RNA干扰沉默mdrl基因联合阿霉素对卵巢癌耐药细胞株SKOV_3/ADM增殖的抑制作用

目的:观察RNA干扰沉默mdrl基因后化疗药物对卵巢癌耐药细胞株SKOV3 /ADM增殖的影响。方法:RT -PCR检测靶向于mdrl基因的小发夹状RNA(pshRNA -mdrl)对SKOV3 /ADM细胞内mdr1mRNA表达的影响;采用MTT法及软琼脂克隆形成实验测定pshRNA -mdrl联合化疗药物阿霉素对SKOV3 /ADM的增殖抑制作用。结果:pshRNA -mdrl能抑制SKOV3 /ADM细胞mdr1mRNA的表达,pshRNA -mdr1联合阿霉素明显抑制SKOV3 /ADM细胞的增殖。结论:靶向于mdr1的pshRNA联合阿霉素能显著抑制SKOV3 /ADM的增殖。

急性髓系白血病患者体外药敏试验和多药耐药基因mdrl的表达及其临床意义

多药耐药(MDR)是急性白血病化疗成功的主要障碍之一,其机理涉及诸多因素。建立能够体外准确预测化疗药物敏感性试验方法,在指导急性白血病治疗中具有重要意义。本文研究了42例急性白血病患者体外药敏检测(MTT法)和白血病细胞P-gp)抗原的表达与白血病化疗疗效的关系。结果显示:药敏试验与治疗疗效有相关性,临床总符合率82.9%,阳性符合率78.9％,阴性符合率86.9％。认为P-gp的表达是一个有效的化疗耐药指标,白血病缓解病人P-gp阳性率高于初诊病人,P-gp阳性表达的患者完全缓解率明显低于P-gp阴性患者。

胆囊癌与mdrl基因的临床相关性研究

目的 研究多药耐药基因mdr1编码P 糖蛋白 (Pgp)和mRNA在原发性胆囊癌组织中的表达 ,分析其临床意义。方法 采用S P免疫组织化学方法和原位多聚酶链反应 (PCR)对 53例未化疗原发性胆囊癌和 1 2例胆囊炎存档石蜡包埋切片组织中Pgp、mdrlmRNA的表达进行检测。结果 53例胆囊癌、1 2例胆囊炎组织中Pgp和mdrlmRNA阳性表达率分别为 60 .38%、71 .69%和 2 5 .0 0 %、33 .33 %。两组mdrl基因表达差异有显著性 (P <0 .0 5)。胆囊癌组织中的Pgp和mdrlmRNA阳性率在胆囊癌Nevin分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期中为 69.44%和 83 .33 % ,Ⅳ、Ⅴ期为41 .1 8%和 47.0 6 % ;高、中分化为 69.2 3 %和 79.49% ,低、未分化为 35 .71 %和 50 .0 0 %。胆囊癌Nevin分期Ⅰ～Ⅲ和高中分化mdrl基因表达明显高于Nevin分期Ⅳ、Ⅴ及低未分化胆囊癌组织 (P<0 .0 5)。结论 胆囊癌多药耐药性与其内源性耐药密切相关 ,检测mdrl基因为逆转耐药提供依据。mdrl基因表达与胆囊癌部分生物学特性相关 ,mdrl基因可能参与癌肿的发生 。

超剂量化疗治疗mdr1基因转染骨髓移植的VX2肝癌兔疗效和毒副作用研究

目的:mdr1基因转染的骨髓造血细胞自体移植后,观察VX2肝癌兔超剂量化疗中mdr1基因的骨髓保护及肿瘤治疗作用;并观测超剂量化疗对心脏的毒副作用。方法:mdr1基因转入兔骨髓单个核细胞并自体移植;阿霉素化疗,观测外周血白细胞数、VX2肝肿瘤的生长及转移、心脏结构和功能变化,评价mdr1基因对受体骨髓的保护作用、超剂量化疗对肿瘤的治疗作用及对心脏的毒副作用。结果:通过转染的自体骨髓移植将mdr1基因导入受体骨髓;超剂量阿霉素化疗后,实验组荷瘤兔外周血白细胞可维持在(4.26±1.03)×109/L,肿瘤能被有效杀灭,荷瘤动物的生存时间明显高于对照组(P<0.05);同时也观察到超剂量化疗对心脏的严重损害。结论:mdr1基因能明显提高骨髓对化疗的耐受性;超剂量化疗能有效杀灭肿瘤,同时也对非造血系统脏器造成严重损害。

ASODN逆转耐药肝癌细胞多药耐药基因mdr1的体内实验研究

目的 在体外实验研究的基础上进一步观察反义硫代磷酸酯寡核苷酸 (ASODN)在裸鼠体内逆转耐药肝癌细胞SMMC 772 1/ADM多药耐药基因mdr1的作用。方法 取体外培养的耐药肝癌细胞 (1× 10 7个 /0 .2ml)注射于裸小鼠腋部皮下 ,建立耐药肝癌模型 ,而后将成模裸鼠分成 4组 ,每组各 5只。ASODN组在裸鼠肿瘤局部注射浓度为 3μmol/L的ASODN 5 0 μl和脂质体Lipofectamine 5 0 μl,并在腹腔内注射阿霉素 (ADM ,每天 10mg/m2 ) ;正义链组 (SODN组 )与ASODN组的方法、剂量相同 ;对照 1组、对照 2组分别在裸鼠局部注射Lipofectamine 5 0 μl和生理盐水 2 0 0 μl,同时腹腔注射ADM (每天 10mg/m2 )。寡核苷酸于观察的两周内每周前 3d注射 ;ADM于每周的第 2～ 4天使用。Lipofectamine和生理盐水使用时间与寡核苷酸相同。结果 随着时间的推移 ,4组裸鼠的肿瘤体积逐渐增大 ,且于第 5天开始变化明显 ,此后各时相之肿瘤体积与前一时相比较 ,差异均有显著性意义 (P<0 .0 5 ) ;ASODN组的肿瘤体积在第 5天后明显小于其他 3组 (P<0 .0 5 ) ;而对照 1组、对照 2组及SODN组各时相的肿瘤体积差异无显著性意义 (P>0 .0 5 )。该实验结果提示 ,SODN及脂质体对裸鼠肿瘤的生长无明显影响 。

乳腺癌mdr1基因表达调控的探讨

目的探讨肿瘤多药抗性（ｍｄｒ１）的基因调控及其特异的凋亡机制。方法在建立的ｍｄｒ１肿瘤裸鼠的瘤组织中，采用ＡＢＣ免疫组化法，检测Ｐ－１７０、ｃ－ｍｙｃ、野生型ｐ５３、ｐ１６、Ｆａｓ和Ｂｃ１－２等蛋白的表达。结果发现ｍｄｒ１肿瘤细胞的ｃ－ｍｙｃ表达增强；经抗ｍｄｒ１－ｒｉｂｏｚｙｍｅ部分逆转ＭＤＲ表型后，ｍｄｒ１肿瘤细胞的ｐ５３表达有所升高。结论ｃ－ｍｙｃ、ｐ５３可能参与了对ｍｄｒ１基因表达的调控，其中ｃ－ｍｙｃ可能起着激活ｍｄｒ１基因转录的作用。实验还发现ｍｄｒ１肿瘤细胞的Ｆａｓ蛋白缺失、Ｂｃ１－２表达升高，提示ｍｄｒ１肿瘤可能拥有自己特异的凋亡调节机制。

mdrl的表达在非小细胞肺癌多耐药机制中的意义

目的探讨非小细胞肺癌的化疗耐药性和mdrl基因表达的关系,明确mdrl在非小细胞肺癌耐药中的作用。方法应用肿瘤细胞体外培养和MTT法对91例未经化疗的非小细胞肺癌进行体外化疗药物(环磷酰胺、阿霉素、顺铂+氟尿嘧啶)敏感性测试,并用免疫组化方法进行mdrl表达的检测,并进行相关分析。结果化疗敏感性:53例(58.2%)对环磷酰胺耐药,51例(56.0%)对阿霉素耐药,42例(46.2%)对顺铂+氟尿嘧啶耐药。mdrl在91例中总的阳性表达率为58.2%。鳞癌和腺癌相比mdrl的表达差异无统计学意义(P>0.05),而且mdrl与耐药性均呈显著正相关(P<0.05),并且不同表达程度间差异也有统计学意义(P<0.05)。结论mdrl参与介导了非小细胞肺癌固有化疗耐药的机制。

MDRI基因表达与大肠癌的相关探讨

38例原发大肠癌切除标本以过氧化酶免疫组化方法检测多药耐药基因 (mdrl)表达物P糖蛋白 (Pgp)。Pgp/mdrl阳性表达率为 6 3 .2 % ,其中直肠癌的阳性率为 6 0 % ,结肠癌 6 9.2 %。 2 2例患者同时检测肿瘤组织及正常大肠粘膜Pgp的表达 ,正常粘膜仅 6例阳性 ,肿瘤组织 18例阳性 ,Pgp在大肠癌标本中阳性表达明显升高 (P <0 .0 5 )。而Pgp/mdrl表达与患者年龄、性别、肿瘤部位、大小、淋巴结和远处转移无关。

多药耐药基因的人骨髓细胞转染及其对抗癌药的抗性增强作用

为探讨mdrl基因转染增强人骨髓细胞对抗癌药的抵御能力的可能性。通过脂质体介导 ,用含人mdrlcDNA表达质粒 pHaMDR1/A ,将mdrl基因转染人骨髓细胞 ,分别采用流式细胞术和免疫组化检测转染细胞mdrl基因的表达产物———P糖蛋白 (Pgp) ,并用罗丹明试验证实其生物活性。同时 ,采用集落培养及抗性试验检测mdrl基因转染的人骨髓细胞对阿霉素、秋水仙碱、长春新碱和Vp16的抵御能力。结果mdrl基因被成功地导入了人骨髓细胞并获得了表达 ,罗丹明试验证实了Pgp具有完整的生物功能。mdrl基因转染的人骨髓细胞对上述抗癌药的抵御能力明显增强。

THE RELATIONSHIP BETWEEN mdrl GENE EXPRESSION AND DRUG-RESISTANCE IN OVARIAN CARCINOMA

Objective.To investigate the relationship between mdrl gene expression and multidrug-resistance in o- varian carcinoma. Design. We established tumor-bearing mice model of ovarian carcinoma,compared the anticancer drug sensitivity of OC/mdr-cell and OC/mdr+ cell in vitro, investigated the effect of cyclosporin A on reversing the multidrug resistance both in vitro and in the tumor-bearing mice model,detected the mdrl gene expre- sion in human ovarian carcinoma specimens. Main outcome measures. Anticancer drug sensitivity of both OC/mdr-cell and OC/mdr+ cell is mea- sured by the methods of MTT assays. mdrl gene expression is detected by the methods of RT-PCR. Results. Using MTT assay,OC/mdr+ cell is 4. 1 - 15. 5 times more resistant to VP-16,VCR,DNR, and DOX than OC/mdr-cell in vitro.2 μg/ml cyclosporine A(CsA)reduced the resistance of OC/mdr+ cell to DOX,from 0. 324±0. 072μg/ml to 0. 088±0. 024μg/ml. To OC/mdr－cell,CsA did not significantly in－ crease its sensitivity to DOX．Tumor-bearing mice with positive mdrl gene expression showed non-respon- siveness to DOX chemotherapy. When combined with intraperitoneal injection of CsA, the growth rate of tumor cells decreased significantly (P<0. 01 ). Only 4 of 23(17. 39% )tumors from patients who had not received chemotherapy exhibited positive mdrl gene expreession, while 6 of 9 (66. 67%)treated patients showed positive mdrl gene expression (Fisher exact test: P<0. 05 ). After cytoreductive surgery and chemotherapy, 14 of 19 untreated patients with negative mdrl gene expression had partial or complete re- sponse, while in patients with positive mdrl gene expression, 8 of 10 showed poor prognosis(Fisher exact test: P<0. 05 ). Conclusion. The expression of mdrl gene is associated with previous chemotherapy. CsA can reverse the resistance of mdr+ cells to indr-associated drs both in vitro and in vivo’ For the patients with ovarian carcinoma., the percentage of nonresponsiveness to the chemotherapy was found to be significantly higher among patients with positive mdrl gene expression than those with negative mdrl gene expression. mdrl gene expression can be detected to predict the clinical prognosis of patients with ovarian carcinoma.

槲皮素逆转白血病细胞株K562/ADM多药耐药的研究

目的 探讨槲皮素逆转白血病细胞多药耐药在膜转运蛋白方面的机制。方法 通过MTT体外药敏法证明槲皮素对柔红霉素的增敏作用并确定逆转的浓度范围 ,作用于K5 6 2 /ADM耐药株及相应敏感株K5 6 2 /S ,运用逆转录多聚酶链式反应(RT PCR)和流式细胞术检测多药耐药基因 (Mdr1)及其膜蛋白产物P 170糖蛋白 (P gp)的表达情况 ,在激光共聚焦显微镜观察柔红霉素在亚细胞水平的分布变化。结果 2 0～ 4 0 μmol/L终浓度槲皮素在体外能明显提高柔红霉素对K5 6 2 /ADM耐药株的敏感性 ,并能下调Mdr1基因及其膜蛋白产物P gp的表达 ,恢复柔红霉素在亚细胞水平的异常分布 ,回归其作用靶点———细胞核 ,从而逆转多药耐药 ,且有效浓度范围的药物对细胞本身无毒性作用。

小檗胺逆转MCF7/ADR细胞耐药性及其机制探讨

目的 探讨钙调素拮抗剂小檗胺 (BBM)逆转多药耐药的可能性及其机制。 方法 乳腺癌细胞MCF7及其耐阿霉素 (ADR)MCF7 ADR细胞与ADR及不同浓度BBM共培养 ,经四唑盐 (MTT)比色法计算半数抑制浓度 (IC50 )、耐药倍数和增敏倍数 ;流式细胞仪检测细胞内ADR相对含量和P糖蛋白 (P gp)表达水平 ;半定量RT PCR检测mdr1基因mRNA表达。 结果 ADR对MCF7和MCF7 ADR的IC50 分别为 (0 98± 0 0 6 ) μmol L和 (10 1 2 0±5 72 ) μmol L ;MCF7 ADR对ADR的耐药倍数为 10 3。MCF7 ADR细胞 5 μmol L、10 μmol L和 2 0 μmol LBBM时对ADR呈剂量依赖性增敏作用 ,增敏倍数分别为 2 76、5 88和 2 8 2 6倍 (均P值 <0 0 1)。用 10 μmol 或 2 0 μmol LBBM处理MCF7 ADR细胞 2h ,细胞内的ADR相对含量增加 2 4 9和 2 81倍 (P <0 0 1) ;处理 72h使P gp表达分别下降10 0 9%和 6 2 82 % (均P值 <0 0 1) ,且mdr1基因mRNA相对表达值也呈下调趋势。 结论 BBM提高耐药细胞MCF7 ADR胞内的ADR浓度 ,下调mdr1基因及P gp的表达 ,使其对ADR的敏感性显著增高。

mdr1及bcr-abl阳性白血病细胞对酪氨酸激酶抑制剂STI571耐药的逆转

为了探索bcr abl和mdr1阳性的白血病细胞对酪氨酸激酶抑制剂STI5 71是否有交叉耐药及其逆转方法 ,采用MTT法检测STI5 71对K5 6 2 n/VCR细胞的抑制作用 ,采用多药耐药逆转剂环孢菌素A(CsA)、他莫西芬(TAM)、α 干扰素 (IFN α)单用及CsA与IFN α联合应用研究对STI5 71耐药的逆转作用。结果表明 :K5 6 2 n/VCR细胞对STI5 71有交叉耐药性。CsA ,IFN α ,TAM 3种逆转剂对其均有不同程度的逆转作用 ,逆转倍数分别为 5 18倍、1.6 7倍及 1.82倍。而半量CsA +IFN α对K5 6 2 n/VCR细胞STI5 71的逆转倍数为 34.87倍。结论 :多药耐药基因mdr1的扩增可以导致bcr abl阳性白血病细胞对STI5 71的耐药。多药耐药逆转剂CsA ,TAM和IFN α对STI5 71耐药有明显的逆转作用 ,CsA与IFN α半量联合对K5 6 2 n/VCR细胞的杀伤作用显著超过全量CsA或IFN α的逆转耐药作用。本研究结果提示对STI5 71发生耐药的患者加用CsA和IFN α ,可能会提高其疗效。

抗肿瘤多药抗性核酶转录质粒的构建及其体外切割研究

目的 探讨体外核酶对肿瘤多药抗性相关基因mdr1靶RNA分子的切割作用及其影响因素。方法 利用计算机软件设计能特异切割mdr1 mRNA的锤头状核酶（ribozyme），并构建抗mdr1-ribozyme和靶分子的体外转录质粒，进行体外切割实验。结果 发现抗mdr1-ribozyme能较好地切割mdr1 mRNA。 结论 抗肿瘤多药抗性核酶的体外研究为其体内应用提供了参考，ribozyme有可能成为逆转肿瘤多药抗性的新药物。

mdr1基因的表达和肺癌多药耐药的关系

目的进一步研究ｍｄｒ１基因的表达与原发性肺癌多药耐药的关系。方法应用逆转录多聚酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法对４３例未治、５例化疗后的原发性肺癌和３３例癌旁正常肺组织ｍｄｒ１基因的表达进行分析。结果４８例癌标本中有１５例被观察到ｍｄｒ１基因的过度表达，主要分布在非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）中，仅１例化疗后标本ｍｄｒ１阳性。ｍｄｒ１基因的过度表达与肿瘤大小，淋巴结转移和病期无明显相关性。随访一年后发现，过度表达ｍｄｒ１基因的病例，其复发率高于无过度表达者。结论在未治的原发性肺癌尤其是ＮＳＣＬＣ中可检测到ｍｄｒ１基因的过度表达，并且可能是提示不良预后的指标。

K562和K562/DNR细胞中mdr1基因启动子甲基化状态的分析

目的 分析K5 6 2和K5 6 2 /DNR细胞中mdr1基因启动子甲基化模式及其与P gp表达的关系。方法 用流式细胞术和RT PCR方法检测两个细胞系中mdr1基因的表达 ,用亚硫酸氢钠脱氨基 DNA测序的方法分析mdr1基因启动子甲基化模式。结果 K5 6 2细胞不表达P gp ,mdr1基因启动子甲基化 ;K5 6 2 /DNR细胞P gp表达阳性 ,mdr1基因启动子非甲基化。 结论 K5 6 2和K5 6 2 /DNR细胞mdr1基因启动子甲基化模式不同 ,前者有甲基化修饰 ,后者无甲基化修饰 。