荧光定量RT-PCR检测mdr-1基因表达

目的 :建立荧光定量RT PCR检测肿瘤细胞mdr 1基因表达的方法 ,了解肺癌组织中mdr 1的表达水平。方法 :建立荧光定量RT PCR方法 ,在PE770 0型检测仪上定量检测K5 6 2 /ADM耐药株和K5 6 2不耐药株细胞mdr 1基因表达水平 ,同时检测 45例初治肺部肿瘤病人组织标本。结果 :荧光定量RT PCR检测K5 6 2 /ADM耐药株和K5 6 2不耐药株细胞mdr 1基因表达 ,重复 10次实验所得结果平均分别为 (6 86± 0 6 5 )× 10 7拷贝 /μgRNA和 (8 49± 0 6 7)× 10 5拷贝 /μgRNA ,两者相差 80 8倍 ,变异系数分别为 9 5 %和 7 9%。 45例肺部肿瘤中 ,有 12例检出有mdr 1基因不同程度的表达。结论 :荧光定量RT PCR检测mdr 1基因表达方法 ,检测结果用绝对拷贝数来表示 ,定量准确可靠 ,并有利于标准的统一。有 1/4未经化疗的肺癌病人有一定水平mdr

急性白血病患者bcl-2和bax基因表达的临床意义及其与mdr-1基因表达的关系

细胞凋亡受抑作为肿瘤细胞的耐药机制 ,是急性白血病 (AL)预后不良的原因之一。bcl 2家族是目前最受重视的调控细胞凋亡的基因家族 ,本研究为探讨bcl 2和bax基因在急性白血病表达的意义 ,应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法测定 70例初治AL患者及 2 0例正常人的bcl 2 ,bax ,mdr 1基因mRNA水平的表达 ,用流式细胞术检测其蛋白表达。结果表明 ,bcl 2和bax基因在AL患者广泛表达 ,bcl 2mRNA平均表达水平明显高于正常对照 (1.4 6vs 0 .71,P <0 .0 5 )。bcl 2和bax基因表达及bax bcl 2比值与AL患者的年龄、性别、血小板计数、血红蛋白水平、骨髓原始细胞百分率、FAB分型和S +G2 M %均未发现相关。Bcl 2蛋白表达 (34.6 %vs 6 9.2 %,P <0 .0 5 ) ,bax bcl 2mRNA比值 (37.1%vs 82 .9%,P <0 .0 1)决定AL对化疗的敏感性 ,与ALCR率密切相关。bax bcl 2mRNA比值还是影响总生存期的因素。bcl 2与bax基因表达和mdr 1表达两者无相关关系。

抗肿瘤药物体外诱导新鲜癌组织及其外周血淋巴细胞mdr-1基因表达的相关性研究

目的 :通过对恶性肿瘤患者的癌组织细胞及其外周血淋巴细胞进行抗肿瘤药物的体外诱导 ,用RT PCR法检测其mdr 1基因表达状况 ,从而找出两者之间的相关性 ,从基因水平解决非手术癌患者化疗用药个体化。方法 :在采集手术标本的同时抽取该患者外周血 ,用 8种抗肿瘤药物进行体外诱导 ,RT PCR法检测 32例恶性肿瘤患者癌组织细胞及其外周血淋巴细胞的mdr 1基因表达状况。利用SAS软件计算两者之间的相关关系。结果 :32例恶性肿瘤患者的新鲜癌组织细胞与其外周血淋巴细胞的抗肿瘤药物体外诱导mdr 1基因表达呈正相关关系。结论 :对于失去手术机会或病灶很小不能取材的患者可以用外周血淋巴细胞替代癌细胞做RT PCR体外药敏检测。

初发及复发转移大肠癌组织与外周血MDR-1基因表达相关性研究

目的 探讨初发及复发转移大肠癌组织与外周血MDR 1基因表达的相关性。方法 采用RT PCR方法分别检测了 5 6例初发大肠癌组织及外周血和 4 0例术后化疗的复发转移大肠癌病灶组织及外周血的MDR 1表达情况。结果 无论是组织中 ,还是外周血中经过化疗的大肠癌患者MDR 1的阳性表达率均明显高于初发大肠癌患者 ,统计学上有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 可以用外周血代替癌组织来检测MDR

麂属(Muntiacus)动物MDR-1基因序列分析及其分子进化关系

对麂属（Muntiacus）中的3种动物:赤麂（M.muntjak）（2n=6 ,7 ）小麂（M.reevesi）（2n=46）,黑麂（M.crinifrons）（2n=8 ,9 ）MDR-1基因（multidrug resistance,多药耐药基因）726bP左右的片段进行了序列分析,并根据序列信息建立分子系统树,同时探讨了这3种动物的起源、分类地位及进化关系。

化疗对食管癌组织中mdr-1基因表达的影响及其意义

目的研究ｍｄｒ１基因过度表达与肿瘤化疗疗效的相关性，进一步研究食管癌组织ｍｄｒ１基因的表达与食管癌多药耐药及相关因素的关系。方法３０例未作治疗的食管癌患者，均行术前计划化疗，化疗前食管镜下取癌及癌旁活组织。术前化疗方案：丝裂霉素（ＭＭＣ）４～６ｍｇ／ｍ２静脉注射，第１、８、１５天；顺铂（ＤＤＰ）２０～３０ｍｇ／ｍ２静脉点滴，第２、３、４天；平阳霉素（ＰＹＭ）６ｍｇ／ｍ２肌肉注射，第１、３、８、１１、１６、１８天。２１天为一周期，２周期为一疗程，休息２周后手术。将切除标本及化疗前食管镜活检取材组织作匀浆，抽提总ＲＮＡ后用反转录多聚酶链反应技术（ＲＴＰＣＲ）检测ｍｄｒ１的表达，与化疗疗效及癌旁组织ｍｄｒ１之表达作对比。结果癌组织ｍｄｒ１的表达高于癌旁组织中ｍｄｒ１的表达（３３％与１０％，Ｐ＜００５）；化疗后癌组织中ｍｄｒ１的表达高于化疗前（３３％与８３％，Ｐ＜００５），而癌旁组织中ｍｄｒ１的表达则无差异（１０％与１０％，Ｐ＞００５）；化疗前癌组织ｍｄｒ１阳性表达者化疗疗效差于化疗前癌组织ｍｄｒ１阴性表达者（１０％与４５％，Ｐ＜００５）。结论食管癌存在先天性ＭＤＲ，癌组织ｍｄｒ１阳?

mdr-1基因骨髓造血干细胞移植诱导大鼠肝移植免疫耐受

目的探讨mdr-1基因骨髓造血干细胞移植诱导肝移植术后免疫耐受的可行性及其可能机制。方法选用雄性Wistar大鼠30只为肝移植供体,另选雌性SD大鼠20只为异基因肝移植受体,随机分为mdr-1基因骨髓造血干细胞移植联合肝移植组(A组)和单纯肝移植组(B组)。雌性Wistar大鼠10只为同基因肝移植受体(C组)。比较A、B两组大鼠肝移植术后1周生存率、生存状况、生存时间,以及移植肝脏的病理变化。结果 C组大鼠生存时间均达60 d以上,A组为(31.2±4.9)d,明显高于B组[(12.1±4.7)d],差异有统计学意义(P<0.05)。B组病理组织切片可见中、重度急性排斥反应,肝内单核细胞浸润较为明显,主要集中在汇管区;A组移植肝内组织损伤程度明显减轻;C组基本无排斥反应,接近正常肝组织。结论 mdr-1基因骨髓造血干细胞可明显减轻大鼠肝移植后免疫排斥反应。

乳腺癌中c-erbB-2癌基因和mdr-1基因的检测及相关性研究

目的 检测原发性乳癌中c erbB 2扩增和mdr 1表达的情况 ,并探讨二者的相关性。方法 分别采用PCR和RT PCR法检测 47例乳癌中c erbB 2扩增和mdr 1表达。结果 ⑴c erbB 2扩增与组织学分级和腋淋巴结阳性数有关 ,有统计学意义。ER、PR阴性与阳性乳癌比较 ,非浸润性与浸润性乳癌比较 ,c erbB 2扩增均有显著性差异。⑵mdr 1表达与组织学分级有关 ,有统计学意义。⑶mdr 1表达与c erbB 2扩增之间无统计学意义。结论 c erbB 2扩增与乳癌的组织学分级、腋淋巴结阳性数、ER、PR状态、组织学类型有关 ,mdr 1表达只与组织学分级有关 ,c erbB 2扩增与mdr

食管癌、癌旁组织中P53、MDR-1基因的表达

目的探讨食管癌、癌旁组织中P53、MDR-1基因的表达及相关性。方法选择接受手术治疗的50例食管癌患者的癌组织蜡块,均采用免疫组化ABC法及逆转录酶-聚合酶链反应的方法对食管癌、癌旁组织中P53、MDR-1基因进行检测。结果 P53阳性率在食管鳞癌为68%(34/50),癌旁正常黏膜为54%(27/50),癌旁非典型增生为70%(35/50);食管癌组织中P53的表达与MDR-1的表达有高度相关性;高度分化食管癌组织中MDR-1的表达与中度分化比较差异有统计学意义(P<0.01);中度分化组织中MDR-1的表达与低度分化比较差异有统计学意义(P<0.01);低度分化组织中MDR-1的表达与正常组织比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 MDR-1基因及突变型P53在食管癌、癌旁组织中均呈高水平表达,癌旁组织中MDR有表达,P53基因突变早于组织形态学改变。

恶性肿瘤患者外周血淋巴细胞mdr-1基因表达在原发耐药与继发耐药中的作用研究

目的 :mdr 1基因是肿瘤多药耐药现象中的主要表型 ,探讨mdr 1基因原发耐药与继发耐药表达状况 ,预期指导临床个体化疗。方法 :应用RT PCR方法对 5 1例恶性肿瘤患者外周血淋巴细胞mdr 1基因进行定量体外诱导后检测其表达水平。结果 :5 1例外周血淋巴细胞中原发性阴性表达 34例占 6 6 % ,继发性阴性表达仅 5例占 9.8% ,外周血中的原发mdr 1阴性表达与继发性表达比较有显著性差异 (P <0 .0 1)。在低阳性组 ,原发性表达 11例占 2 1% ,继发性表达 31例占 6 0 .7% (P <0 .0 1)。高阳性组原发性表达 6例占 11.8% ,继发性表达 15例占 2 9% (P <0 .0 1)。继发性表达率明显高于原发性。 结论 :RT PCR检测人外周血淋巴细胞mdr 1基因表达取材方便 ,结果可靠 ,提示不同程度的mdr 1基因表达水平可以客观地反映不同个体的药物耐受情况 .

P53、MDR-1基因在中老年食管癌患者中的表达及临床运用分析

目的:探究P53、MDR-1基因在中老年食管癌患者中的表达及临床意义.方法:选取郑州大学第二附属医院与安阳肿瘤医院共同收治的120例食管癌患者作为研究对象,对其血清P53基因,以及癌组织中P53蛋白及MDR-1基因进行检测,并对P53基因表达与患者放化疗预后的相关性进行分析.结果:P53基因mR NA阳性45例,表达量为0.43±0.12;阴性75例,表达量为0.09±0.03.P53 mR NA表达阳性组其MDR-1基因阳性例数为41例,阴性组其MDR-1基因的表达为65例;表达阴性组其治疗有效率明显高于阳性组,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:P53、MDR-1基因的表达与食管癌患者治疗预后有明显的相关性.

复发转移性乳腺癌mdr-1基因产物P-糖蛋白表达的临床意义

目的 探讨复发转移性乳腺癌mdr 1基因表达产物P 糖蛋白 (P glycoprotein ,P gp)表达及其与含吡喃阿霉素联合方案化疗疗效的关系。方法 应用SABC法检测 4 6例转移性乳腺癌术后组织中P gp表达 ,使用环磷酰胺、吡喃阿霉素和 5 氟尿嘧啶联合方案化疗 ,对比分析P gp表达与疗效的关系。 结果 ① 4 6例患者mdr 1基因表达产物P gp阳性表达率 5 6 .5 % ,肝或肺转移者阳性表达明显高于皮肤或淋巴结转移者 (P =0 .0 4 9)。②可评价疗效的 4 3例患者化疗有效率 5 8.1% ;P gp阴性组疗效 (89.5 % )明显优于P gp阳性组 (30 .0 % ) (P <0 .0 1)。③有肝或肺转移者有效率(4 0 .7% )明显低于皮肤或浅表淋巴结转移者 (87.5 % ) (P <0 .0 5 )。④术后曾接受辅助性CAF或CMF方案化疗者复发转移后化疗疗效 (71.4 %和 37.5 % )无显著性差异 (P =0 .0 5 2 )。结论 mdr 1基因表达产物P

MDR-1基因骨髓造血干细胞移植抑制大鼠肝癌移植术后复发的研究

目的探讨MDR-1基因骨髓造血干细胞移植对大鼠肝移植术后复发转移的影响。方法选用雄性Wistar大鼠30只为肝移植供体,另选雌性SD大鼠30只为异基因肝移植受体(将HCCLM6肿瘤组织原位接种于大鼠肝脏,10 d后行肝移植,2周后处死大鼠)随机分为两组,A组MDR-1基因骨髓造血干细胞移植联合肝移植组,B组为单纯肝移植组。比较两组大鼠肝移植术后2周生存率、肝内复发和肝外转移情况。结果术后两周,A组大鼠存活14只,B组存活10只(P<0.05)。两组大鼠肝内复发率均为100%,但复发瘤大小差异有统计学意义(P<0.05),A组为(323.23±29.56)mm3,B组为(692.73±142.56)mm3。A组肺转移率为22%,B组为70%,A组淋巴结转移率为15%,B组为50%,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 MDR-1基因骨髓造血干细胞移植对大鼠肝移植术后复发转移有一定抑制作用。

成人急性白血病患者mdr-1基因表达的临床意义

为探讨多药耐药基因(mdt-1)与急性白血病(AL)的临床特征、免疫分型以及预后关系,用间接免疫荧光法和逆转录—多聚酶链式反应检测63例成人AL细胞mdr-l(即P-170和mRNA)表达。结果显示,复发和难治患者mdr-l表达阳性率明显高于初治患者,分别为50.0％、50.0％和21.3％(P<0.05)。在M_1、M_5和慢性粒细胞白血病急变患者mdr-l基因表达率较高,为50.0％、47.1％和85.7％(P尸<0.01)。Mdr-1基因表达与细胞CD_14表达有关(P<0.01)。Mdr-l表达增高患者,获得完全缓解的机会较少,且完全缓解期、生存期短。1年生存率mRNA表达阳性患者11.0％,mRNA表达阴性患者58.0％。提示mdr-1基因表达水平影响AL的预后,可做为评价AL的预后参数。

RNAi对白血病细胞mdr-1基因和多药耐药表型的影响

目的:探讨RNA干扰技术(RNAi)对慢性粒细胞白血病急变细胞系K562/AO2细胞mdr1基因的抑制和耐药表型的逆转作用。方法:选择合成封闭mdr-1基因的小干扰序列(si-MDR1),以1个碱基突变的si-MDR1-mut为对照序列,在脂质体介导下转染至K562/AO2细胞系。RT-PCR和Western blot检测mdr1 mRNA及P-gp蛋白水平,流式细胞术分析细胞内柔红霉素(daunorubicin,DNR)积累量,并以四甲基唑蓝快速比色法(MTT)反映K562/AO2对阿霉素、长春新碱、足叶乙甙药物敏感性的变化。结果:实验证实该序列能高效封闭K562/AO2细胞内mdr-1基因表达,增加细胞内化疗药物DNR积累量,增强K562/AO2细胞对阿霉素、长春新碱、足叶乙甙的敏感性。结论:RNAi可以通过抑制mdr1基因表达,逆转K562/AO2细胞耐药表型。

靶向mdr-1基因shRNA真核表达载体的构建与鉴定

本研究构建并鉴定靶向mdr-1基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体。根据Genbank数据库提供的mRNA序列,选择设计3个能转录短发夹RNA(shRNA)的DNA序列,体外分别合成3对互补并编码mRNA基因的特异性shRNA序列的寡核苷酸,克隆到经BamHI和HindⅢ双酶切线性化的pGCsilencer人U6启动子质粒载体中;为了确定利用酶切和测序鉴定所构建的重组载体是否正确,采用脂质体转染的方法将构建好的3个重组载体(pGY1-1,pGY1-2,pGY1-3)导入慢性髓系白血病耐药细胞株K562/A02,采用实时PCR方法检测转染细胞的mdr-1基因表达,Western-blot检测P-gp表达量的变化。结果表明:应用PCR电泳图谱和测序证实了克隆RNAi打靶序列完全正确,而且该载体又同时表达GFP标记基因,用于测定转染效率。分别转染pGY1-1,pGY1-2,pGY1-3后K562/A02细胞的mdr-1基因表达和P-gp表达水平下降,证明shRNA可以特异性沉默mdr-1基因。结论:靶向mdr-1基因shRNA真核表达载体构建成功,为进一步研究mdr-1基因在K562/A02细胞中的作用奠定了实验基础。

bcl-2及MDR-1基因产物在肾癌组织中的表达及其意义

目的 :探讨基因 bcl- 2和 MDR- 1产物在肾癌组织中表达的意义及相关关系 ,了解肿瘤增殖与耐药的特点。方法 :采用免疫组织化学 SABC法对 48例肾癌和 10例正常肾组织的石蜡包埋标本切片进行 bcl- 2和MDR- 1基因产物表达的统计研究。结果 :bcl- 2在肾癌组织中阳性表达率为 77.1% ,与正常肾组织 (4 0 .0 % )相比 ,差异有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ,但其表达与肿瘤分级、分期及预后无关 (P >0 .0 5 )。 MDR- 1在肾癌组织和正常肾组织中均有阳性表达 ,与其它肾癌组织类型比较 ,颗粒型中显示高表达 (P <0 .0 5 ) ,但 MDR- 1表达与肿瘤病理分级及预后无关 (P>0 .0 5 )。结论 :bcl- 2蛋白在大多数肾癌组织中呈高表达 ,其表达在肾肿瘤形成中可能起作用 ;进一步证实 MDR- 1基因在肾细胞癌抵抗化疗中起作用 ,与 bcl- 2无显著相关性 ;肾癌化疗、放疗不敏感可能涉及 MDR- 1和 bcl- 2的双重作用。