抗感染免疫中CD14/TLR-MD-2复合体的信号转导作用

TOLL样受体(TOLL-likereceptor,TLR)是近年发现的一族天然受体,在机体内其主要成员可与MD-2蛋白及CD14结合形成CD14/TLR-MD-2复合体,特异性识别多种病原微生物,通过偶联信号转导途径,激活机体的免疫细胞,产生一系列的炎症反应,在抗感染免疫中发挥重要作用。

髓样分化蛋白-2在识别和转导内毒素信号中的作用

脂多糖(LPS)通过TLR4介导细胞炎症反应.研究表明,髓样分化蛋白-2(MD-2)通过与TLR4形成复合物参与LPS诱导的细胞信号过程.TLR4/MD-2复合物中的MD-2结合LPS后,引起TLR4低聚化,进而激发下游信号.MD-2合成后,大部分在内质网/高尔基体和TLR4结合,然后以TLR4/MD-2复合物的形式在细胞表面表达.这既能调节TLR4的胞内分布,又能辅助TLR4识别LPS.还有一部分MD-2释放到血浆中,形成可溶性的MD-2(sMD-2).sMD-2在CD14参与下,能结合血浆中的LPS,形成LPS-sMD-2复合物从而辅助只表达TLR4而不表达MD-2的细胞识别LPS,但过度表达的sMD-2又能抑制LPS信号.MD-2在TLR4介导的内毒素识别和信号转导过程中发挥了重要的调控作用.

髓样分化蛋白-2在内毒素与内皮细胞结合中的作用

目的 探讨髓样分化蛋白 2 (myeloiddifferentiationprotein 2 ,MD 2 )在人内皮细胞中的表达及其在内毒素 (LPS)与内皮细胞结合中的作用。方法 分离、培养人脐静脉内皮细胞 ,RT PCR和Westernblot方法检测内皮细胞MD 2的表达以及LPS对其表达的影响 ;流式细胞仪检测在有或无血清时LPS与内皮细胞的结合以及TLR4、MD 2抗体对其结合的影响。结果 内皮细胞有MD 2mRNA及相关蛋白的表达 ,LPS能明显上调其表达水平 ,并呈一定的时间和剂量依赖性 ;血清能明显促进不同剂量LPS与HUVEC的结合 ,尤其是小剂量LPS ;TLR4、MD 2单克隆抗体分别能阻断LPS与内皮细胞的结合 ,且阻断程度与抗体剂量呈依赖关系。结论 TLR4、MD 2是内皮细胞上与LPS结合的主要受体 ,MD 2在LPS与内皮细胞的结合中起着重要的作用。

髓样分化蛋白2在内毒素/脂多糖激活人脐静脉内皮细胞中作用的实验研究

目的 探讨髓样分化蛋白2(MD- 2)在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中的表达及其在内毒素/脂多糖(LPS)激活HUVEC中的作用。 方法 分离、培养HUVEC,采用逆转录聚合酶链反应(RT- PCR)和蛋白免疫印迹(Westernblot)方法,检测LPS刺激前后HUVEC的MD- 2mRNA及其蛋白表达水平,用目的条带吸光度(A)值表示;HUVEC转染0. 5、1. 0、2. 0μgMD 2突变质粒(MD 2C95Y)及2. 0μgpEF BOS空载体质粒、2. 0μgMD 2质粒后, 观察LPS刺激对HUVEC核因子(NF)κB活性和其分泌白细胞介素(IL)8能力的影响, NF κB的测定值用A450nm表示。 结果 LPS刺激前, HU VECMD 2mRNA及蛋白有表达, LPS能明显上调其表达水平, 并呈一定的时间和剂量依赖性。LPS刺激前MD- 2蛋白A值为25 196±1 723,明显低于0. 01mg/LLPS刺激6h的A值(58 817±3 241,P<0. 01);转染MD 2C95Y能明显抑制LPS对HUVECNF- κB的激活和IL 8的分泌。 结论 M-D 2在LPS激活/损伤HUVEC效应中具有重要的地位。

苦参素对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠TLR4/MD-2表达的影响

目的:观察苦参素对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠脊髓中Toll样受体-4(TLR4)和血清中髓样分化蛋白-2(MD-2)表达的影响,探讨苦参素对EAE大鼠的防治机制。方法:用豚鼠全脊髓匀浆和完全弗氏佐剂制成的抗原乳剂复制EAE模型,将50只大鼠随机分为正常组、模型组、苦参素高、中、低剂量组(250、200、150 mg/kg),连续给药16天,同期模型组和正常组腹腔注射等量生理盐水,观察记录大鼠体重变化,神经功能学评分,苏木素-伊红(HE)和变色酸2R-亮绿(C-2R-BG)染色观察病理改变、RT-PCR法检测脊髓中TLR4的表达、ELISA法测定EAE大鼠血清中MD-2含量的变化。结果:苦参素起效剂量为41.67mg/kg,半数致死量为353.5mg/kg,苦参素150、200、250mg/kg能延迟大鼠EAE的发病时间,明显降低EAE大鼠的神经功能学评分,减轻EAE大鼠中枢神经系统炎症浸润和髓鞘脱失,下调脊髓中TLR4的表达,降低血清中MD-2的含量,且高中低三剂量组间的差异有统计学意义。结论:苦参素对EAE大鼠有防治作用,其作用机制可能与下调大鼠脊髓中TLR4和血清中和MD-2的表达有关。