异有统计学意义(P<0.05);280例膀胱癌患者尿脱落细胞中有71例MCM5呈阳性表达,与正常对照组和其他泌尿系疾病组比较,差异有统计学意义(P<0.05),膀胱癌患者尿脱落细胞MCM5阳性率在各病理分级、临床分期差异无统计学意义(P均>0.05),但其表达在各病理分级、临床分期差异有统计学意义(P均<0.05)。3与尿细胞学相比,尿脱落细胞MCM5检测诊断膀胱癌的灵敏度、阴性预测值较高,假阴性率低,差异有统计学意义(P<0.05),二者的特异度、假阳性率及阳性预测值比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论尿脱落细胞中MCM5检测对膀胱癌诊断意义重大,是对膀胱肿瘤复发检测、预后评价较好的指标,值得广泛应用于临床诊断。

STK15、MCM5在胃癌前病变及癌变组织中的表达及相关性分析

目的:研究中心体扩增激酶STK15和微小染色体维持蛋白5(MCM5)在胃癌组织、癌旁正常胃组织及不典型增生胃组织中的表达水平,旨在探讨二者在胃癌发生中的作用及相关机制。方法:采用Real-time荧光定量PCR技术对胃组织中STK15和MCM5的mRNA表达水平进行检测。采用SPSS统计软件对二者表达进行方差分析、pearson检验对二者表达的关联性进行分析。结果:STK15在胃癌组织的表达量为1.326±0.072,在癌旁正常胃组织为0.655±0.053,不典型增生胃组织为0.703±0.072,除癌旁正常组织与不典型增生组织中表达无差异(P>0.05)外,其余各组两两比较差异均有显著性(P<0.01)。MCM5在胃癌组织的表达量为0.864±0.038,正常组织为0.553±0.048,不典型增生组织为0.796±0.055,各组两两比较差异均存在显著性(P<0.01)。在胃组织中STK15和MCM5表达呈正相关(r=0.744,P<0.01)。结论:中心体扩增和微小染色体的维持是细胞癌变过程的重要事件,MCM5能很好反映细胞的增殖状态,中心体的异常扩增是细胞恶性克隆的关键环节,二者联合检测有助于胃癌的早期诊断和评估侵袭能力。

食管活检各级病变组织中Mcm5和PCNA的表达

目的 :研究食管癌发生发展过程中微小染色体维持蛋白 5 (Mcm5 )表达的意义及与细胞增殖核抗原 (PC NA)的关系。方法 :采用免疫组织化学S P法检测 2 2例食管正常黏膜 (N)、1 9例不典型增生 (DYS)、7例原位癌 (CIS)及 1 39例浸润癌 (SCC)活检标本中Mcm5和PCNA的表达情况。结果 :①Mcm5和PCNA在食管由正常向癌转变的过程中 ,表达逐渐升高 (P <0 .0 1 ) ,2者均与病变类型存在正相关关系 ,rs 分别为 0 .5 74和 0 .4 79(P均 <0 .0 0 1 )。②Mcm5的表达随着食管癌分化程度的降低而逐渐增高 (rs=- 0 .2 1 9,P <0 .0 5 ) ,而PCNA的表达在Ⅰ、Ⅱ级鳞癌组织中逐渐升高 ,但在Ⅲ级鳞癌组织中降低 ,与分化程度无关 (rs=- 0 .1 5 9,P >0 .0 5 )。结论 :Mcm5、PCNA在食管癌变过程中能很好地反映细胞的增殖状况 。

survivin和Mcm5在食管活检组织中的表达及意义

目的:研究凋亡抑制因子surv iv in和增殖因子M cm 5在食管癌发生发展过程中表达的意义及相互关系。方法:采用免疫组织化学(S-P)法检测22例食管正常黏膜、19例不典型增生、7例原位癌及139例浸润癌活检标本中sur-v iv in和M cm 5的表达情况。结果:①食管活检组织中,surv iv in和M cm 5蛋白在由正常向癌转变的过程中,表达逐渐增高,二者在正常黏膜中的表达均明显低于不典型增生、原位癌及浸润癌(P<0.05);②surv iv in蛋白表达与M cm 5蛋白表达之间呈正相关关系(P<0.05)。结论:食管癌的发生发展过程涉及凋亡抑制因子surv iv in的激活及增殖因子M cm 5功能的增强,二者联合应用有助于食管癌及其癌前病变的诊断。

MCM5在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的探讨MCM5在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及与其临床病理特征的关系。方法采用免疫组织化学SP法,检测78例原发性非小细胞肺癌组织、40例正常肺组织中MCM5的表达水平。结果非小细胞肺癌组MCM5阳性率高于正常肺组织组(P=0.000)。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期非小细胞肺癌组织中MCM5阳性率比较,差异有统计学意义(P=0.031);淋巴结转移者MCM5表达率与无淋巴结转移者比较也有统计学差异(P=0.015)。结论 MCM5可能参与了非小细胞肺癌的发生和发展过程;可能成为判断非小细胞肺癌发生发展和评价预后的有效参考指标之一,对于非小细胞肺癌的早期预测可能具有重要的临床意义。

乳癌新辅助化疗后MCM5、Ki-67和C-erbB-2表达变化及意义

目的观察人乳癌新辅助化疗前后MCM5、Ki-67和C-erbB-2蛋白的表达情况,探讨其与化疗效果的关系。方法采用免疫组化法检测新辅助化疗前后40例乳癌标本中MCM5、Ki-67和C-erbB-2的表达。结果新辅助化疗有效率为77.5%。化疗前MCM5和Ki-67蛋白阳性表达显著高于化疗后(Z=-3.94、-3.04,P<0.01),而化疗前后C-erbB-2蛋白阳性表达差异无显著性(Z=-1.60,P>0.05);化疗前MCM5蛋白阳性表达显著高于Ki-67(Z=-4.02,P<0.01)。化疗有效组(31例)MCM5蛋白阳性表达显著高于化疗无效组(9例)(Z=-3.57,P<0.01),而C-erbB-2蛋白阳性表达显著低于化疗无效组(Z=-3.92,P<0.01)。结论ET方案新辅助化疗有较好的疗效,可能通过抑制MCM5、Ki-67蛋白的表达来阻止乳癌细胞的增殖。MCM5高表达、C-erbB-2阴性者化疗更为敏感,二者可作为临床指导乳癌化疗的分子生物学指标。

宫颈上皮内瘤变及宫颈癌中医证型与MCM5及p16^(INK4a)相关性研究

目的探讨宫颈上皮内瘤变(CIN)、宫颈癌的中医证型分布及演变规律,探究各证型与微小染色体维持蛋白5(MCM5)、抑癌基因INK4a编码蛋白p16INK4a的相关性。方法对149例CIN及宫颈癌患者进行中医辨证分型,检测MCM5、p16INK4a。结果本病主要证型依次为湿热蕴毒型、外染毒邪型、肝经湿热型、阴虚夹湿型、脾肾阳虚型。CINⅠ多见外染毒邪型,其次为湿热蕴毒型;CINⅡ、CINⅢ以湿热蕴毒型为主;宫颈癌以湿热蕴毒型、阴虚夹湿型为主。证型在不同病理阶段的分布差异有统计学意义(P<0.01)。中医证型由外染毒邪、湿热蕴毒、肝经湿热、阴虚夹湿逐渐加重,MCM5阳性率无增高趋势,但MCM5强度增加,p16阳性率及强度均呈增加趋势。结论中医证型与MCM5及p16INK4a有一定相关性,其中湿热蕴毒型、肝经湿热型、阴虚夹湿型出现持续性CIN及进展为宫颈癌的风险更大。

MCM5及Ki-67蛋白表达与乳腺癌新辅助化疗近期疗效关系的研究

目的:探讨人乳腺癌新辅助化疗前后MCM5和Ki-67蛋白的表达状况,分析其与化疗疗效关系的意义。方法:采用免疫组化法检测40例乳腺癌新辅助化疗前后标本中MCM5和Ki-67的表达。结果:新辅助化疗有效率为77.5%。化疗前MCM5和Ki-67蛋白阳性表达显著高于化疗后(P<0.01);化疗前MCM5蛋白阳性表达显著高于Ki-67(P<0.01)。化疗有效组(31例)。MCM5蛋白阳性表达显著高于无效组(9例)(P<0.01);化疗有效组Ki-67蛋白阳性表达高于无效组,但差异无显著性(P>0.05)。化疗前MCM5、Ki-67表达呈正相关(r=0.601,P<0.01)。结论:ET方案新辅助化疗有较好的疗效,可能通过抑制MCM5、Ki-67蛋白的表达来阻止乳腺癌细胞的增殖。MCM5蛋白高表达者化疗更为敏感,MCM5可作为临床指导乳腺癌化疗并预测化疗敏感性的分子生物学指标之一。

长链非编码RNA CRNDE通过下调miR-136-5p表达并上调MCM5表达促进U937细胞增殖并抑制其凋亡

目的 探究长链非编码RNA结直肠肿瘤差异表达基因(CRNDE)对U937细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及其作用机制。方法 首先通过基因表达谱交互分析(GEPIA)数据库分析CRNDE在急性髓系白血病(AML)患者骨髓细胞中的表达水平;实时荧光定量PCR检测AML细胞系miR-136-5p、 CRNDE及微小染色体维持蛋白5(MCM5)的mRNA表达水平。构建敲低CRNDE的慢病毒载体并转染U937细胞,设为敲低CRNDE组(sh-CRNDE组)和阴性对照组(sh-NC组);分别转染miR-136-5p模拟物(miR-136-5p mimic)和miR-136-5p抑制物(miR-136-5p inhibitor)对U937细胞中的miR-136-5p进行过表达和敲低,设为miR-136-5p过表达组(miR-136-5p-mimic)、过表达阴性对照组(NC-mimic)、 miR-136-5p敲低组(miR-136-5p-inhibitor)和敲低阴性对照组(NC-inhibitor)。CCK-8法和细胞计数试验检测CRNDE和miR-136-5p对细胞增殖的影响,流式细胞术检测CRNDE和miR-136-5p对细胞周期和凋亡的影响。实时荧光定量PCR检测miR-136-5p、 CRNDE及MCM5的mRNA表达,Western blot法检测MCM5、 P53、 B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和细胞周期蛋白A2(cyclin A2)的蛋白表达水平。结果 CRNDE在AML患者骨髓和细胞系中高表达。敲低CRNDE可以上调miR-136-5p,抑制MCM5 mRNA和蛋白表达,抑制细胞增殖,促进凋亡并使细胞周期阻滞在G1期。过表达miR-136-5p也可抑制MCM5核酸和蛋白水平表达。而敲低miR-136-5p则可以逆转以上作用。结论 CRNDE通过下调miR-136-5p和上调MCM5表达,进而促进U937细胞增殖并抑制其凋亡。

抗MCM5蛋白多克隆抗体的制备及纯化

用已经制备的纯化MCM5蛋白免疫新西兰大白兔,获得抗MCM5蛋白的多克隆抗体.重组蛋白MCM5既具有免疫原性又具有免疫反应性.

MCM5和p16蛋白在肺腺癌组织中的表达及其临床意义

目的检测微小染色体维持蛋白5(MCM5)、p16蛋白在肺腺癌组织中表达的改变及其在癌发生发展中的作用。方法采用免疫组织化学SP法检测60例肺腺癌、30例支肺脓肿等非癌病变旁正常肺组织中MCM5、p16蛋白的表达情况。结果60例肺腺癌组织中MCM5蛋白的阳性表达率为100%,与正常对照组的表达差异有高度显著性(P<0.01)。肺腺癌组织中p16蛋白阳性表达率为71.67%(43/60),显著低于100%阳性表达的正常对照组(P<0.01)。肺腺癌组中MCM5、p16蛋白的阳性表达与组织学分级有关(P<0.01);癌组中MCM5蛋白的阳性表达与淋巴结转移有关(P<0.01),而p16蛋白的阳性表达与淋巴结转移无关(P>0.05)。MCM5与p16蛋白的表达与肺腺癌的年龄、肿瘤大小、组织学类型及TNM分期无关(P>0.05)。MCM5蛋白的阳性表达与p16的表达呈负相关(r=-0.4920,P<0.01)。结论MCM5蛋白的高表达可能涉及了人肺腺癌的发生、发展过程,MCM5蛋白的高表达与癌细胞的增殖、侵袭和转移有关,MCM5的检测可作为评价肺腺癌癌细胞的增殖状态、预测肺腺癌临床预后、指导临床治疗的重要生物学指标。p16基因改变在肺腺癌的发生中起重要作用,p16蛋白是肺腺癌早期诊断的有用指标。

膀胱癌中MCM5和PCNA基因的表达及与临床病理因素的关系

目的:研究膀胱癌发生发展过程中微小染色体维持蛋白5(MCM5)和细胞增殖核抗原(PCNA)表达的意义及其相互关系。方法:采用免疫组织化学S-P法分别检测30例膀胱正常黏膜及膀胱癌标本中MCM5和PCNA的表达情况。结果:①MCM5和PCNA在膀胱由正常向癌转变的过程中,表达逐渐升高(P<0.01);②MCM5和PCNA呈正相关(相关系数rs=0.922,P=0.000)。结论:①MCM5和PCNA在人膀胱癌组织中蛋白的表达上调;②MCM5和PCNA在人膀胱癌组织中蛋白的表达与癌细胞分化程度和临床病理分期(UICC)密切相关;③MCM5和PCNA在膀胱癌变过程中能很好地反映细胞的增殖状况。

mcm7、mcm5及cyclin E在直肠癌中的表达及临床意义

目的研究mcm7、mcm5和cyclinE在直肠癌组织中的表达及临床意义。方法选取术前未经放化疗的直肠腺癌手术标本104例、直肠腺瘤28例及癌旁正常黏膜组织36例,采用免疫组化S-P法分别检测mcm7、mcm5、cyclin E的表达水平,并对104例直肠癌标本按照有无淋巴结转移等进行分组比较,分析其与直肠癌临床病理参数的关系。同时进行了三者的相关分析。结果直肠癌组织中mcm7、mcm5及cyclin E阳性表达率均明显高于对照组(P<0.05)。28例直肠腺瘤中mcm7、mcm5及cyclin E阳性率分别为53.57%(15/28)、42.86%(12/28)、28.57%(8/28),36例直肠癌旁正常组织中,mcm7、mcm5及cyclin E阳性率分别为27.78%(10/36)、22.22%(8/36)、11.11%(4/36);而在104例直肠癌组织中,mcm7、mcm5及cyclin E阳性率分别为82.69%(86/104)、76.92%(80/104)、67.31%(70/104)。三者的表达与淋巴结转移、远处转移及癌组织分化程度、浸润深度有关(P<0.05),而与患者的性别、年龄及肿瘤的大小无明显关系。直肠癌组织中三者的表达成正相关(P<0.05)。结论 mcm7、mcm5、cyclin E过表达可能在直肠腺癌的发生、发展中发挥重要作用。

抗MCM5蛋白多克隆抗体的制备及纯化

用已经制备的纯化的MCM5蛋白免疫新西兰大白兔,获得抗MCM5蛋白的多克隆抗体.重组蛋白MCM5既具有免疫原性又具有免疫反应性.

基于AOX1和MCM5基因水芹地方品种的遗传关系分析及‘玉祁红芹’ISSR-SCAR标记建立

基于低拷贝核基因AOX1和MCM5的扩增结果,对采自南京的水芹〔Oenanthe javanica(Bl.)DC.〕野生种和太湖流域6个地方品种进行了遗传多样性分析,并基于ISSR标记开发了两步法鉴定‘玉祁红芹’(‘Yuqihongqin’)的SCAR标记。结果显示:水芹6个地方品种的AOX1基因中检测到22个SNP位点和7个InDel位点;MCM5基因中检测到33个SNP位点,其中3个位于编码区且均为同义突变,还有1个位于非编码区的InDel位点。与MCM5基因相比,AOX1基因提供的信息位点更多,基于AOX1基因构建的水芹野生种和6个地方品种的ML遗传关系树的支持率相对较高;其中‘玉祁红芹’、‘苏州圆叶芹’(‘Suzhouyuanyeqin’)和‘梅南水芹’(‘Meinanshuiqin’)的遗传关系较近,而‘常熟白芹’(‘Changshubaiqin’)、‘溧阳白芹’(‘Liyangbaiqin’)和‘江阴青芹’(‘Jiangyinqingqin’)的遗传关系较近。基于ISSR-880引物扩增得到‘溧阳白芹’的特异性片段,设计的第1对SCAR引物鉴定出‘玉祁红芹’和‘溧阳白芹’2个地方品种,再利用ISSR-836引物扩增得到‘玉祁红芹’特异性片段,设计的第2对SCAR引物在‘玉祁红芹’所有单株中扩增出特异性条带,而在‘溧阳白芹’所有单株中均未出现此条带。本研究开发的两步法鉴别‘玉祁红芹’的ISSR-SCAR标记可为水芹其他地方品种的鉴定、保存和利用提供参考。