MCP-1基因对脓毒症急性肾损伤发生的作用研究

目的研究单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)基因对脓毒症急性肾损伤(AKI)发生的作用。方法选取2022年9月-2023年9月新疆维吾尔自治区人民医院重症医学科收治的50例脓毒症AKI患者作为AKI组,纳入同期50例健康受试者作为对照组。分别采集全部受试者清晨空腹静脉血5 mL,采用ELISA法测定AKI患者及健康人群血清中MCP-1的表达情况;通过原代培养肾小管上皮细胞,利用CK14和CK18抗体进行细胞免疫荧光鉴定,过表达和干扰MCP-1基因,利用CCK8细胞增殖检测试剂盒和RT-qPCR检测肾小管上皮细胞增殖情况和肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)、γ-干扰素(IFN-γ)炎性因子表达的变化。结果与对照组相比,AKI组患者外周血中和尿液中的MCP-1表达量显著升高(P均<0.05);通过细胞免疫荧光鉴定,选择上皮细胞标志物CK14和CK18,原代培养24 h,90%以上的细胞表达细胞标志物CK18,约84%的细胞表达CK14;与NC组相比,siRNA组在24、48 h细胞数量增加(P均<0.05);与MCP-1组相比,siRNA组在24、48、72 h的细胞数量增加(P均<0.05);NC组的IL-1β、IL-6、INF-γ因子的表达水平随时间推移逐渐升高,MCP-1组的IL-1β、IL-6、IL-10、INF-γ和TNF-α因子的表达水平随时间推移逐渐升高,siRNA组的IL-1β、IL-6、INF-γ因子表达水平随时间推移无明显升高趋势。结论MCP-1基因在脓毒症急性肾损伤的发病机制中可能发挥重要作用,该基因可能通过调节IL-1β等炎性细胞因子的表达来抑制肾小管上皮细胞的生长和增殖,从而参与脓毒症患者的AKI过程。

1-MCP处理对“彩虹1号”和“陆奥”苹果贮藏特性和相关基因表达水平的影响

该研究以“彩虹1号”和“陆奥”苹果为试材,研究了1-MCP(1-甲基环丙烯)处理对这两个品种贮藏期间硬度、乙烯释放速率、失重率、挥发性物质以及乙烯生物合成和细胞壁降解相关基因的表达量的影响。结果表明:与对照果实相比,1-MCP处理能够显著降低“彩虹1号”果实失重率,延缓乙烯释放高峰出现,维持果实较高硬度。对照果实乙烯峰值出现在贮藏期60 d,乙烯释放量为74.13μL/(kg·h),1-MCP处理果实乙烯峰值出现在贮藏期90 d,乙烯释放量为41.61μL/(kg·h)。“陆奥”苹果贮藏期间,1-MCP处理延缓了果实失重及乙烯释放速率。通过对相关基因的表达量分析发现,1-MCP处理的“彩虹1号”果实中乙烯合成基因MdACO、MdACS-1,细胞壁降解基因MdPG、MdXTHB表达量均明显降低,而“陆奥”果实中的细胞壁降解基因只有MdXTHB和MdEXPA8受到了抑制。综上所述,1-MCP能够明显降低“彩虹1号”果实中的乙烯释放速率,延缓了果实软化,延长其贮藏期,适合作为该品种果实的采后保鲜处理。

MCP⁃1基因⁃2518A/G多态性与糖尿病视网膜病变相关性的Meta分析

目的:系统评价MCP-1基因-2518A/G多态性与糖尿病视网膜病变(DR)的相关性。方法:计算机检索CNKI、WanFang Data、PubMed等数据库,搜索自建库至2022年3月关于MCP-1基因-2518A/G多态性与DR相关性的研究,采用Revman5.3软件进行Meta分析。结果:最终纳入7项研究。Meta分析结果显示:在等位基因、纯合子遗传模型中,MCP-1基因-2518A/G与DR发病风险无相关性[G vs.A:OR=1.09,95%CI(0.77,1.54),P=0.62;GG vs.AA:OR=1.64,95%CI(0.93,2.88),P=0.09],在杂合子、显性和隐性遗传模型中,与DR发病风险相关[GG vs.AG:OR=1.13,95%CI(1.01,1.26),P=0.03;AA+AG vs.GG:OR=0.85,95%CI(0.77,0.94),P=0.002;AA vs.GG+AG:OR=0.78,95%CI(0.67,0.90),P=0.0008];据DR严重程度,进一步对增殖性DR(PDR)和非增殖性DR(NPDR)患者进行Meta分析,结果显示:在5个基因遗传模型中,MCP-1基因-2518A/G位点多态性与PDR发病风险均无相关性[G vs.A:OR=1.06,95%CI(0.80,1.41),P=0.68;GG vs.AA:OR=1.12,95%CI(0.77,1.61),P=0.56;GG vs.AG:OR=0.88,95%CI(0.69,1.12),P=0.31;AA+AG vs.GG:OR=1.08,95%CI(0.86,1.36),P=0.50;AA vs.GG+AG:OR=0.73,95%CI(0.49,1.08),P=0.12]。结论:MCP-1基因-2518A/G多态性可能与DR发病相关,但可能不参与DR患者从NPDR发展为PDR的进程。

转人MCP和CD_(59)双基因小鼠的制备

采用显微混合注射的方法制备转人MCP(膜辅因子蛋白)和CD59(膜反应性溶解抑制物)双基因小鼠,共注射478枚受精卵,移植于21只受体,其中14只受孕,8只受孕小鼠中途流产,从6只受孕小鼠获得18只仔鼠,经检测,其中9只仔鼠单基因阳性(50％),6只仔鼠双基因阳性(33.3％)。结果表明:通过显微混合注射的方法可以获得转人MCP和CD59双基因小鼠。

外源乙烯利与1-MCP处理对桑椹中乙烯和花青素相关代谢基因表达的影响

【目的】以桑品种‘嘉陵40号’的桑椹为试验材料,探究乙烯在桑椹发育进程中的作用和乙烯相关基因的表达模式,为今后有效开发桑椹的经济价值和通过分子生物学手段调控桑椹成熟期提供理论依据。【方法】桑盛花期后21天(21DAF)和26天(26DAF),分别用100 mg·L^(-1)乙烯利喷洒桑椹表面,采摘后桑椹经0.5μL·L^(-1)乙烯抑制剂1-MCP熏蒸处理,测定其花青素和总糖含量,并提取桑椹的总RNA及合成cDNA模板,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析乙烯生物合成基因MaACO2和MaACS3,乙烯信号转导基因MaETR1,MaETR2,MaCTR1,MaEIN2和MaEIL2,以及花青素生物合成下游基因MaDFR和MaANS的转录表达。【结果】桑椹经过乙烯利处理后,花青素含量和总糖含量与对照相比都有明显增加,与花青素合成有关的基因表达也受乙烯利上调,经1-MCP熏蒸的桑椹花青素含量和总糖含量与对照相比都有所下降。在21DAF桑椹中,乙烯相关基因的表达经乙烯利处理后显著上调,而对1-MCP具有不同的响应模式,其中,MaACO2,MaACS3以及MaEIL2表达下调,MaETR1,MaCTR1和MaEIN2的表达量在各时段显著上调,MaETR2表达量在12 h无明显变化,其他时段上调。26DAF桑椹中,经1-MCP的熏蒸而下调了乙烯各基因的表达,而乙烯利的处理对各基因表达具有不同的影响,与对照相比,处理后32 h,MaACO2,MaETR1,MaETR2,MaEIN2和MaEIL2的表达上调,MaACS3和MaCTR1的表达则下调。【结论】乙烯利处理能够诱导桑椹乙烯生物合成和花青素生物合成相关基因的上调表达,对乙烯信号转导基因也有一定调控作用,且能促进桑椹花青素和总糖含量的积累,并能加快桑椹的发育进程。乙烯抑制剂1-MCP的熏蒸能抑制乙烯信号转导各元件基因的表达,阻止乙烯信号转导和传递,且抑制桑椹中花青素和总糖含量的积累。

MCP-1-2518位点基因多态性对脊柱结核易感性的影响

目的:分析趋化因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)启动子区2518基因型频率和等位基因多态性与中国湖南省汉族人群脊柱结核易感性的关系。方法:连续收录2004年12月～2012年8月我院收治的湖南汉族新发脊柱结核患者及健康志愿者,应用聚合酶链式反应(PCR)和DNA直接测序法检测两组患者MCP-1-2518位点的多态性,运用R×C卡方检验比较两组基因型分布频率的差异,计算各比值比(OR)及95%可信区间(CI)。结果:共纳入符合条件的脊柱结核患者334例,健康志愿者336例。MCP-1-2518GG、AG、AA三种基因型在病例组和对照组中的分布频率分别为37.1%、50.3%、12.6%和25.6%、54.2%、20.2%,两组组间比较有显著性差异(P<0.05),其中MCP-1-2518GG基因型的分布频率在脊柱结核人群中显著增高。MCP-1基因-2518 G/A多态位点G、A等位基因频率在病例组为62.3%和37.7%,在对照组为52.7%和47.3%,两组等位基因的分布频率存在统计学差异(P<0.05),-2518G等位基因与脊柱结核发病相关,其OR值为1.483,95%CI为1.193～1.844。结论:在湖南汉族人群中,MCP-1-2518位点GG基因型和G等位基因均可能与脊柱结核的易感性相关。

溶血尿毒综合征患儿MCP基因突变分析

目的对溶血尿毒综合征(HUS)患儿进行膜辅助蛋白(MCP)基因突变分析。方法对9例HUS患儿提取外周血MCP基因组DNA,应用聚合酶链反应(PCR)扩增MCP基因全部14个外显子及其周围的部分内含子,进行DNA序列测定及基因突变检测。50例尿检正常的南方汉族成年人为对照人群。结果9例HUS患儿未发现MCP基因突变,但2例检测到1个MCP变异(IVS9-78G>A),1例为纯合子,另1例为杂合子,50例对照人群基因测序发现同样MCP变异,表明其为MCP基因多态性,但在9例HUS患儿中的等位基因频率与50例对照人群等位基因频率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论MCP基因多态性(IVS9-78G>A)可能是本研究9例HUS患儿发病的易感因素。

广西巴马小型猪MCP-1基因克隆及序列分析

【目的】研究广西巴马小型猪单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)基因CDs区的序列特点,为建立广西巴马小型猪动脉粥样硬化模型及揭示动脉粥样硬化的发生、发展机理提供理论依据。【方法】从广西巴马小型猪动脉血管组织中扩增MCP-1基因CDs区全长序列,与人类及其他易建立动脉粥样硬化模型动物的序列进行比对分析,并预测其蛋白质信号肽位点及结构域。【结果】广西巴马小型猪MCP-1基因CDs区全长300 bp,编码99个氨基酸;与人类MCP-1基因CDs区(S71513.1)的同源性最高,为84.4%。广西巴马小型猪MCP-1蛋白的前23位氨基酸为信号肽,后76位氨基酸为成熟肽,等电点(pI)9.51,蛋白质分子量10976.04kDa,信号肽位置有一段跨膜结构;广西巴马小型猪与人类MCP-1蛋白在形成二级结构时,保守半胱氨酸参与形成二硫键的位置一致,分别在第11、12、36和52号(除信号肽片段)位上排列为Cys-Cys,且是第11号位与第36号位形成二硫键,第12号位与第52号位形成二硫键。【结论】以广西巴马小型猪构建动脉粥样硬化模型时,MCP-1基因表达量可作为判断动脉血管疾病的一个辅助指标。

淋巴囊肿病毒mcp基因变异特征及其基因型分析

淋巴囊肿病毒是引起多种海、淡水鱼淋巴囊肿病的病原,且不同淋巴囊肿病毒分离株间存在一定的差异。本文对25株淋巴囊肿病毒分离株mcp基因的变异特征进行分析,结果表明:分离自同一宿主的淋巴囊肿病毒mcp基因序列并非完全一致,有些同宿主分离株间存在着较少的变异,其MCP蛋白序列间的变异位点多位于不规则结构域、属于非蛋白相互作用位点;分属不同基因型淋巴囊肿病毒分离株MCP蛋白序列间的变异位点也多位于不规则结构域,变异位点为蛋白相互作用位点的比率仅占21.98%。金头鲷淋巴囊肿病毒分离株LCDV-sa是一种新的淋巴囊肿病毒基因型,此25株淋巴囊肿病毒可分为7个基因型。对淋巴囊肿病毒变异的研究,可加深对其感染机制的认识,有助于了解其传播途径,可为淋巴囊肿病的防控提供重要的理论依据。

大鲵虹彩病毒贵州分离株MCP基因的克隆与原核表达

根据Gen Bank中大鲵虹彩病毒主衣壳蛋白MCP(major capsid protein,MCP)基因序列(序列号:KF512820),设计一对特异性引物,以大鲵虹彩病毒贵州分离株基因组DNA为模板,PCR扩增大鲵虹彩病毒MCP基因并测序,与Gen Bank中大鲵虹彩病毒MCP基因进行比对,然后将其亚克隆到原核表达载体p ET-32a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后进行Western blot分析。结果显示:PCR扩增出长度为1 392 bp的片段,与Gen Bank中大鲵虹彩病毒MCP基因核苷酸序列相似性为99.7%~99.9%,SDSPAGE电泳显示该重组蛋白的相对分子质量约为67×103。免疫原性检测结果表明,该重组蛋白可与兔抗大鲵虹彩病毒阳性血清特异性反应,具有免疫原性。

脑梗死患者MCP-1启动子区A-2518G基因多态性的研究

目的探讨MCP—1启动子区A-2518G基因多态性与血清中MCP-1水平及哈尔滨地区汉族人脑梗死的关系。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR—RFLP)方法,检测113例脑梗死患者、98例健康对照者MCP-1启动子区A-2518G基因的多态性。应用ELISA方法,检测39例脑梗死患者、38例健康对照者血清中 MCP-1水平。结果各基因型频率和等位基因频率在正常人群及脑梗死患者中无显著性差异(P>0．05)。GG型 GA型的人群血清中MCP-1表达水平较AA型者高(P<0．05)。结论 MCP-1启动子区A-2518G基因多态性可以影响血清MCP-1水平,但它与哈尔滨地区汉族人脑梗死不相关。

趋化因子MCP-3基因和B7基因共转染诱导抗大肠癌主动免疫

目的:探讨趋化因子MCP-3(monocyte chemotactic protein-3)和B7基因共转染诱导抗大肠癌主动免疫的可能性。方法:用脂质体将小鼠MCP-3和B7(B7.1)基因导入小鼠大肠癌CMT93细胞,G418筛选抗性克隆,RT-PCR检测B7和MCP-3的表达,趋化实验检测MCP-3的功能。体内实验观察基因修饰瘤细胞(CMT93/B7+MCP-3)的成瘤性、免疫小鼠后所诱导的针对CMT93的免疫保护及其作为疫苗治疗已形成肿瘤的疗效。结果:RT-PCR检测发现CMT93/B7+MCP-3瘤细胞有B7和MCP-3的表达,而且所表达的MCP-3有良好的趋化活性。CMT93/B7+MCP-3的成瘤性显著下降(P<0.01)。经CMT93/B7+MCP-3免疫的小鼠获得对CMT93的免疫保护(P<0.05)。作为疫苗CMT93/B7+MCP-3能抑制接种早期肿瘤的生长。结论:共转染MCP-3和B7基因能有效诱导抗大肠癌主动免疫,共转染的瘤细胞作为疫苗治疗已形成的肿瘤有一定的疗效。

MCP-1基因启动子区-2518位G/A多态性与瘢痕疙瘩的相关性分析

背景与目的：探讨单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1）基因启动子区-2518G/A多态性与瘢痕疙瘩发病风险的关系。材料与方法：以92例瘢痕疙瘩患者和180例性别、年龄匹配的正常人为对象进行病例-对照研究,采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性（polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP）技术结合DNA测序对MCP-1基因启动子区-2518G/A多态性进行分析。结果：MCP-1基因-2518G/A等位基因和基因型频率在瘢痕疙瘩组和正常对照组间的分布无显著性差异（P值分别为0.419和0.415）。瘢痕疙瘩组分层后显示,多发性瘢痕疙瘩患者中A等位基因携带者频率为83.8%,明显高于皮损单发者（63.6%）（P=0.035,OR=2.952,95%CI：1.051~8.290）。结论：MCP-1基因-2518位A等位基因的存在可能与多发性瘢痕疙瘩的形成和发展有一定的相关性。

MCP-1基因多态性与结核性脓胸发病风险的关系

目的探讨中国河北地区MCP-1(单核细胞趋化因子蛋白-1)基因-2518A/G和-362G/C单核苷酸多态性(SNP)与结核性脓胸的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对结核性脓胸患者500例和健康对照组500例进行MCP-1基因-2518A/G和-362G/C SNPs检测。结果与MCP-1-2518A/A基因型相比,携带A/G和G/G基因型均可增加结核性脓胸发病风险(OR=2.254和OR=8.728)。进行分层分析发现,无卡介苗(BCG)接种史、体质量指数(BMI)<18.5均增加结核性脓胸发病风险(OR=3.309和OR=2.767)。MCP-1-362G/C SNP无统计学意义。结论 (1)MCP-1基因-2518A/G SNP可能与结核性脓胸的发病风险有关。(2)-362G/C SNP可能与结核性脓胸无关。

转染趋化因子MCP-3基因诱导抗小鼠大肠癌主动免疫

背景与目的:趋化因子对于免疫细胞在肿瘤组织中的浸润起重要作用,转染趋化因子基因在许多类型的肿瘤中诱导了抗肿瘤免疫反应,本研究的目的是通过将趋化因子单核细胞趋化蛋白-3(monocytechemotacticprotein-3,MCP-3)基因转染小鼠大肠癌CMT93瘤细胞,探讨MCP-3用于诱导抗大肠癌主动免疫的可行性。方法:用脂质体将小鼠MCP-3基因导入小鼠大肠癌细胞CMT93,G418筛选抗性克隆,RT-PCR检测MCP-3的表达,趋化实验检测MCP-3的活性,体内实验观察野生型及MCP-3基因修饰瘤细胞的致瘤性,组织病理学检测肿瘤中免疫细胞的浸润及肿瘤的转移。结果:RT-PCR检测发现G418筛选得到的转染MCP-3的抗性克隆(CMT93/MCP3)表达MCP-3,而野生型CMT93不表达MCP-3。趋化实验显示CMT93/MCP-3的培养上清具有良好的趋化活性,趋化指数达5.57(P<0.05),对照组培养上清均无趋化活性。体内成瘤实验显示:与野生型瘤细胞相比,CMT93/MCP-3的成瘤率没有显著性下降,但源于CMT93/MCP-3的肿瘤生长速度与对照组相比显著减慢(P<0.05)。在CMT93/MCP-3所形成肿瘤中有明显的免疫细胞浸润,对照组肿瘤中免疫细胞的浸润较少。接种CMT93/MCP-3瘤细胞的小鼠,肿瘤的转移受到了显著性的抑制,转移率为0%(0/5),与对照组CMT93(100%,4/4)和CMT93/mock(80%,4/5)相比均有显著?

趋化因子MCP-3协同B7诱导小鼠抗宫颈癌的主动免疫效果

目的 :探讨趋化因子MCP 3能否增强B7基因诱导小鼠抗宫颈癌主动免疫的效果。方法 :实验组 :将pCMV/MCP 3以基因药物的方式肌注 615小鼠 ,同时用B7+U14细胞疫苗在同一部位免疫小鼠 ,再将野生型U14移植入已免疫的小鼠。对照组A :用B7+U14细胞疫苗 +生理盐水同时免疫 615系小鼠 ;对照组B :用pCMV/MCP 3 +野生型U14免疫小鼠 ;其它处理同治疗组。观察 3组小鼠的成瘤情况、生存期。用以上 3种方案分别处理小鼠 ,2周后分别取脾T淋巴细胞用MTT法体外检测其对U14的杀伤率。结果 :经方差分析比较 3组在移植U14后不同时程瘤体平均体积有显著性差异 (F =91.86,P <0 .0 0 1)。3组平均生存期分别为 10 0 ,63 ,3 7d ,经Kaplan Meier曲线比较 ,差异具显著性 (P <0 .0 1)。体外检测经MCP 3和B7+U14疫苗处理的小鼠 ,其T淋巴细胞在不同效靶比对U14的杀伤效率均明显高于经MCP 3和U14疫苗处理者 (F =4 0 62 ,P <0 .0 0 1)。结论 :趋化因子MPC 3能增强B7基因修饰的U14细胞疫苗的抗肿瘤效果 。

金雀异黄素对MCP-1诱导人脐静脉血管平滑肌细胞增殖及c-fos mRNA转录的影响

目的研究金雀异黄素对单核细胞趋化蛋白1(MCP1)诱导的人脐静脉血管平滑肌细胞(hUVSMC)增殖及cfosmRNA转录的影响。方法用不同浓度(10,30,90μmol·L-1)金雀异黄素预作用hUVSMC2h后加入终浓度为10μg·L-1的MCP1作用30min;采用逆转录聚合酶链反应检测细胞中cfos基因的表达;作用48h,用细胞计数检测细胞增殖的情况。结果金雀异黄素在低剂量(10μmol·L-1)即能抑制平滑肌细胞的增殖(P<0.05),在高剂量(30,90μmol·L-1)才能抑制细胞内cfosmRNA的表达(P<0.01,P<0.01)。结论金雀异黄素能抑制MCP1诱导的hUVSMC增殖,其机制可能与降低cfos的表达有关。

MCP-1基因-2518A/G与GPx-1基因Pro198Leu多态性的交互作用与非酒精性脂肪性肝病的关系

【目的】探讨单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)基因-2518A/G与谷胱甘肽过氧化物酶-1(GPx-1)基因Pro198Leu多态性的交互作用及其与非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的关系。【方法】采用病例-对照研究的方法,以NAFL、NASH、NAFHC患者及健康对照者各600例的外周血白细胞为样本,利用聚合酶链反应(PCR)技术分析了MCP-1基因-2518A/G和GPx-1基因Pro198Leu多态性。【结果】-2518A/G(GG)基因型和Pro198Leu(LL)基因型频率分布分别为49.67%和49.83%(NAFL组)、63.50%和63.50%(NASH组)、75.17%和75.50%(NAFHC组)及23.50%和23.33%(对照组),上述基因型频率在各病例组与对照组之间有显著差异(P<0.01)。-2518A/G(GG)基因型患NAFLD的风险显著增加(ORNAFL=3.21;ORNASH=5.66;ORNAFHC=9.85)。Pro198Leu(LL)基因型者患NAFLD的风险也显著增加(ORNAFL=3.26;ORNASH=5.72;ORNAFHC=10.13)。基因突变的协同分析发现-2518A/G(GG)/Pro198Leu(LL)基因型者在NAFL、NASH、NAFHC组和对照组中的分布频率分别为39.17%、53.17%、65.33%和12.17%,经χ2检验有统计学差异(P<0.01)。-2518A/G(GG)/Pro198Leu(LL)基因型者患NAFLD的风险显著增加(ORNAFL=5.30;ORNASH=10.91;ORNAFHC=23.92)。-2518A/G(GG)和Pro198Leu(LL)基因型有交互作用(γ1 NAFL=3.50,γ2 NAFL=3.37;γ1 NASH=4.79,γ2 NASH=4.72;γ1 NAFHC=6.19,γ2 NAFHC=5.90)。【结论】-2518A/G(GG和)Pro198Leu(LL)基因型均是NAFLD的易患因素,基因多态性的交互作用增加了NAFLD的发病风险。

单核细胞趋化蛋白及MCP-1基因在肾细胞癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨肾细胞癌(RCC)组织及癌旁组织中单核细胞趋化蛋白(MCP-1)基因的表达与肾细胞癌发病机制的相关性。方法:RCC患者30例,男20例,女10例,分别取血液和肾癌组织标本。对照组30例为非肿瘤患者,男20例,女10例,取血液标本,ELISA方法测定血浆中MCP-1定量。癌旁组织标本为对照组,免疫组化方法检测MCP-1表达情况。实时RT-PCR定量检测MCP-1表达。分析RCC临床特点与MCP-1表达的关系。结果:肾癌组患者血浆中MCP-1(203.5±155.8)pg/ml较非肿瘤组(92.1±35.2)pg/ml高(P<0.05)。免疫组化显示肾癌组织中MCP-1表达阳性率为73.3%(22/30),癌旁组织中的表达阳性率为40.0%(12/30),肾癌组织中MCP-1表达阳性率明显高于癌旁,差异有统计学意义(P<0.01)。同时发现肾癌组织中MCP-1的阳性强度(++)-(+++)也明显高于癌旁组织(+)。肾癌组织MCP-1总RNA和mRNA水平与癌旁组织比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:MCP-1基因表达上调可能在肾细胞癌的发生及转移中发挥重要作用。

正义、反义MCP-1基因逆转录病毒载体重组质粒的构建和包装

为构建含单核细胞趋化蛋白-1(Monocytechemoattractantprotein-1,MCP-1)基因的重组逆转录病毒pLXSN/MCP-1质粒.用RT-PCR技术从大鼠系膜细胞中扩增出MCP-1全长DNA,将其与Pgem-TE连接,用限制性内切酶EcoRⅠ对pTE-MCP-1和逆转录病毒质粒pLXSN分别进行酶切.在T4连接酶的作用下,构建重组逆转录病毒质粒pLXSN/MCP-1.经BglⅡ,XhoⅠ酶切鉴定MCP-1在质粒中的方向,用脂质体介导的方法把重组质粒DNA转染进入包装细胞PA317中,经过G418筛选出抗性克隆.通过NIH3T3细胞测定病毒液的病毒滴度.结果证实经过RT-PCR技术从大鼠系膜细胞中扩增出MCP-1全长DNA与所需的大小一致.重组质粒经酶切分析与预期的结果一致.G418筛选出抗性克隆,能稳定合成并分泌重组逆转录病毒颗粒.NIH3T3细4胞测定病毒滴度为17×10cfu/mL.