肿瘤转移抑制因子CD63/ME491基因在小鼠子宫内膜表达的动态观察

目的了解小鼠动情周期和早孕子宫中CD63/ME491 mRNA和蛋白的表达规律,探讨CD63/ME491在胚胎着床过程中的作用。方法应用RT-PCR和免疫组化技术分别观察CD63/ME491 mRNA和蛋白的表达。结果在整个动情周期中,CD63/ME491 mRNA在动情间期表达最多,而在动情期表达最少,但蛋白质却是在动情前期和间期表达最丰富,子宫内膜上皮和基质细胞均呈阳性。早孕的小鼠子宫组织均有CD63/ME491 mRNA表达,且在胚胎开始植入的第4天表达最多,以后维持在较高的表达水平。CD63/ME491蛋白在妊娠第1~6天子宫内膜腔上皮细胞和腺上皮细胞呈阳性表达。但在基质细胞表达的量和范围却不同：妊娠第1天,无CD63/ME491蛋白的表达;妊娠第2天,子宫内膜基质细胞出现微弱阳性表达;以后CD63/ME491蛋白在基质细胞的表达量和表达范围逐渐增强。结论在胚胎着床过程中,CD63/ME491在小鼠子宫中呈动态表达,提示它可能参与了子宫内膜对滋养层细胞有限侵袭的调控。

胃癌组织中MRP1/CD9、KAI1/CD82和ME491/CD63的表达及意义

目的探讨胃癌组织中MRP1/CD9、KAI1/CD82和ME491/CD63的表达及意义。方法收集223例胃癌组织标本,采用组织芯片和免疫组化技术检测MRP1/CD9、KAI1/CD82和ME491/CD63的表达,并分析其与胃癌临床病理特征的关系以及三者之间的相关性。结果胃癌组织中MRP1/CD9、KAI1/CD82和ME491/CD63阳性表达率分别为58.3%、53.8%和64.1%;MRP1/CD9、KAI1/CD82表达与患者的性别、年龄、分期均无关,与肿瘤的分化程度、淋巴结转移有关,KAI1/CD82表达还与浸润深度有关,而MRP1/CD9表达则与之无关,未发现ME491/CD63表达与胃癌临床病理特征的相关性。MRP1/CD9与KAI1/CD82、ME491/CD63的阳性表达率有显著相关性(r=0.147、0.164,P<0.05),KAI1/CD82与ME491/CD63的阳性表达无相关性。结论 MRP1/CD9、KAI1/CD82的表达可能是判断胃癌生物学行为的重要指标。

应用组织芯片技术检测结直肠癌组织中KAI1/CD82和ME491/CD63的表达

目的研究结直肠癌组织中KAI1/CD82和ME491/CD63的表达水平及其临床病理意义。方法应用组织芯片和免疫组织化学技术检测232例结直肠癌组织中KAI1/CD82和ME491/CD63的表达,并运用统计学方法分析KAI1/CD82和ME491/CD63的表达与结直肠癌各种临床病理特征的关系及两者的相关性。结果 KAI1/CD82在结直肠癌组织中的表达与肿瘤的分化程度和Dukes分期有关(P<0.05),与患者的性别、年龄、浸润深度、淋巴结转移无关(P>0.05)。未发现ME491/CD63表达与结直肠癌病理资料之间差异有统计学意义(P>0.05)。KAI1/CD82和ME491/CD63的表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论 KAI1/CD82在结直肠癌组织中的表达与肿瘤临床病理特征密切相关,可作为结直肠癌的预后因子。KAI1/CD82和ME491/CD63的表达相关。

结直肠癌组织中运动相关蛋白1/CD9和ME491/CD63的表达

目的:研究结直肠癌组织中运动相关蛋白1(MRP1)/CD9和ME491/CD63的表达及其临床意义。方法:应用组织芯片的免疫组织化学技术检测239例结直肠癌组织中MRP1/CD9和ME491/CD63的表达。结果:MRP1/CD9在结直肠癌组织中的表达与肿瘤的分化程度、Dukes分期、淋巴结转移有关(χ2=8.930、7.430和5.857,P均<0.05),而与患者的性别、年龄、浸润深度无关(χ2=1.800,0.014和0.096,P均>0.05)。ME491/CD63的表达与结直肠癌临床病理指标无关。结直肠癌组织中MRP1/CD9和ME491/CD63的表达呈正关联(rP=0.311,P<0.001)。结论:MRP1/CD9可作为结直肠癌的预后因子。结直肠癌组织中MRP1/CD9和ME491/CD63的表达呈正关联。

食管癌组织MRP1/CD9、ME491/CD63的表达与其生物学行为的关系

目的探讨食管癌组织中MRP1/CD9、ME491/CD63表达的临床意义及其与生物学行为的关系。方法应用免疫组化SABC法,检测54例食管癌组织中MRP1/CD9、ME491/CD63的表达,并进行比较分析。结果食管癌组织MRP1/CD9的表达与淋巴结转移、肿瘤的分级、术后存活时间显著相关(P<0.05)。ME491/CD63表达的与食管癌转移、分化、浸润深度、术后生存时间无相关性(P>0.05)。结论MRP1/CD9可作为食管癌的预后指标。

CD63/ME491在植入前小鼠胚胎及延迟着床小鼠子宫的表达

目的研究肿瘤转移抑制因子CD63/ME491 mRNA和蛋白在植入前小鼠胚胎及延迟着床小鼠子宫中的表达规律,探讨其在胚胎着床过程中的作用以及雌激素对其表达的调节。方法应用RT-PCR、免疫荧光、免疫组化技术观察CD63/ME491 mRNA和蛋白的表达规律。结果在植入前小鼠胚胎中均有CD63/ME491 mRNA及其蛋白表达。CD63/ME491 mRNA在桑葚胚及囊胚期表达较丰富,CD63/ME491蛋白表达于各期胚胎细胞的胞膜和胞浆;CD63/ME491 mRNA在延迟着床小鼠子宫均有表达,但从D5到D8呈下降趋势,雌二醇(E2)激活后mRNA的表达显著上升(P<0.05)。CD63/ME491蛋白在延迟着床D5弱表达于上皮下基质细胞,D6～8表达不明显,E2激活后该蛋白明显表达于上皮下基质细胞的胞膜和胞浆。结论1.CD63/ME491在植入前小鼠胚胎中呈动态表达,提示它参与了胚胎的发育过程;2.CD63/ME491在小鼠子宫中的表达可能受雌激素调节。

ME491/CD63对小鼠胚胎发育及着床的影响

目的:研究ME491/CD63对小鼠胚胎体外发育及着床的影响,以及ME491/CD63mRNA及蛋白在假孕D1～8小鼠子宫中的表达规律.方法:①将小鼠8-细胞胚胎培养于含不同浓度ME491/CD63抗体的培养液中,观察胚胎发育,记录囊胚形成及脱透明带的情况.②妊娠D4小鼠宫角注射ME491/CD63抗体,于妊娠D8观察小鼠胚胎植入数量.③用RT-PCR及免疫组织化学技术观察ME491/CD63mRNA及蛋白在假孕小鼠子宫的表达规律.结果:①ME491/CD63抗体可影响胚胎在体外的发育.与对照组相比,在ME491/CD63抗体浓度为1∶400及以上时,囊胚的形成率明显降低(P<0.05);在抗体浓度为1∶800及以上时,胚胎脱带率显著下降(P<0.05),ME491/CD63抗体对胚胎发育的影响具有浓度依赖性.②宫角注射一定量的ME491/CD63抗体可以显著提高小鼠胚胎的着床数[(5.8±2.3)vs(4.1±1.8),P<0.05].③ME491/CD63mRNA在假孕D1～8小鼠子宫中均有表达,于D6表达最丰富.ME491/CD63蛋白在假孕D1～8的子宫腺上皮细胞均有表达,假孕D1～5腔上皮细胞无表达,假孕D6～8,子宫腔上皮细胞阳性表达.结论:①ME491/CD63在小鼠胚胎发育和着床过程中发挥重要作用.②ME491/CD63在妊娠小鼠子宫的表达是非胚胎依赖性的,其表达量的变化可能与胚胎存在与否有一定关系.

胃癌KAI1/CD82、ME491/CD63的表达及与临床病理特征的关系

目的探讨胃癌组织中KAI1/CD82、ME491/CD63的表达及与临床病理的关系。方法应用免疫组化SABC法,检测63例胃癌组织中KAI1/CD82、ME491/CD63的表达,比较其与临床病理的关系。结果无淋巴结转移,病理分化Ⅰ、Ⅱ级,癌组织面积小的胃癌组织KAI1/CD82阳性表达率高于有淋巴结转移、病理分化Ⅲ级、癌组织面积大者,差异有统计学意义(P<0.05);ME491/CD63表达与有无淋巴结转移、病理分级程度、浸润深度、癌组织面积大小,差异无统计学意义。结论 KAI1/CD82可作为胃癌的预后指标。

ME491和KAI1基因抗胰腺癌转移作用的评价

目的探讨不同转移抑制基因ME491和KAI1对胰腺癌抗转移作用的影响。方法2003-11～2004-02在沈阳军区总医院消化内科实验室采用原位杂交法和免疫组织化学技术分别对正常胰腺组织(17例)及胰腺癌组织(50例)中的ME491和KAI1基因及其蛋白表达进行检测。结果ME491和KAI1在胰腺癌组织中的表达高于正常组织,ME491在有转移和没有转移组织中的表达差异无显著性,但KAI1在无转移的组织中的表达高于有转移的组织。结论ME491可能与胰腺癌转移无明显相关,KAI1基因具有明显抗胰腺癌转移作用。

日本血吸虫Sj23DNA突变体疫苗的构建与鉴定

目的对日本血吸虫Sj23DNA进行缺失突变,构建Sj23DNA突变体疫苗,为寻求更佳免疫效果的疫苗奠定基础。方法利用重叠PCR技术将Sj23DNA上与ME491同源的部分碱基缺失,获得Sj23DNA的突变体,将其克隆入真核表达载体pcDNA3的多克隆位点上,构建重组质粒pcD-NA3-Sj23突变体,进行酶切和测序鉴定,并用CLUSTALX和primerpremier软件将测序的结果与Sj23DNA序列进行分析。结果序列分析显示pcDNA3-Sj23突变体缺失序列与原设计一致,双酶切pcDNA3-Sj23突变体获得预期大小的DNA片段。结论成功构建了缺失与ME491同源部分碱基的质粒pcDNA3-Sj23突变体。

日本血吸虫Sj23DNA疫苗的增效研究

目的探讨缺失肿瘤转移有关基因ME491同源序列的日本血吸虫Mr23000膜蛋白基因(Sj23DNA)突变体疫苗的免疫效果。方法将Sj23DNA中与人黑素瘤细胞膜上的ME491同源序列进行基因缺失突变,再将突变基因转染真核细胞人胚肾HEK293细胞,通过间接荧光抗体试验(IFAT)检测其表达情况。将pcDNA3-Sj23突变体经股四头肌注射免疫小鼠(100μg/只),免疫后4周取注射部位肌肉作冰冻切片,IFAT检测目的基因的表达。40只BALB/c小鼠随机分成4组(每组10只),分别经股四头肌注射pcDNA3-Sj23突变体、pcDNA3-Sj23、空白质粒pcDNA3(均100μg/只)和生理盐水(30μl/只)免疫1次。免疫后4周用尾蚴攻击感染(40±2条/只)。第42天剖杀,肠系膜静脉灌注法及挤压法计数成虫,取肝脏计算每克肝组织虫卵数(EPG)。以减虫率和减卵率评价其免疫保护力。结果pcDNA3-Sj23突变体疫苗可在真核细胞HEK293中瞬时表达。pcDNA3-Sj23突变体在小鼠注射部位骨骼肌细胞上出现较强荧光,空白对照组未见特异性荧光。pcDNA3-Sj23突变体获得40.3%减虫率和42.8%减卵率,pcDNA3-Sj23获得33.1%减虫率和28.9%减卵率。两组差异均有统计学意义(P值均<0.05)。结论与pcDNA3-Sj23相比,缺失ME491同源序列的pcDNA3-Sj23突变体疫苗能诱导BALB/c小鼠产生更好的免疫保护效果。