溶血葡萄球菌对抗菌药物的敏感性和mecA基因的检测

目的 了解溶血葡萄球菌的耐药情况 ,以指导临床合理用药。方法 对 133株临床分离的溶血葡萄球菌采用微量肉汤稀释法测定 16种抗菌药物的最低抑菌浓度 (MIC) ,多聚酶链反应 (PCR)法检测mecA基因 ,并与普通药敏试验比较 ,对不相符的菌株进行抑制、诱导试验。结果 133株溶血葡萄球菌对利奈唑胺、万古霉素、去甲万古霉素无耐药 ,对替考拉宁的耐药率为 6 .0 % ;对阿米卡星、异帕米星、米诺环素、利福平、氟氧头孢的耐药性较低 ,耐药率 <2 0 % ;对青霉素、苯唑西林的耐药率 >90 %。除米诺环素、青霉素外 ,住院患者分离菌株的耐药率高于门诊患者分离的菌株。mecA基因阳性率为 90 .2 3% ,且PCR产物经克隆测序证实为mecA特异性产物。对 2株mecA基因阳性而苯唑西林MIC≤ 0 .2 5 μg/ml的菌株进行诱导试验后其MIC≥ 0 .5 μg/ml;对 3株mecA基因阴性而MIC≥ 0 .5 μg/ml的菌株进行抑制试验后其MIC值下降 8倍以上。 结论 溶血葡萄球菌对大多数抗菌药物均有较高的耐药性 ,对糖肽类抗生素的敏感性也在下降 ,需引起临床重视。

MecA基因在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌对β-内酰胺类抗生素耐药中的作用

目的:探讨耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)中MecA基因表达水平对β-内酰胺类抗生素耐药的机制与作用。方法:利用头孢西丁纸片法筛选MRSA,提取MRSA细菌RNA,反转录成cDNA,实时荧光PCR检测MecA基因的表达水平;琼脂稀释法检测MRSA对头孢西丁、苯唑西林、万古霉素、利奈唑胺的最低抑菌浓度。结果:40株MRSA分为低水平耐药组(12株)、中水平耐药组(15株)、高水平耐药组(13株)。MecA基因的表达水平在MRSA低水平耐药组、中水平耐药组、高水平耐药组分别为58.87±30.30,363.37±200.05,1257.72±446.63,MRSA对头孢西丁、苯唑西林的耐药率为100.0%,没有检测到对万古霉素、利奈唑胺耐药的MRSA,但40株MRSA万古霉素的90%的细菌被抑制的浓度(MIC90)为2.0μg/mL。结论:MecA基因的表达水平可能与MRSA对β-内酰胺类抗生素耐药程度相关。

MRSA中mecA及femB基因的检测与耐药相关性

研究femB、mecA基因在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)中的表达与耐药的关系。运用PCR对MRSA的femB、mecA基因进行检测,MRSA耐药检测采用头孢西丁纸片法。40株金黄色葡萄球菌(下简称金葡菌)通过头孢西丁纸片法,检出30株耐头孢西丁的菌株,通过PCR检测这40株金葡菌mecA基因,30株MRSA全部为阳性,femB基因在30株MRSA中全部表达,而甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(MSSA)的未表达。结果可见,PCR能快速准确地鉴定MRSA,mecA基因是MRSA的耐药基因,femB基因是MRSA的耐药相关基因。

儿科血液和脑脊液来源表皮葡萄球菌的抗生素敏感性和mecA/icaA/icaD基因研究

目的了解儿科血液和脑脊液来源表皮葡萄球菌的临床分布特征、抗生素敏感性和mecA/icaA/icaD基因的携带等情况,为临床表皮葡萄球菌感染的诊断和治疗提供一定的实验依据。方法儿科临床分离的表皮葡萄球菌采用VITEK 60全自动微生物分析仪结合GPI卡和GPS卡做常规鉴定和药敏,并运用WHONET5.4和SPSS13.0软件进行统计分析评价;用PCR方法检测mecA、icaA和icaD基因。结果 2010.01—2011.12期间,共检出442株表皮葡萄球菌,主要来自新生儿科110株(24.89%)、消化科72株(16.29%)、ICU 68株(15.38%)和呼吸科58株(13.12%);以血液来源为主(382株,86.43%)。所有表皮葡萄球菌中检出耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE)378株(85.52%),总的β-内酰胺酶阳性率为86.43%。除万古霉素、利奈唑胺和利福平外,MRSE对克林霉素、氨苄西林/舒巴坦、庆大霉素、苯唑西林、复方磺胺甲噁唑、莫西沙星、红霉素、呋喃妥因、左氧氟沙星、青霉素G、四环素的抗生素敏感率低于甲氧西林敏感表皮葡萄球菌(MSSE),其差异有统计学意义(P<0.05)。对MRSE敏感率高的抗生素主要为:利奈唑胺(100%)、万古霉素(100%)、利福平(95.8%)、呋喃妥因(98.7%)、莫西沙星(72.8%)、左氧氟沙星(72%)等,而对MSSE敏感率高的抗生素主要为:利奈唑胺(100%)、万古霉素(100%)、苯唑西林(100%)、呋喃妥因(100%)、利福平(98.4%)、氨苄西林/舒巴坦(98.4%)、莫西沙星(92.2%)、左氧氟沙星(92.2%)等。未发现万古霉素和利奈唑胺耐药的表皮葡萄球菌。血/脑脊液组(412株)和非血/脑脊液组(31株)、2010年(256株)和2011年组(186株)不同来源组表皮葡萄球菌对上述所有抗生素敏感率差异均无统计学意义。mecA、icaA、icaD基因在血培养来源(50株)分别与非血培养来源(23株)和环境皮肤来源(22株)表皮葡萄球菌中的检出率比较无显著性差异。结论儿科临床分离的表皮葡萄球菌主要源自血液标本,以新生儿、消化科、ICU等科室检出率高;以MRSE和耐β-内酰胺酶阳性株为主,往往呈多重耐药,但尚无耐万古霉素和利奈唑胺的表皮葡萄球菌发现;MRSE和MSSE对大部分抗生素敏感性有差异,不同年份、不同标本组来源表皮葡萄球菌对常用抗生素敏感性尚较为稳定;表皮葡萄球菌mecA阳性率极高,icaA和icaD基因阳性率较低。

mecA基因PCR扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的应用m ecA基因PCR扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(m eth ic illin res istan tstaphy lococcus aureus,M RSA)。方法临床分离的70株金黄色葡萄球菌,应用m ecA基因PCR扩增法鉴定M RSA,并与苯唑西林纸片扩散法进行比较。结果70株金黄色葡萄球菌用PCR扩增法和纸片扩散法有6株鉴定有差异,4株m ecA基因阳性而纸片扩散法鉴定为敏感,1株m ecA基因阳性纸片扩散法鉴定为临界耐药,1株m ecA基因阴性却表现为苯唑西林耐药,2种方法符合率为91.43%。结论m ecA基因PCR扩增法可以准确、快速判定M RSA,特别是对隐匿型或低水平耐药菌株的检出有重要的价值。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MecA基因快速检测方法的评价

目的 对MecA基因探针分析快速检出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)的可靠性和临床实用性进行评估。方法 临床分离的 96株金黄色葡萄球菌中 ,4 4株MRSA采用MecA基因探针快速分析 ,并与MecA基因的PCR结果比较。结果 MecA基因探针快速分析鉴定MRSA的灵敏度为 97.7% ,特异性为 10 0 %。结论 该方法灵敏度高 ,特异性强 ,简单易行 ,90min即可完成 ,是常规实验室检出MRSA快速而可靠的分析方法。

金黄色葡萄球菌中mecA基因的检测及其耐药相关性

目的探讨mecA基因在临床分离金黄色葡萄球菌(SA)中的表达水平与耐药的关系。方法收集临床分离的SA菌株186株,采用纸片扩散法(K-B法)进行药敏试验,并提取DNA,运用PCR扩增mecA基因。结果耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的检出率为30.65%(57/186),其中56株MRSA和129株甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)中有10株检出mecA基因阳性;除对万古霉素、利奈唑胺敏感外,MRSA对其他抗菌药物耐药率均高于MSSA,携带mecA基因的菌株抗菌药物耐药率高于不携带mecA基因的菌株,两组差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SA临床分离菌株中含mecA基因的菌株对多种抗菌药物耐药,可见mecA基因在SA的耐药机制中发挥着重要作用。

浙江、江西地区MRSA耐mecA、qacA/B基因检测

目的了解浙江、江西地区临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(meticillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA)中mecA基因及qacA/B基因存在状况. 方法在2004年1～12月间分别从浙江、江西地区住院患者中分离到42株和31株MRSA,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析技术检测mecA基因及qacA/B基因. 结果 73株MRSA中mecA基因均为阳性(100%),qacA/B基因34株(46.6%)阳性,其中浙江地区qacA/B基因阳性率为52.4%,江西地区为38.7%. 结论浙江、江西地区临床分离的MRSA中mecA基因和qacA/B基因携带率很高或较高.

mecA、femA基因PCR联合扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的 探讨 m ec A、fem A基因 PCR联合扩增快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA )的敏感性及特异性。方法 用纸片扩散法及 m ec A、fem A基因 PCR联合扩增检测 178株葡萄球菌中的 MRSA,并与琼脂稀释法的结果比较。结果 纸片扩散法筛检 MRSA (耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌 ,MRCNS)的敏感性、特异性分别为 94 .4 % (89.5 % )、92 .4 % (73.7% )。在金黄色葡萄球菌中若以 mec A基因阳性为判定 MRSA的指标 ,则敏感性、特异性分别为 91.7%、95 .5 %。在 178株葡萄球菌中若以 mec A、fem A基因阳性作为判定 MRSA的指标 ,特异性提高到 97.9%。结论 PCR m ec A、fem A基因联合扩增既可用于筛检 MRSA,又可免去常规生化鉴定 ,具快速。

耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌mecA基因检测分析

目的:调查耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)耐药现状,分析其耐药表型与基因型的关系,为临床合理选用抗菌药物提供依据。方法:收集临床分离的86株凝固酶阴性葡萄球菌,采用头孢西丁纸片法检测耐药表型、聚合酶链反应(PCR)检测mecA基因,并将两种结果进行对比分析。结果:86株凝固酶阴性葡萄球菌中头孢西丁纸片法阳性64株,检出率为74.4%;mecA基因阳性58株,阳性率为67.4%;其中有1株头孢西丁纸片法阴性而mecA基因阳性,7株头孢西丁纸片法阳性而mecA基因阴性。结论:本地区耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌耐药状况严重;头孢西丁纸片法与PCR检测mecA基因一致率90.7%;PCR检测mecA基因可快速准确判定耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MecA基因的鉴定分析

目的探讨临床分离金黄色葡萄球菌中PCR检测MecA基因用于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)鉴定的评价。方法对临床分离的120株金黄色葡萄球菌,根据PBP2a编码基因设计MecA引物采用PCR快速检测MRSA的决定基因MecA。结果MecA基因片段经PCR扩增,可见MRSA扩增出一条310bp大小的DNA片段,而敏感株和金黄色葡萄球菌标准株ATCC25923均未出现特异长度的DNA片段;在临床分离的120株金黄色葡萄球菌中,MecA检测阳性率为45.0%(54/120)。结论采用PCR方法对金黄色葡萄球菌临床分离株中的MecA基因进行检测,对MRSA的快速、及时检出,有效控制MRSA造成的感染,指导临床用药,限制其传播等具有重要的现实意义。

头孢西丁纸片法检测mecA基因介导的MRS

目的评价应用头孢西丁纸片扩散法检测mecA基因介导的耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)。方法分别用头孢西丁纸片法扩散法、苯唑西林纸片扩散法、苯唑西林琼脂稀释法、VITEK微生物自动分析系统及聚合酶链反应(PCR)mecA基因检测4种方法对MRS进行检测比较,最低抑菌浓度(MIC)测定应用VITEK微生物自动分析系统GPS卡。结果96株葡萄球菌属(金黄色葡萄球菌16株、凝固酶阴性葡萄球菌80株)中苯唑西林纸片法扩散法、苯唑西林琼脂稀释法、VITEK微生物自动分析系统3种方法检出MRS菌株54株(金黄色葡萄球菌2株、凝固酶阴性葡萄球菌52株),而PCR法检出mecA基因48株(金黄色葡萄球菌2株、凝固酶阴性葡萄球菌46株),头孢西丁纸片法扩散法与PCR法一致。结论头孢西丁纸片扩散法与mecA基因检测法高度一致,是筛选和确认mecA基因介导的MRS一种可靠的方法。

用PCR扩增法检测耐甲氧西林葡萄球菌的mecA基因

目的 应用PCR扩增法检测耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的mecA基因。方法 临床分离的 161株葡萄球菌 ,应用PCR扩增法鉴定MRS的mecA基因 ,并与Oxacillin纸片扩散法进行比较。结果 161株葡萄球菌用Oxacillin纸片扩散法和mecA基因法检测MRS有 4株菌有差异 ,mecA基因法鉴定阴性而Oxacillin纸片扩散法鉴定为耐药株 ,3株纸片扩散临界耐药 ,mecA基因法鉴定阳性 ,两种方法的符合率是96 89%。结论 mecA基因检测技术可以准确、快速判定MRS ,特别是在鉴定纸片扩散法临界耐药株具有优势。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MecA基因的实时荧光定量PCR方法学评价

目的 评估实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测临床标本中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）MecA耐药基因的价值。方法 选择该院2013年6~12月125份临床标本,包括血液40份,痰液52份,创面分泌物33份进行FQ-PCR检测和细菌鉴定,分析结果符合率,以检测FQ-PCR的灵敏度及特异性。结果 FQ-PCR的灵敏度为0.159pg/μL,检测经细菌培养鉴定的菌株,特异性达到100%,与临床标本结果符合率为97.6%。结论 FQ-PCR检测MRSA的MecA基因更加方便、快速,且灵敏度和特异性等性能指标均比较理想,与细菌鉴定结果符合率较高,适合临床广泛应用。

Nuc和mecA基因在金黄色葡萄球菌及其甲氧西林耐药性检测中的初步应用

目的为获得金黄色葡萄球菌对甲氧西林的耐药信息,评估通过PCR扩增nuc基因、mecA基因检测金黄色葡萄球菌及其甲氧西林耐药性的可行性。方法收集获得63株临床分离鉴定的金黄色葡萄球菌,采用传统药敏检测方法进行菌株药敏测试;再用PCR方法检测菌株是否携带nuc基因和mecA基因,以传统药敏检测结果为参照,评估用PCR扩增技术检测金黄色葡萄球菌及其甲氧西林耐药性的可行性。结果 1.样本菌株中有24株为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphyococcus aureus,MRSA),39株为甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(Methicillin-sensitive Staphyococcus aureus,MSSA)。来自重症医学科的分离株中MRSA数量较多。2.样本菌株nuc基因携带率为85.7%,其中nuc基因在MRSA菌株中的携带率为87.50%,在MSSA菌株中携带率为84.62%;3.样本菌株mecA基因的携带率为19.05%,其中MRSA菌株的mecA基因携带率为50.0%,MSSA中均不携带mecA基因。来自重症医学科的MRSA中同时携带mecA基因和nuc基因的比例为77.78%。结论用PCR技术检测nuc基因、mecA基因来快速鉴定金黄色葡萄球菌及其甲氧西林耐药性可能存在一定比例的误诊结果。

氯-IB-MECA合成的研究进展

2-氯-N6-(3-碘苄基)腺苷-5'-N-甲基尿嘧啶(氯-IB-MECA)是由Can-Fite公司开发的具有选择性的A_(3)腺苷受体激动剂,可同时治疗非酒精性脂肪性肝病、非酒精性脂肪性肝炎和肝细胞癌,具有广阔的市场前景。根据起始原料的不同对氯-IB-MECA合成方法进行了系统讨论。方法1以1-O-甲基-β-D-呋喃核糖苷为起始原料,经选择性羟基保护、氧化反应、酯化反应、酰胺化、酸化及脱保护得到氯-IB-MECA。方法2以2-乙酰氧基-5-((苯甲酰氧基)甲基)四氢呋喃-3,4-二基二苯甲酸酯为原料,经Vorbruggen糖苷化反应、亲核取代反应、保护基交换、氧化反应、羧酸酰胺化得到氯-IB-MECA。方法3以四乙酰核糖为原料,经亲核取代反应、脱乙酰基、邻二羟基保护、伯醇氧化、羧酸酰胺化和水解反应得到氯-IB-MECA。方法4以β-D-呋喃呋喃糖醛酸甲酯三乙酸酯为原料,经亲核取代、酯基酰胺化和脱乙酰基后得到氯-IB-MECA。经过比较认为,方法4原料易得,合成步骤少,反应和分离条件温和,收率高,更适合氯-IB-MECA的工业化生产。

PCR扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的mecA基因

目的应用mecA基因PCR扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)。方法对临床分离的84株金黄色葡萄球菌,应用mecA基因PCR扩增法鉴定MRSA,并与苯唑西林纸片扩散法和头孢西丁纸片扩散法进行比较。结果84株金黄色葡萄球菌中,41株金黄色葡萄球菌的mecA基因扩增呈阳性,其中有1株表现为对苯唑西林敏感;苯唑西林纸片扩散法检出42株阳性,其中有2株mecA基因呈阴性。头孢西丁纸片扩散法与PCR扩增法的试验结果完全符合。结论mecA基因PCR扩增法可以准确、快速判定MRSA。

头孢西丁耐药的葡萄球菌mecA基因检测及耐药性分析

目的对头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的可靠性进行评价,并分析头孢西丁耐药的葡萄球菌即MRS感染及耐药性情况,以指导临床合理用药。方法临床分离葡萄球菌310株,以PCR检测葡萄球菌mecA基因为判断MRS的标准,按美国国家临床实验室标准化研究所(CLSI/NCCLS)标准操作规程进行头孢西丁、苯唑西林纸片扩散法(K-B法)药敏试验检测MRS,同时检测MRS及甲氧西林敏感葡萄球菌(MSS)对10种常用抗生素的耐药性。结果在310株葡萄球菌中金黄色葡萄球菌198株,凝固酶阴性葡萄球菌112株,经mecA基因检测,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)为57.1%(113/198),耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)为62.5%(70/112);头孢西丁纸片扩散法检测MRSA的敏感性和特异性均为100%,检测MRCNS敏感性为98.6%,特异性为100%;除复方新诺明和万古霉素外,MRS对其余8种抗生素的耐药率明显高于MSS,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论头孢西丁纸片扩散法操作简便,结果可靠,可作为临床实验室检测MRS的常规方法;MRS的感染发生率及耐药性较高,且对各类抗生素多重耐药,需加强其耐药性监测。

耐甲氧西林葡萄球菌mecA基因的LAMP检测方法研究

mecA是耐甲氧西林葡萄球菌携带的耐药基因。本实验根据克隆的mecA基因序列,在保守区设计了一套环介导等温扩增(LAMP)引物,通过条件优化,建立了耐甲氧青霉素mecA基因LAMP检测方法,其最佳工作条件为:甜菜碱浓度为0.8 mol/L,Mg2+浓度为20 mmol/L,反应温度63℃,时间50 min。此方法可在60 min左右完成对mecA基因的检测,特异性好,mecA基因的LAMP检测灵敏度比PCR高100倍。对38株葡萄球菌分离株的mecA基因的检测表明,阳性携带率为44.7%。