HVT非必需基因区鉴定及含MDVgB基因重组病毒的构建

以火鸡疱疹病毒(HVT)约8.0kb的BamHⅠDNA克隆片段中的B9mHⅠHindⅢ亚克隆片段为同源序列,将大肠杆菌β-半乳糖苷酶(LacZ)基因作为报告基因,通过同源重组,获得了表达LacZ基因产物的重组HVT(LacZ-rHVT)。经体内、体外传代表明重组病毒中的LacZ基因表达稳定;同时证明该亚克隆片段属于HVT复制的非必需基因。在此基础上,将Ⅰ型马立克氏病毒(MDV)糖蛋白B(gB)基因插入该亚克隆片段中,构建了含gB基因的HVT转移载体质粒(pHMDVgB)。将pHMDVgB与LacZ-rHVT DNA重组,通过病毒蚀斑的颜色筛选,获得了含MDVgB基因的重组HVT(MDVgB-rHVT)。采用PCR扩增及Dot blot杂交检测证实MDV的gB基因已插入到HVT基因组中。