基于西门子840D测头对刀技术研究

在磁流变抛光设备中,自动对刀测量是建立工件坐标系、工件位姿测量及缎带标定等功能的必要前提。基于西门子840D数控系统,采用雷尼绍MCP测头,设计了对刀测量方案和对刀功能模块,较为经济地实现了磁流变抛光工艺对刀测量高定位精度及高安全可靠性的应用需求。该对刀技术方案可应用于普通数控机床自动化改造中实现自动对刀功能。

基于华中数控系统HNC-818B/M的测头对刀技术研究

在磁流变抛光工艺装备中,自动对刀测量是完成确定性抛光工艺的必要前提,以实现建立工件坐标系、测量工件位姿及标定缎带。基于国产数控系统华中HNC-818B/M,采用雷尼绍MCP测头,设计了对刀测量方案和对刀功能模块,在国产数控机床上验证了对刀测量方案的可行性,实现重复对刀测量精度优于2μm,其高安全可靠性满足磁流变抛光的应用需求。

金鱼造血器官坏死病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

金鱼造血器官坏死病毒(Goldfish haematopoietic necrosis virus,GFHNV)是一种可感染金鱼等鲤科鱼类,并可导致其死亡的疱疹病毒。为了快速检测病原,本研究根据GFHNV的主要衣壳蛋白(Major captor protein,MCP)序列中的一段保守基因序列,设计引物和Taq Man探针,建立了GFHNV特异性的实时荧光定量PCR检测方法 ;并利用PCR反应扩增出的MCP基因,制备了p UC-GFHNV重组质粒作为阳性对照。经试验,该方法检测限最低可达10个拷贝数的目的基因,而且与锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus,KHV)、甲鱼虹彩病毒(Softshell turtle iridovirus,STIV)、流行性造血器官坏死病毒(Epizootic haematopoietic necrosis,EHNV)、斑点叉尾鮰病毒(Channel catfish virus,CCV)以及白斑综合症病毒(White spot syndrome virus,WSSV)等5种水生动物病毒无交叉反应。该方法具有简便、快速、敏感、特异等优点,为该病的诊断与病原检测提供了一个重要手段。

一种真鲷虹彩病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

真鲷虹彩病毒一直被世界动物卫生组织列入必报疫病病原目录,该病毒与传染性脾肾坏死病毒在基因序列上没有区别。为了快速检测病原,本文根据传染性脾肾坏死病毒主要衣壳蛋白序列中一段基因保守区设计引物和TaqMan探针,建立了真鲷虹彩病毒特异性实时荧光定量PCR检测方法,并利用PCR反应扩增出的衣壳蛋白基因制备了pGEM-T/真鲷虹彩病毒重组质粒作为标准阳性对照。经试验,反应在模板量102-106拷贝浓度范围内有较好的线性关系,检测限最低可达100拷贝数,而且与流行性造血器官坏死病毒、甲鱼虹彩病毒等6种水生动物病毒无交叉反应。结果证明该方法具有简便、快速、敏感、特异等特点,它的建立为该病诊断与病原检测提供了一个重要手段。

蛙病毒三重荧光PCR检测方法的建立

根据GenBank中收录的蛙病毒属虹彩病毒主要衣壳蛋白（MCP）基因序列设计了一对通用引物和3条Taqman探针，通过PCR反应体系的优化以及反应的特异性、灵敏性和干扰性试验，建立了一种可检测蛙病毒属大部分成员并能进行初步分类的三重荧光PCR方法。通过鉴定分析将蛙病毒属成员分为三类，其中第一类包括蛙病毒3型（FV3）、饰纹汀蛙虹彩病毒（BIV）、流行性造血器官坏死病毒（EHNV）、欧洲鲴鱼病毒（ECV）、欧鲶病毒（ESV）、中华鳖虹彩病毒（STIV）、大鲵虹彩病毒（ADIV）、沼泽绿牛蛙虹彩病毒（RGV）和虎纹蛙病毒（TFV），第二类是Santee．Cooper蛙病毒（SCRV），由大口黑鲈虹彩病毒（LMBV）、裂唇鱼病毒（DFV）和孔雀鱼病毒（GV6）组成，而新加坡石斑鱼虹彩病毒（SGIV）则单独作为第三类。进一步分析发现各病毒的最低检测量均达到10^2拷贝，表明该方法除了具有良好的特异性和稳定性之外还具有高度灵敏性。建立的该蛙病毒三重荧光PCR方法可为蛙病毒的快速诊断和分子流行病学调查提供一种有效的技术手段。

虾虹彩病毒TaqMan-MGB探针荧光定量PCR检测方法的建立

【目的】建立检测虾虹彩病毒(SIV)的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR,为实现虾虹彩病毒病(SIVD)快速诊断及疫情监测提供一种新的技术手段。【方法】根据SIV的MCP基因保守序列设计特异性引物和TaqMan-MGB探针,将目的片段克隆至pMD18-T载体制备重组质粒pMD18-T-MCPSIV;优化反应体系及扩增条件后建立检测SIV的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR,以pMD18-T-MCPSIV为标准品绘制标准曲线,并通过特异性、敏感性、重复性试验及临床应用验证其实用性。【结果】制备的重组质粒(pMD18-T-MCPSIV)DNA稳定性好,满足作为标准品的要求;标准品起始模板范围为2.0×101~2.0×109拷贝/反应时,建立的标准曲线具有良好线性关系。优化后的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR灵敏度高,对重组质粒的检测灵敏度可达20拷贝/反应,对虾组织SIV的检测灵敏度约10拷贝/mg,其临床检测的敏感性与套式PCR相当;与虾类其他常见病原无交叉反应,组内和组间变异系数分别为0.27%~0.54%和0.61%~0.95%,且扩增与产物分析同步完成,整个检测过程仅需1 h左右。采用建立的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR与目前农业农村部推荐的套式PCR同时对276份临床虾样品进行SIV检测,结果显示,两种方法的大部分检测结果一致,符合率为98.6%,但检测低拷贝数样品时前者具有更高的灵敏度。2018和2019年广西虾样品的SIV阳性检出率分别为19.7%和7.5%,且养殖凡纳滨对虾、罗氏沼虾和红螯螯虾均检测到SIV阳性。【结论】基于SIV MCP基因保守序列建立的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR检测方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好、定量范围宽及简单快速等优点,适用于虾类样品SIV检测,可为SIVD快速诊断及疫情监测提供一种新的技术手段。