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维生素E琥珀酸酯诱导MDA-MB-435乳腺癌细胞的凋亡 被引量:5
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作者 张伟 徐昕昀 +3 位作者 张军初 朱大乔 张玲珍 王强 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期318-321,共4页
目的:检测维生素E琥珀酸酯(vitaminEsuccinate,VES)对MDAMB435乳腺癌细胞增殖抑制和凋亡诱导作用并分析凋亡诱导分子Fas表达的变化。方法:以VES刺激人乳腺癌细胞MDAMB435(雌激素受体阴性)12、24和48h,VES浓度为5、10和20μg/mL,以MTT法... 目的:检测维生素E琥珀酸酯(vitaminEsuccinate,VES)对MDAMB435乳腺癌细胞增殖抑制和凋亡诱导作用并分析凋亡诱导分子Fas表达的变化。方法:以VES刺激人乳腺癌细胞MDAMB435(雌激素受体阴性)12、24和48h,VES浓度为5、10和20μg/mL,以MTT法测定对细胞增殖的抑制作用,以流式细胞仪分析细胞周期和细胞表面Fas表达,TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡指数变化,Westernblot法检测VES作用后Fas蛋白水平变化。结果:VES对MDAMB435乳腺癌细胞增殖具有显著的抑制作用并表现为时间和剂量依赖关系。流式细胞仪分析细胞凋亡,MDAMB435细胞的自然凋亡率为1.5%,5、10和20μg/mLVES分别作用48h后凋亡率升高至13.1%、20.2%和46.5%。TUNEL法检测VES作用后乳腺癌细胞凋亡指数由1.1±0.4升高至10.8±1.0、30.4±2.7和51.4±4.7,细胞Fas蛋白水平分别升高1.3、1.9和4.3倍,细胞表面Fas平均荧光强度由46.29升高至59.66、84.54和103.41。结论:VES对MDAMB435乳腺癌细胞具有显著的增殖抑制作用,并诱导细胞的凋亡,其机制与细胞表面Fas表达上调有关。 展开更多
关键词 维生素E 琥珀酸酯 乳腺肿瘤 细胞凋亡 Fas蛋白质 mda-mb-435细胞
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钙磷酸蛋白C对乳癌细胞MDA-MB-435S凋亡的影响 被引量:2
2
作者 崔静 千新来 +6 位作者 李永真 冶亚平 李新强 贺国洋 任峰 朱慧芳 韩芳毅 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2009年第4期731-735,共5页
目的:研究钙磷酸蛋白C对乳癌细胞MDA-MB-435S凋亡的影响及相关机制。方法:采用倒置显微镜、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术等方法观察钙磷酸蛋白C处理前后MDA-MB-435S细胞形态、基因组DNA断裂和凋亡细胞数的变化;采用RT-PCR检测钙磷酸蛋白... 目的:研究钙磷酸蛋白C对乳癌细胞MDA-MB-435S凋亡的影响及相关机制。方法:采用倒置显微镜、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术等方法观察钙磷酸蛋白C处理前后MDA-MB-435S细胞形态、基因组DNA断裂和凋亡细胞数的变化;采用RT-PCR检测钙磷酸蛋白C处理前后MDA-MB-435S细胞凋亡相关基因bcl-XL、bcl-2、IAP-1、bax及Smac mRNA表达的变化;采用Western blotting法测定Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果:与MDA-MB-435S亲本细胞(对照组)相比,钙磷酸蛋白C处理后的MDA-MB-435S细胞(实验组)出现凋亡形态学特征(如胞膜发泡、染色质凝集、凋亡小体形成等)改变,显示特征性的DNA"梯状"断裂变化,凋亡细胞数明显增多。RT-PCR和Western blotting结果显示:与对照组相比,实验组细胞中促凋亡基因bax和Smac mRNA表达上调,抗凋亡基因bcl-2mRNA表达下调,但抗凋亡基因bcl-XL和IAP-1mRNA表达没有明显变化;实验组Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调。结论:钙磷酸蛋白C可诱导MDA-MB-435S凋亡,该作用可能与上调bax和Smac基因表达及下调bcl-2基因表达有关。 展开更多
关键词 钙磷酸蛋白C 蛋白激酶C 乳癌 细胞凋亡 mda-mb-435S
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粉防己碱对人乳腺癌细胞MDA-MB-435S的作用 被引量:4
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作者 李桃花 裴晓华 《世界中西医结合杂志》 2015年第7期934-936,958,共4页
目的探讨粉防己碱(Tet)对雌激素受体(ER)阴性人乳腺癌MDA-MB-435S细胞的作用。方法 MTT方法检测Tet对MDA-MB-435S细胞体外生长的影响。用碘化丙啶单染流式细胞术测定法检测Tet对MDA-MB-435S细胞周期的影响。结果 Tet对MDA-MB-435S细胞... 目的探讨粉防己碱(Tet)对雌激素受体(ER)阴性人乳腺癌MDA-MB-435S细胞的作用。方法 MTT方法检测Tet对MDA-MB-435S细胞体外生长的影响。用碘化丙啶单染流式细胞术测定法检测Tet对MDA-MB-435S细胞周期的影响。结果 Tet对MDA-MB-435S细胞生长的抑制作用随着Tet浓度的增加、时间的延长而增大,Tet剂量与时间之间存在交互作用(P<0.01)。Tet作用于MDA-MB-435S细胞24 h后,G0/G1期细胞比例均显著增多,随Tet浓度增加,G0/G1期细胞比例增多;S期、G2M期细胞比例均明显降低,并且随Tet浓度增加,S期、G2M期细胞比例降低。结论 Tet对雌激素受体阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-435S增殖有明显抑制作用,且存在浓度和时间依赖性。Tet阻滞MDA-MB-435S细胞于G0/G1期,降低S期比例,抑制DNA合成是其抑制乳腺癌细胞生长的机制之一。 展开更多
关键词 粉防己碱 乳腺癌 周期 mda-mb-435S
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下调TSG101对乳腺癌细胞系MDA-MB-435S的影响
4
作者 张莹 李春艳 +2 位作者 张四洋 崔泽实 宋敏 《现代肿瘤医学》 CAS 2014年第7期1519-1522,共4页
目的:研究肿瘤易感基因101(tumor susceptibility gene 101,TSG101)的下调对人乳腺癌细胞系MDA-MB-435S细胞的影响。方法:应用脂质体法将靶向TSG101的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染入乳腺癌细胞系MDA-MB-435S细胞中。分... 目的:研究肿瘤易感基因101(tumor susceptibility gene 101,TSG101)的下调对人乳腺癌细胞系MDA-MB-435S细胞的影响。方法:应用脂质体法将靶向TSG101的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染入乳腺癌细胞系MDA-MB-435S细胞中。分别使用MTT法、流式细胞仪检测siRNA干扰后MDA-MB-435S细胞增殖能力、细胞周期的变化。结果:MTT结果显示,TSG101 siRNA转染后的MDA-MB-435S细胞与对照组相比,增殖能力减弱。细胞周期结果显示,TSG101 siRNA转染后的MDA-MB-435S细胞周期与对照组相比,G0/G1期比例增多,S期比例减少,细胞周期阻滞于G1/S期。结论:TSG101的下调能够抑制乳腺癌细胞系MDA-MB-435S细胞的增殖,并导致细胞周期阻滞。TSG101可能参与乳腺癌的发生、发展过程。 展开更多
关键词 TSG101 乳腺癌细胞 mda-mb-435S 肿瘤易感基因 小干扰
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Cyclin D1 表达与雌激素受体阴性乳癌细胞株MDA-MB-435s凋亡的研究
5
作者 刘大川 姚榛祥 +1 位作者 李非 孙家邦 《中国普通外科杂志》 CAS CSCD 2002年第6期353-356,共4页
目的 探讨雌激素受体阴性乳癌细胞中CyclinD1与细胞凋亡之间的关系。 方法 通过 1,2 5 (OH ) 2 D3诱发雌激素受体阴性乳癌细胞株MDA MB 43 5s凋亡 ;采用MTT法检测细胞增殖情况 ;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率 ;TUNEL法检测细胞凋亡... 目的 探讨雌激素受体阴性乳癌细胞中CyclinD1与细胞凋亡之间的关系。 方法 通过 1,2 5 (OH ) 2 D3诱发雌激素受体阴性乳癌细胞株MDA MB 43 5s凋亡 ;采用MTT法检测细胞增殖情况 ;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率 ;TUNEL法检测细胞凋亡数 ;免疫组化法检测CyclinD1阳性表达百分率 ,并进行相关性分析。结果 在 10 - 8mol/L的 1,2 5 (OH ) 2 D3诱发MDA MB 43 5s凋亡过程中 ,细胞周期被抑制在G0 /G1 期 ,癌细胞凋亡率与CyclinD1的阳性表达呈负相关趋势。 结论 CyclinD 1的检测 ,可直接反映雌激素受体阴性乳癌细胞株用药后的细胞凋亡情况 ,可为临床评价雌激素受体阴性乳癌的治疗效果提供新的指标。 展开更多
关键词 CYCLIN D1 雌激素受体阴性 乳癌 乳癌朱mda-mb-435s 细胞凋亡 MTT法
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反义人DNMT1基因对乳腺癌细胞MDA-MB-435s增殖和细胞周期的影响
6
作者 孙荣斌 鲁雅洁 魏钦俊 《山西医科大学学报》 CAS 2010年第3期205-209,240,共6页
目的构建表达人DNMT1基因(DNA methyltransferase 1,DNMT1)反义RNA的真核表达质粒,观察其对乳腺癌细胞MDA-MB-435s增殖的影响。方法应用DNA重组技术,将人DNMT1基因的cDNA片段克隆至pcDNA3.1(-)载体中,构建DNMT1反义RNA真核表达质粒,测... 目的构建表达人DNMT1基因(DNA methyltransferase 1,DNMT1)反义RNA的真核表达质粒,观察其对乳腺癌细胞MDA-MB-435s增殖的影响。方法应用DNA重组技术,将人DNMT1基因的cDNA片段克隆至pcDNA3.1(-)载体中,构建DNMT1反义RNA真核表达质粒,测序验证,将其转染入人乳腺癌细胞系中,利用荧光定量PCR法检测转染前后细胞DN-MT1基因mRNA表达水平的变化;Western blot检测转染后DNMT1蛋白表达变化;应用MTT法检测细胞生长状况,绘制细胞生长曲线;流式细胞术分析细胞周期的变化。结果成功构建出能够表达DNMT1反义RNA的真核表达质粒。转染该质粒后,与未转染组和转染正义质粒组相比,MDA-MB-435s细胞中DNMT1基因mRNA和DNMT1蛋白表达量均显著下降;细胞生长变慢;细胞周期分析可见S期明显减少,而G1/G0期细胞显著增加。结论反义DNMT1能够特异性下调该基因的表达,并抑制乳腺癌细胞的增殖,为乳腺癌基因治疗提供了新的靶标。 展开更多
关键词 DNMT1基因 反义RNA 乳腺癌 mda-mb-435S
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miR-101增强多柔比星对乳腺癌细胞株MDA-MB-435的杀伤活性
7
作者 张根花 张桢 《浙江实用医学》 2016年第2期79-81,90,共4页
目的探讨microRNA-101(mi R-101)增强多柔比星对乳腺癌细胞的杀伤活性及机制。方法用荧光定量PCR方法检测人正常乳腺上皮细胞系MCF-10A及乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231和MDA-MB-435miR-101的表达水平。MTT法检测mi R-101对多柔比星体... 目的探讨microRNA-101(mi R-101)增强多柔比星对乳腺癌细胞的杀伤活性及机制。方法用荧光定量PCR方法检测人正常乳腺上皮细胞系MCF-10A及乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231和MDA-MB-435miR-101的表达水平。MTT法检测mi R-101对多柔比星体外杀伤MDA-MB-435能力的影响。利用生物信息学及Western blot方法验证mi R-101是否调节MDA-MB-435细胞Mcl-1的表达。构建Mcl-1真核表达载体,MTT法检测Mcl-1表达载体转染对mi R-101联合多柔比星杀伤MDA-MB-435细胞疗效的影响。结果 (1)多柔比星对转染了mi R-101的乳腺癌细胞MDA-MB-435的细胞活力抑制率明显升高(P<0.05或P<0.01);(2)pc DNA3.1-Mcl-1的共转染显著抑制了mi R-101联合多柔比星对MDA-MB-435细胞的杀伤活性。结论 mi R-101通过下调Mcl-1的表达增强多柔比星对乳腺癌细胞的杀伤活性。 展开更多
关键词 miR-101 MCL-1 乳腺癌 mda-mb-435 多柔比星
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组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA抑制乳腺癌细胞MDA-MB-435增殖及促凋亡的作用机制 被引量:2
8
作者 王召同 卢锐涛 +2 位作者 刘永红 王红胜 曾军 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1023-1029,共7页
目的观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA对人乳腺癌细胞系MDA-MB-435增殖、凋亡等的作用及其相关分子机制。方法不同浓度的SAHA作用于MDA-MB-435细胞后,采用MTT、流式细胞分析、Western blot、荧光定量PCR等方法检测细胞增殖、凋亡、周期... 目的观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA对人乳腺癌细胞系MDA-MB-435增殖、凋亡等的作用及其相关分子机制。方法不同浓度的SAHA作用于MDA-MB-435细胞后,采用MTT、流式细胞分析、Western blot、荧光定量PCR等方法检测细胞增殖、凋亡、周期阻滞情况及相关蛋白及mRNA表达。结果 MTT检测结果表明SAHA可呈剂量依赖性抑制细胞增殖,流式细胞分析发现SAHA可导致G2/M期周期阻滞、线粒体膜电位下降、活性氧(ROS)产生并发生早期凋亡。同时,SAHA可下调周期蛋白cyclin B、活化p38-MAPK及JNK,抑制p53的表达且可能不是通过PI3K通路、P38 MAPK通路、ERK1/2通路和NF-κB、JNK通路起作用。结论 SAHA能抑制MDA-MB-435细胞增殖,诱导其周期阻滞及早期凋亡,活化细胞内相关增殖分子,可作为乳腺癌潜在的候选药物。 展开更多
关键词 SAHA 乳腺癌mda-mb-435细胞 凋亡 MAPKS p53
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三氧化二砷诱导雌激素受体阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-435s凋亡和bcl-2、bax表达关系的研究 被引量:4
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作者 张丽娜 王留兴 +2 位作者 樊青霞 赵培荣 王瑞林 《肿瘤基础与临床》 2007年第3期203-206,共4页
目的观察不同浓度三氧化二砷(As2O3)诱导人乳腺癌细胞系MDA-MB-435s凋亡的情况及对bcl-2和bax表达的影响,初步探讨了其诱导凋亡的途径。方法不同浓度As2O3体外作用于MDA-MB-435s细胞24h后,采用TUNEL染色法和DNA梯状电泳法检测细胞凋亡情... 目的观察不同浓度三氧化二砷(As2O3)诱导人乳腺癌细胞系MDA-MB-435s凋亡的情况及对bcl-2和bax表达的影响,初步探讨了其诱导凋亡的途径。方法不同浓度As2O3体外作用于MDA-MB-435s细胞24h后,采用TUNEL染色法和DNA梯状电泳法检测细胞凋亡情况,应用免疫组化法检测细胞中bcl-2和bax蛋白表达情况。结果As2O3作用后,DNA琼脂糖凝胶电泳法呈现凋亡DNA梯状条带;As2O3作用组的凋亡指数明显高于阴性对照组(P<0.05);bcl-2表达下调,bax表达上调。结论As2O3能诱导MDA-MB-435s细胞凋亡,上调bcl-2蛋白表达、下调bax蛋白表达是其诱导凋亡的途径之一。 展开更多
关键词 三氧化二砷(As2O3) 乳腺癌mda-mb-435s细胞 凋亡 bcl-2 bax
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CXCL12对人乳腺癌细胞株MDA-MB-435失巢凋亡的研究
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作者 杨开 杨越 +1 位作者 曹翌 王政华 《现代肿瘤医学》 CAS 2014年第4期769-772,共4页
目的:研究趋化因子CXCL12对人乳腺癌高转移细胞系MDA-MB-435失巢凋亡的影响。方法:实验组培养基中加入终浓度为50ng/ml的CXCL12,对照组为无CXCL12的DMEM培养基。两组细胞悬浮培养,建立人乳腺癌高转移细胞系MDA-MB-435失巢凋亡抵抗细胞... 目的:研究趋化因子CXCL12对人乳腺癌高转移细胞系MDA-MB-435失巢凋亡的影响。方法:实验组培养基中加入终浓度为50ng/ml的CXCL12,对照组为无CXCL12的DMEM培养基。两组细胞悬浮培养,建立人乳腺癌高转移细胞系MDA-MB-435失巢凋亡抵抗细胞模型。MTT检测CXCL12对于失巢凋亡抵抗MDA-MB-435细胞系生长的影响,流式细胞仪检测两组细胞的凋亡情况,Transwell实验检测细胞侵袭能力改变。结果:CXCL12对于失巢凋亡抵抗MDA-MB-435细胞系在形态学方面与对照组相比无特异性改变。CXCL12作用组失巢凋亡抵抗细胞增殖能力低于对照组,凋亡率增加,侵袭能力增加,穿过膜细胞数明显高于对照组(28±3.0 vs 15±2.4,P<0.05)。结论:在人乳腺癌高转移细胞系MDA-MB-435失巢凋亡过程中,CXCL12能在一定程度上抑制失巢凋亡抵抗细胞的生长,但却能增加存活肿瘤细胞的侵袭性。 展开更多
关键词 乳腺癌 mda-mb-435 CXCL12 失巢凋亡
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乳腺癌细胞MDA-MB-435s中侧群细胞的分选及其与非侧群细胞的生物学特点比较
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作者 左铁 李定彪 +1 位作者 杜兴华 雷鸣 《昆明医科大学学报》 CAS 2014年第10期22-24,共3页
目的分离乳腺癌细胞MDA-MB-435s中的侧群细胞(sidepopulation cells,SP),并比较侧群细胞和非侧群细胞(non-side population cells,NSP)的基本生物学特点.方法经Hoechst33342染色后,利用流式细胞技术分选乳腺癌细胞MDA-MB-435s中SP和NSP ... 目的分离乳腺癌细胞MDA-MB-435s中的侧群细胞(sidepopulation cells,SP),并比较侧群细胞和非侧群细胞(non-side population cells,NSP)的基本生物学特点.方法经Hoechst33342染色后,利用流式细胞技术分选乳腺癌细胞MDA-MB-435s中SP和NSP 2个细胞亚群,比较2群细胞的形态、增殖和周期等特点.结果分选得到的SP细胞约占5.2%,其增殖速度较NSP细胞快,且细胞形态较粗大.NSP细胞的G1期所占比例为73.63%,高于SP细胞的G1期所占比例为54.16%.结论 SP和NSP细胞的形态有差异,SP细胞的增殖速度快于NSP细胞,NSP细胞的周期阻滞在G1期,提示SP细胞可能在乳腺癌细胞的生长过程中具有重要的作用. 展开更多
关键词 乳腺癌细胞mda-mb-435s SP细胞 增殖
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乳宁Ⅱ号对人乳腺癌MDA-MB-435细胞株生长转移的影响 被引量:10
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作者 阙华发 高尚璞 +2 位作者 陈红风 陆德铭 唐汉钧 《中国中医基础医学杂志》 CAS CSCD 2002年第7期32-34,共3页
Objective:To explore the effect of “Runing Ⅱ” on the tumor growth and metastasis of Human Breast Cancer Cell Line MDA MB 435 in Vivo and Vitro. Methods: Both in vitro and in Vivo experiments were conducted in the s... Objective:To explore the effect of “Runing Ⅱ” on the tumor growth and metastasis of Human Breast Cancer Cell Line MDA MB 435 in Vivo and Vitro. Methods: Both in vitro and in Vivo experiments were conducted in the study. In Vitro, MTT method was used to detect the ability killing the tumor cells of serum with “Runing Ⅱ”. In vivo, We have observed the effect of “Runing Ⅱ” on the tumor growth and metastasis by nude mice model implanted MDA MB 435. Result: At the dosages of 32g, 16g and 8g per kilogram, “Runing Ⅱ” could kill MDA MB 435 cells 35 88%、29 84% and 8 30% respectively in vitro, the inhibitory effect of tumor growth was statistially significant, as compared with that of the normal group ( P <0 05),there were no statistital difference between the “Runing Ⅱ” group at the dosages of 48g/kg and the CTX group ( P>0 05 ). In the case of animal experiments, the Human Breast Cancer Cell Line MDA MB 435 was inoculated into the m.f.p. of nude mice, the results demonstrated that the growth suppression rate and the Lung metastasis inhibiting rate of “Runing Ⅱ” at the dosages of 48g/kg was 53 64% and 27% respectively, which were no statistial difference than that of CTX group (the growth suppression rate and the Lung metastasis inhibiting rate was 48 8% and 25 2% respectively)( P> 0 05). Conclusion: The results suggest that “Runing Ⅱ” can suppress the tumor growth and metastasis of Human Breast Cancer Cell Line MDA MB 435. 展开更多
关键词 mda-mb-435 乳宁Ⅱ号 乳腺癌 细胞 生长转移 动物实验
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四种抗癌药物对乳腺癌MDA-MB-435细胞的体外抗肿瘤活性 被引量:3
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作者 黄银久 胡小梅 +5 位作者 唐洁 刘浩 丁一博 何鮦鮦 刘培培 王雪粉 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第18期5181-5183,共3页
目的评价表柔比星、紫杉醇、奥沙利铂、羟基喜树碱对乳腺癌MDA-MB-435细胞体外抗肿瘤活性。方法利用MTT比色法初步测定四种抗癌药物对MDA-MB-435细胞体外抑制活性;利用形态学观察考察四种药物对靶标细胞的形态学影响;利用甲瓒结晶生成... 目的评价表柔比星、紫杉醇、奥沙利铂、羟基喜树碱对乳腺癌MDA-MB-435细胞体外抗肿瘤活性。方法利用MTT比色法初步测定四种抗癌药物对MDA-MB-435细胞体外抑制活性;利用形态学观察考察四种药物对靶标细胞的形态学影响;利用甲瓒结晶生成分析四种药物对细胞的毒杀作用;利用乳酸脱氢酶活力测定评价四种药物对靶标细胞的细胞毒性。结果四种抗癌药物在1μmol/L和10μmol/L对乳腺癌MDA-MB-435细胞都显示出很好的体外抑制活性,其中表柔比星在10μmol/L或者紫杉醇、羟基喜树碱在1μmol/L和10μmol/L对乳腺癌MDA-MB-435抑制率>94%,表柔比星在1μmol/L或者奥沙利铂在1μmol/L和10μmol/L抑制活性相对较低;形态学观察、甲瓒结晶生成和乳酸脱氢酶活性测定表明表柔比星在1μmol/L或奥沙利铂在1μmol/L和10μmol/L毒性较小,而表柔比星在10μmol/L或者紫杉醇、羟基喜树碱在1μmol/L和10μmol/L都显示出明显的细胞毒作用。结论紫杉醇、羟基喜树碱或高浓度表柔比星主要通过细胞毒性发挥抗肿瘤作用;奥沙利铂或低浓度表柔比星则是通过生理途径发挥体外抗癌活性。 展开更多
关键词 表柔比星 紫杉醇 奥沙利铂 羟基喜树碱 mda-mb-435细胞
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重组小鼠干细胞逆转录病毒载体高效基因转染CD41^+、UT7、U937和MDA-MB-435细胞 被引量:4
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作者 石小玉 李文林 +3 位作者 梁朝 张际青 赵林 李红 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期212-218,共7页
目的 :研究重组小鼠干细胞逆转录病毒载体介导基因转染 ,探索一条高效基因转染的途径 ,为重组小鼠干细胞逆转录病毒载体在基因转染中的应用提供理论依据和奠定实验基础。方法 :①逆转录病毒载体的构建 :EC1- 4 (repeats 1- 4ofcadherin ... 目的 :研究重组小鼠干细胞逆转录病毒载体介导基因转染 ,探索一条高效基因转染的途径 ,为重组小鼠干细胞逆转录病毒载体在基因转染中的应用提供理论依据和奠定实验基础。方法 :①逆转录病毒载体的构建 :EC1- 4 (repeats 1- 4ofcadherin - 5extracellulardomains)基因克隆产物和mutant(Ser2 2 2A)MEK 1基因克隆产物 ,Bg1Ⅱ和EcoRⅠ限制性内切核酸酶切割后 ,克隆进入逆转录病毒表达载体pMSCV。②CD4 1+ 细胞的获取和细胞培养 :从脐带血分离的CD34+ 细胞通过TPO诱导表达CD4 1,FACS分离CD4 1+ 细胞。高糖DMEM培养液培养NIH 3T3和MDA -MB - 4 35细胞 ,U937细胞培养在RPMI- 16 4 0培养液 ,UT7细胞是细胞因子依赖性细胞株 ,Iscove’smodifiedDulbeco’s培养液中加入GM -CSF。③测定病毒滴度 :逆转录病毒载体转入包装细胞 2 93,36h后收集病毒上清液 ,感染NIH3T3细胞 ,流式细胞仪测定病毒滴度。④Westernblot:基因转染CD4 1+ 、UT7、U937和MDA -MB - 4 35细胞 ,Westernblot检测基因产物的表达。结果 :2 93细胞产生高滴度MEK1pMSCV病毒 :3 1× 10 7,高滴度EC1- 4pMSCV病毒 :1 0×10 8。用稀释 8倍的病毒转染基因 ,重组逆转录病毒MEK1pMSCV转染白血病细胞株UT7和U973,GFP阳性细胞 (转染阳性细胞 )分别是 6 0 73%、 展开更多
关键词 基因转染 小鼠干细胞逆转录病毒 CD41^+细胞 UT7细胞 U937细胞 mda-mb-435细胞
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FRNK对人乳腺癌MDA-MB-435细胞迁移的抑制作用
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作者 秦瑾 刘正湘 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第7期833-838,共6页
背景与目的:粘着斑激酶(focaladhesionkinase,FAK)的高表达或过度激活与肿瘤迁移密切相关。粘着斑相关非激酶(FAKrelatednon-kinase,FRNK)是FAK内源性抑制剂,通过与FAK竞争粘着斑结合位点抑制FAK活性。本研究旨在探讨FRNK对人乳腺癌细胞... 背景与目的:粘着斑激酶(focaladhesionkinase,FAK)的高表达或过度激活与肿瘤迁移密切相关。粘着斑相关非激酶(FAKrelatednon-kinase,FRNK)是FAK内源性抑制剂,通过与FAK竞争粘着斑结合位点抑制FAK活性。本研究旨在探讨FRNK对人乳腺癌细胞MDA-MB-435迁移的抑制作用及相关机制。方法:RT-PCR法克隆目的基因FRNK,构建pcDNA3.1-FRNK重组质粒;利用脂质体转染MDA-MB-435细胞,经G418筛选抗性单细胞克隆,通过Westernblot鉴定稳定高表达FRNK蛋白的MDA-MB-435细胞并检测其与野生型MDA-MB-435细胞中基质金属蛋白酶-9(matrixmetalloproteinase9,MMP-9)表达水平;采用体外划痕修复实验和Boyden趋化小室比较野生型和稳定高表达FRNK蛋白的MDA-MB-435细胞的非定向及定向迁移运动能力。结果:成功构建真核表达重组质粒pcDNA3.1-FRNK,建立稳定高表达FRNK蛋白的MDA-MB-435细胞。高表达FRNK的细胞较野生型MDA-MB-435细胞MMP-9蛋白表达降低73.1%。在划痕修复实验中,稳定高表达FRNK蛋白的MDA-MB-435细胞移行面积与空白面积之比为0.35±0.02,与野生型MDA-MB-435细胞(0.58±0.06)相比划痕修复能力明显减弱(P<0.05);在趋化小室实验中,高表达FRNK蛋白的MDA-MB-435细胞迁移数为65.15±8.56,仅为野生型MDA-MB-435细胞迁移数(97.86±5.44)的66.57%。结论:FRNK可抑制MDA-MB-435细胞迁移运动,该抑制作用与MDA-MB-435细胞中MMP-9表达下调有关。 展开更多
关键词 粘着斑相关非激酶 乳腺肿瘤 mda-mb-435细胞 细胞迁移 基质金属蛋白酶-9
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亲骨转移乳腺癌细胞MDA-MB-231BO成瘤性的初步研究
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作者 王江涛 丁彦青 王捷 《中国比较医学杂志》 CAS 2009年第5期23-25,F0003,共4页
目的通过比较亲骨转移乳腺癌细胞(MDA-MB-231BO)和亲代乳腺癌细胞(MDA-MB-231)的生长曲线和致瘤性,初步探讨MDA-MB-231BO细胞的生物学特性。方法MTT法测定两种细胞的生长曲线,并将两种乳腺癌细胞接种于裸鼠腋窝处皮下,建立乳腺癌细胞异... 目的通过比较亲骨转移乳腺癌细胞(MDA-MB-231BO)和亲代乳腺癌细胞(MDA-MB-231)的生长曲线和致瘤性,初步探讨MDA-MB-231BO细胞的生物学特性。方法MTT法测定两种细胞的生长曲线,并将两种乳腺癌细胞接种于裸鼠腋窝处皮下,建立乳腺癌细胞异种移植瘤动物模型,30 d后处死裸鼠,肿瘤组织及相关脏器官做病理检查。结果MTT法测得MDA-MB-231BO细胞生长速率高于MDA-MB-231细胞。接种两种乳腺癌细胞的裸鼠均长出肿瘤,成瘤率为100%。病理检查符合人乳腺癌细胞特征,MDA-MB-231BO组瘤体体积明显大于MDA-MB-231组(P<0.05)。结论MDA-MB-231BO细胞生长速率高于MDA-MB-231细胞,而且MDA-MB-231BO在裸鼠体内的致瘤性强于MDA-MB-231。 展开更多
关键词 亲代乳腺癌细胞(mda-mb-231) 亲骨转移乳腺癌细胞(mda-mb-231BO) 骨转移 肿瘤移植模型
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去甲泽拉木醛对MDA⁃MB⁃435细胞增殖和凋亡的影响
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作者 沈政洁 徐长亮 +3 位作者 钱和亚 左云 程海波 陈亚楠 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期255-258,共4页
目的探究去甲泽拉木醛对人乳腺癌MDA-MB-435细胞增殖和凋亡的影响。方法2、4、8μmol/L去甲泽拉木醛作用MDA-MB-435细胞24 h后,在倒置显微镜下观察形态,MTT法检测细胞增殖情况,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,通过Hoechst单染... 目的探究去甲泽拉木醛对人乳腺癌MDA-MB-435细胞增殖和凋亡的影响。方法2、4、8μmol/L去甲泽拉木醛作用MDA-MB-435细胞24 h后,在倒置显微镜下观察形态,MTT法检测细胞增殖情况,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,通过Hoechst单染于荧光显微镜观察细胞凋亡形态,Western blot法检测Bcl-2、Bcl-xL、Bax蛋白表达。结果2、4、8、12μmol/L去甲泽拉木醛处理MDA-MB-435细胞24、48 h后,可呈浓度依赖性地抑制乳腺癌细胞增殖(P<0.05)。2、4、8μmol/L去甲泽拉木醛作用乳腺癌细胞24 h后,细胞凋亡率升高(P<0.05),Bcl-2、Bcl-xL蛋白表达下调(P<0.05),Bax蛋白表达上调(P<0.05)。结论去甲泽拉木醛可能通过下调Bcl-2、Bcl-xL蛋白表达,上调Bax蛋白表达来诱导MDA-MB-435细胞凋亡并抑制增殖。 展开更多
关键词 去甲泽拉木醛 人乳腺癌mda-mb-435细胞 增殖 凋亡
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染料木黄酮对人乳腺癌细胞肌动蛋白细胞骨架和黏附能力的影响 被引量:6
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作者 宋鸣子 戈应滨 +2 位作者 范玲玲 李迎春 顾洛 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期424-427,I0001,共5页
目的:体外研究染料木黄酮(genistein)对人乳腺癌细胞(MDA-MB-435)肌动蛋白细胞骨架及黏附能力的影响。方法:不同浓度染料木黄酮(12.5、25.0、50.0和100.0!mol/L)孵育MDA-MB-435细胞24h。用FITC标记的鬼笔环肽标记F-肌动蛋白,分别用荧光... 目的:体外研究染料木黄酮(genistein)对人乳腺癌细胞(MDA-MB-435)肌动蛋白细胞骨架及黏附能力的影响。方法:不同浓度染料木黄酮(12.5、25.0、50.0和100.0!mol/L)孵育MDA-MB-435细胞24h。用FITC标记的鬼笔环肽标记F-肌动蛋白,分别用荧光显微镜和流式细胞仪技术分析肌动蛋白细胞骨架的重组情况;噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞对人工重组基膜的黏附能力。结果:不同浓度染料木黄酮均导致细胞内肌动蛋白细胞骨架发生解聚,同时细胞内F-肌动蛋白排列和分布及细胞形态发生明显改变;此外,染料木黄酮可明显降低MDA-MB-435细胞对人工重组基膜的黏附能力,其效应呈剂量依赖性。结论:染料木黄酮在体外可抑制乳腺癌细胞的黏附能力,其作用可能与其诱导肌动蛋白细胞骨架重组有关。 展开更多
关键词 染料木黄酮 细胞骨架 黏附 乳腺癌细胞(mda-mb-435)
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半夏总生物碱对人乳腺癌细胞增殖的抑制作用 被引量:12
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作者 孙欢 唐瑛 +2 位作者 周茜 王庆敏 雷呈祥 《华南国防医学杂志》 CAS 2012年第5期411-414,共4页
目的探讨半夏总生物碱(total alkaloids from pinellia ternate,TATP)对人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S增殖的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolil tetracolium,MTT)比色法以及集落形成率实验,检测不同浓度的TATP对MDA-MB-435S... 目的探讨半夏总生物碱(total alkaloids from pinellia ternate,TATP)对人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S增殖的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolil tetracolium,MTT)比色法以及集落形成率实验,检测不同浓度的TATP对MDA-MB-435S细胞株的生长抑制作用。应用单细胞凝胶电泳分析检测TATP导致MDA-MB-435S细胞的DNA损伤情况。结果人乳腺癌细胞MDA-MB-435S经TATP处理后,其体外增殖能力受到明显抑制且与药物剂量、作用时间呈正相关,经TATP作用24、48、72h后的半数抑制浓度分别为:98.37μg/ml、52.16μg/ml、33.63μg/ml。单细胞凝胶电泳(single cell gel electrophoresis,SCGE)中,TATP组细胞尾DNA含量、尾长及尾动量与对照组有统计学差异(P<0.01),且呈现浓度依赖性。结论在体外培养条件下,TATP能明显抑制MDA-MB-435S细胞增殖,其机制可能与DNA的损伤作用有关。 展开更多
关键词 半夏总生物碱 mda-mb-435S细胞 细胞增殖抑制 细胞凝胶电泳 DNA损伤
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MTT法检测乳腺癌细胞株对化疗药物5-氟脲嘧啶的敏感性 被引量:8
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作者 韩方璇 林慧 汝玲 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期97-99,共3页
目的探讨四氮唑蓝比色分析法(MTT法)用于指导临床个体化化疗药物选择的实用性,为乳腺癌临床化疗用药提供参考。方法采用MTT法测定乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-435S对不同浓度的化疗药物5-氟脲嘧啶(5-Fu)的体外敏感性。结果不同浓度的5-F... 目的探讨四氮唑蓝比色分析法(MTT法)用于指导临床个体化化疗药物选择的实用性,为乳腺癌临床化疗用药提供参考。方法采用MTT法测定乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-435S对不同浓度的化疗药物5-氟脲嘧啶(5-Fu)的体外敏感性。结果不同浓度的5-Fu对高转移和低转移乳腺癌细胞株的生长均有一定的抑制作用,且抑制率呈剂量依赖性。结论MTT法检测有助于指导临床选择化疗药物剂量,提高化疗效果,减少毒副作用,为乳腺癌临床个体化化疗方案的选择提供客观依据。 展开更多
关键词 乳腺癌 5-氟脲嘧啶 MTT法 MCF-7 mda-mb-435S
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