siRNA-Med19对人肺癌A549细胞Med19转录、表达的影响

目的研究siRNA-Med19对人肺癌A549细胞Med19的影响。方法利用前期已合成的siRNA-Med19慢病毒载体,感染A549细胞,并以无病毒感染组作为空白对照组,以慢病毒载体感染组作为阴性对照组。采用荧光图片和白光图片对比方法判断细胞的感染率;RT-PCR法检测细胞Med19mRNA的转录水平;Western印迹法检测细胞Med19蛋白表达水平。结果慢病毒载体对人肺癌A549细胞的感染率在80%以上,siR-NA-Med19慢病毒感染组Med19mRNA转录水平明显降低,敲减效率大于70%,Med19蛋白表达量也明显降低。结论siRNA-Med19慢病毒载体可以高效感染人肺癌A549细胞,siRNA-Med19对A549细胞Med19的转录和表达具有明显的抑制和消减作用。

Med19基因沉默对胃癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的研究Med19基因在胃癌MGC-803细胞中沉默后对细胞增殖和周期的影响。方法应用shRNA慢病毒载体感染胃癌MGC-803细胞沉默Med19基因,通过MTT和克隆形成实验观察Med19基因在胃癌细胞增殖中的作用,并用流式细胞术验证抑制Med19基因对细胞周期的影响。结果构建的shRNA慢病毒载体感染MGC-803细胞后细胞增殖能力显著降低、细胞克隆形成能力明显减弱,同时,细胞周期阻滞于G1期。结论Med19基因沉默后胃癌细胞的增殖能力和细胞周期均受到显著影响,提示Med19在肿瘤形成过程中具有重要作用。

Med19在人胃癌中的表达及其临床意义

目的研究Med19基因在人胃癌组织中的表达情况及临床意义。方法应用免疫组化和RT-PCR方法检测Med19基因在胃癌组织、癌旁胃组织及正常胃组织中的表达。结果胃癌组织中Med19表达阳性率为71.7%(43/60),显著高于癌旁胃组织和正常胃组织(P<0.01)。癌旁胃组织和正常胃组织中Med19多为阴性表达,少数为弱阳性表达,二者间差异无显著性(P>0.05)。Med19的表达与胃癌的细胞分化程度、淋巴结转移情况、TNM分期相关(P<0.05),而在不同年龄、性别、肿瘤大小、浸润深度的胃癌样本中表达差异无显著性(P>0.05)。结论Med19参与了胃癌的发生、发展过程,有望成为一个新的肿瘤治疗靶向因子。

沉默Med19对人乳腺癌裸鼠成瘤的影响

目的:通过观察慢病毒介导的siRNA沉默Med19基因对人乳腺癌裸鼠成瘤的影响,探讨Med19在乳腺癌发生发展中的作用。方法:利用前期已稳定感染Med19-siRNA慢病毒载体的人乳腺癌MCF-7细胞,采用Westernblotting方法检测Med19蛋白的沉默效果。稳定感染Med19-siRNA慢病毒载体的人乳腺癌MCF-7细胞接种于BALB/c裸鼠背侧皮下,观察裸鼠成瘤情况和移植瘤生长情况,并绘制生长曲线。以慢病毒空载体感染组作为阴性对照组。结果:所构建的Med19-siRNA慢病毒载体能有效抑制MCF-7细胞Med19蛋白的表达,蛋白表达水平下降了62%,Med19基因沉默组较空载体慢病毒感染组瘤体生长速度慢(t值分别为4.843、6.291、5.317,均P<0.01),肿瘤终体积分别为(620.08±263.07)mm3和(1406.77±351.14)mm3,终重量分别为(0.20±0.18)g和(0.67±0.27)g,差异有统计学意义(t值分别为4.399、3.615,均P<0.01)。结论:Med19基因沉默能有效抑制人乳腺癌裸鼠成瘤和移植瘤生长,表明Med19在乳腺癌发生发展中起到重要作用,并有可能成为乳腺癌靶向治疗的潜在靶点。

MED19基因在胃癌SGC-7901细胞中的功能研究

目的研究慢病毒MED19-shRNA包装颗粒感染胃癌SGC-7901细胞后对其细胞增殖和细胞周期的影响。方法应用MED19-shRNA-pLVTHM慢病毒载体感染胃癌SGC-7901细胞,采用RT-PCR和Western blot的方法检测MED19基因的沉默效率,通过MTT和克隆形成实验研究MED19基因在SGC-7901细胞增殖中的作用,并用流式细胞技术试验检测MED19基因沉默后对细胞周期的影响。结果成功构建的MED19-shRNA慢病毒载体并使MED19基因沉默成功,感染SGC-7901细胞后细胞增殖能力显著降低、细胞克隆形成能力明显减弱、细胞周期阻滞于S期。结论MED19基因沉默后对胃癌SGC-7901细胞增殖和细胞周期均有显著影响。

沉默Med19的表达对结肠癌Caco-2细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨RNA干扰Med19的表达对结肠癌Caco-2细胞增殖和凋亡的影响。方法:构建靶向Med19的干扰质粒pSilencer-Med19-siRNA,转染Caco-2细胞后,RT-PCR检测Caco-2细胞中Med19 mRNA的表达,Western blotting检测Caco-2细胞中Med19蛋白的表达,MTT检测pSilencer-Med19-siRNA转染后Caco-2细胞的增殖,流式细胞术分析Caco-2细胞的凋亡。结果:RT-PCR及Western blotting检测结果显示,pSilencer-Med19-siRNA转染后Caco-2细胞中Med19 mRNA及蛋白表达水平上均显著下降(P<0.01);MTT及流式细胞术检测结果表明,与pSilencer对照组相比,pSilencer-Med19-siRNA组Caco-2细胞的增殖明显受到抑制[7 d时:(0.86±0.09)%vs(1.38±1.10)%,P<0.01],且细胞凋亡比例明显升高[(22.72±2.85)%vs(7.23±1.29)%,P<0.01]。结论:RNA干扰沉默Med19的表达可抑制结肠癌Caco-2细胞的增殖,促进其凋亡,提示Med19可作为结肠癌治疗的潜在靶点。

Med19过表达慢病毒载体的构建及鉴定

目的：构建含Medl9基因的过表达慢病毒载体。方法：用PCR技术获得Medl9基因片段，将其连接入酶切后的线性慢病毒载体．转化感受态细胞进行PCR及测序鉴定。脂质体转染法共转染293T细胞，荧光显微镜及Westernblot检测转染效率。包装成慢病毒，实时定量PCR检测病毒滴度。结果：成功获取Medl9基因。测序证实所获取基因序列完全正确。荧光显微镜以及WesternNot检测均证实pGC-FU-Med19携有正确的Medl9基因，并能在293T细胞中表达。实时定量PCR检测病毒滴度为2×10^9TU／mL。结论：成功构建Medl9基因慢病毒表达载体，为进一步研究其生物学功能奠定了基础。

慢病毒介导的Med19表达下调提高舌鳞癌细胞顺铂敏感性

目的:探讨慢病毒介导的中介体19(Med19)表达下调对舌鳞癌细胞顺铂敏感性的影响。方法: qRT-PCR和Western blot检测舌鳞癌细胞和正常口腔上皮细胞中Med19表达变化。在舌鳞癌细胞中转染Med19 shRNA,以顺铂处理下调Med19的舌鳞癌细胞,MTT和流式细胞术测定增殖和凋亡,Western blot检测活化型Caspase-3(C-Caspase-3)、活化型Caspase-9(C-Caspase-9)、Bcl-2相关X蛋白( Bax)蛋白水平,Western blot检测胞浆和线粒体中细胞色素C(Cyt-c)蛋白水平。结果: Med19在舌鳞癌细胞中表达水平升高。Med19 shRNA转染可以下调舌鳞癌细胞中Med19的表达水平。下调Med19或顺铂处理后的舌鳞癌细胞增殖能力均降低,细胞凋亡率升高,细胞中C-Caspase-3、C-Caspase-9、Bax蛋白水平升高,胞浆中Cyt-c蛋白表达水平升高,线粒体中Cyt-c蛋白表达水平降低。下调Med19联合顺铂处理对舌鳞癌细胞增殖、凋亡及C-Caspase-3、C-Caspase-9、Bax和线粒体释放Cyt-c影响作用更大。结论:下调Med19能够提高舌鳞癌细胞顺铂敏感性。

MED19基因对体内胃癌细胞增殖抑制作用机制的探讨

目的探讨MED19基因靶向RNA干扰重组慢病毒载体对体内胃癌组织抑制的机制。方法对3组(control组、negative组及shRNA组)完成胃癌成瘤实验的裸鼠离体的胃癌组织SGC-7901细胞分别采用实时聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹(Western blot)法检测胃癌组织细胞中MED19基因的沉默效率,研究MED19基因沉默在胃癌SGC-7901细胞成瘤小鼠胃癌组织细胞增殖中的作用,采用噻唑蓝(MTT)法检测MED19基因沉默对小鼠胃癌组织细胞增殖的影响,并用流式细胞术检测MED19基因沉默后对胃癌组织细胞增殖周期的影响。结果 shRNA组裸鼠胃癌组织SGC7901细胞中MED19蛋白的表达水平低于negative组和control组(P﹤0.05);与control组和negative组相比,shRNA组裸鼠胃癌组织SGC-7901细胞的增殖能力在第3~5天降低(P﹤0.05);shRNA组胃癌组织SGC-7901细胞的G1期细胞所占比例高于control组和negative组(P﹤0.05)。结论 MED19基因靶向RNA干扰重组慢病毒载体对胃癌SGC-7901细胞成瘤小鼠胃癌组织细胞的增殖和细胞周期均有明显影响。

MED19基因靶向RNA干扰重组慢病毒对体内胃癌细胞的增殖抑制作用

目的探讨MED19基因靶向RNA干扰重组慢病毒对体内胃癌细胞的治疗效果。方法将SGC7901胃癌细胞株分为3组:空白对照(正常培养的SGC7901胃癌细胞,不用病毒颗粒转染)标记为BC组,阴性对照(感染阴性对照病毒颗粒)标记为NC组,病毒干扰(感染MED19-sh RNA慢病毒颗粒)标记为Ⅵ组。36只实验用裸鼠随机分为3组,以BC、NC和Ⅵ标记,分别接种对应的3组不同的细胞,观察接种后3组裸鼠体内胃癌细胞的增殖情况。每7天测量1次肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线图。成瘤35 d后的裸鼠,统一以脱颈法处死,分离出完整瘤体,分析3组瘤体的平均质量差异及病理类型、形态学变化。结果裸鼠皮下接种肿瘤细胞后,生长状态均良好,裸鼠的总成瘤率为94.4%。肿瘤生长曲线显示,Ⅵ组裸鼠体内肿瘤瘤体生长的速度明显低于BC组和NC组。3组瘤体经常规HE染色后光镜下观察,确认肿瘤的病理类型为低分化胃腺癌,Ⅵ组癌组织在光镜下显示细胞的形态学变化明显,细胞缩小、皱缩,呈片状坏死等征象。结论沉默MED19表达,对肿瘤的生长、增殖有明显的抑制作用。

Med19在舌鳞癌组织中的表达及对舌鳞状细胞癌Tca8113增殖的影响

目的通过检测Med19在舌癌组织表达的基础上,探讨Med19表达下调对Tca8113细胞增殖的影响。方法应用免疫组织化学染色方法检测Med19在舌鳞癌组织及舌乳头状瘤组织中的表达,分析Med19的表达分布及表达水平;构建Med19 si RNA并转染人舌鳞癌细胞Tca8113,应用MTT检测细胞增殖的改变。结果免疫组织化学染色结果显示Med19在舌癌组织中高表达;建立si RNA-Med19重组慢病毒载体并转染Tca8113,MTT结果显示Med19下调可以抑制细胞增殖。结论 Med19在舌鳞状细胞癌中高表达;通过si RNA-Med19慢病毒载体转染Tca8113细胞可以抑制细胞增殖,为后续体内实验奠定坚实的基础。

Med19在人胆管癌中的表达及意义

目的研究Med19基因在人胆管癌组织中的表达及其意义。方法应用免疫组化和R T-PCR检测Med19基因在胆管癌组织、癌旁组织和正常组织中的表达。结果胆管癌组织中的Med19表达显著高于癌旁组织和正常组织,而癌旁组织和正常组织间Med19表达无明显差异。Med19表达高低与肿瘤分化程度相关,但在不同性别、年龄、TNM分期、淋巴结转移之间无明显差异。结论 Med19参与了胆管癌的发生、发展过程,有可能成为胆管癌的诊断指标和治疗靶点。

肺癌组织Med19和Ki-67蛋白相关性研究及临床意义探讨

目的:探讨肺癌组织Med19和Ki-67蛋白相关性研究及临床意义。方法:采用免疫组化实验对50例肺癌患者组织中Med19和Ki-67蛋白表达进行检验。结果:癌周边组织Med19与癌组织内部表达具有统计学差异,以细胞核着色为主,阳性表达率超过80%。另外,研究发现Med19蛋白表达与肺癌患者分期、淋巴结转移具有相关性。结论:Med19与Ki-67表达呈现相关性,并关系到肺癌的发展和增殖,作为潜在癌基因在癌症进展中起到一定作用。

Med19基因沉默对p53野生型和突变型乳腺癌细胞紫杉醇化疗疗效的影响

目的:探讨下调中介体（mediator,Med）19表达是否增加紫杉醇（pacliatxel,PTX）对p53野生型和突变型乳腺癌细胞化疗的疗效。方法:构建Med19 RNA干扰（RNAi）慢病毒,分别感染p53野生型的乳腺癌细胞MCF-7和p53突变型的乳腺癌细胞MDA-MB-231,两种细胞均分为Med19基因敲减组（KD组:细胞感染pGcscil-Med19-si RNA-GFP）、空载体感染组（NC组:细胞感染pGcscil-Med19-NC-GFP）、对照组（CON组:未感染慢病毒的乳腺癌细胞）,荧光显微镜观察慢病毒感染效率。Western blotting检测Med19基因沉默后各组细胞内P53、磷酸化P53（p P53）、P21蛋白表达水平的变化。紫杉醇分别作用于Med19基因沉默前后的MCF-7和MDA-MB-231细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率的变化,流式细胞术检测细胞周期和凋亡率的变化。结果:KD组和NC组细胞的荧光感染效率均大于90%,表明获得了满意的感染效率。与CON组和NC组相比,两种细胞KD组的Med19蛋白表达水平均下降,差异有统计学意义（均P<0.05）。MCF-7细胞KD组P53、p P53、P21蛋白表达上调,差异有统计意义（均P<0.05）。在0.0150μg/ml范围内,紫杉醇抑制两种乳腺癌细胞的生长增殖并呈浓度依赖性（P<0.05）,对KD组的抑制率和细胞凋亡率均高于NC组及CON组,差异有统计学意义（均P<0.05）;但MDA-MB-231细胞各组间抑制率差异无统计学意义（均P>0.05）。10μg/ml紫杉醇导致两种细胞的KD组和NC组均出现G2/M期阻滞,并且MCF-7细胞KD组G0/G1期细胞较NC组显著增加（P<0.05）。结论:Med19基因沉默增强紫杉醇对p53野生型乳腺癌MCF-7细胞化疗的疗效,其机制可能为增强了p53基因的表达活化,通过其下游基因p21调节细胞周期、促进细胞凋亡。

Med19基因表达变化在骨肉瘤Saos2细胞增殖中的功能研究

背景与目的:最近有多项研究表明,Med19基因参与多种肿瘤的形成,如肺癌、乳腺癌和胃癌等。本研究旨在探讨Med19基因表达水平的变化对骨肉瘤Saos2细胞株增殖能力和细胞周期的影响。方法:构建Med19-siRNA及Med19-OE(overexpression)慢病毒载体感染骨肉瘤Saos2细胞,用real time-PCR验证Med19基因的沉默效率及过表达效率,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞周期,BALB/c裸鼠移植瘤实验检测肿瘤生长情况。结果:转染Med19-siRNA后细胞增殖能力较阴性对照组显著降低(P<0.05),G0/G1期细胞由(36.93±2.96)%上升至(54.95±2.49)%(P<0.05)。转染Med19-OE后细胞增殖能力较阴性对照组显著增加(P<0.05),S期细胞由(13.44±0.76)%上升至(16.50±1.67)%(P<0.05)。BALB/c裸鼠移植瘤实验显示,Med19-siRNA组肿瘤体积及体质量均较对照组显著缩小和降低(P<0.05)。结论:Med19基因沉默可显著抑制Saos2细胞体外的增殖能力,并抑制裸鼠Saos2细胞移植瘤的生长,其抑制增殖作用与诱导G0/G1期阻滞有关。过表达Med19基因可促进Saos2细胞增殖,其促进增殖作用与诱导细胞由G0/G1期向S期过渡有关。

MED19(LCMR1)基因在肿瘤中的表达及生物学功能的研究进展

中介体复合物(mediator complex subunit,MED)是广泛存在于酵母和哺乳动物体内的一种高度保守的多蛋白体复合物,参与转录因子与RNA聚合酶Ⅱ(RNA polymeraseⅡ,RNA pol-Ⅱ)间的信息传递过程。MED19作为人中介体复合物的亚基之一,与人生长发育,尤其是肿瘤发生发展密切相关。本文对人MED19基因的结构和生物学功能研究进展进行综述,为后续MED19研究提供依据与思路。

Med19基因在恶性肿瘤中的研究进展

恶性肿瘤是严重危害人类健康的疾病,随着人们生活方式、生活环境的改变,恶性肿瘤的发病率越来越高,死亡率一直居于首位。肿瘤的发生、发展主要与癌基因的突变、扩增、过度表达以及抑癌基因的突变、失活等密切相关。在人体内Med19基因已经定义为肿瘤相关基因,目前已发现Med19与多种恶性肿瘤的增殖、转移及周期调控有关。现就Med19基因在恶性肿瘤中的研究进展作如下综述。

利用TCGA数据库分析MED19基因在肝癌中的表达及临床意义

目的:探讨MED19在肝癌患者中的表达及与预后的关系。方法:基于TCGA数据库收集相关数据,挖掘MED19在肝癌组织和正常组织、不同临床特征和免疫分型中的表达差异。比较MED19在免疫分型中的表达差异,并基于“ESTIMATE”算法分析其表达水平与肿瘤微环境的相关性。通过Kaplan-Meier法以及Cox回归分析MED19表达量对肝癌患者生存期的影响。通过基因集富集分析(GSEA)并且筛选差异基因进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,探讨MED19的表达对其他基因集的影响。利用Cellminer数据库数据分析MED19表达量与药物敏感性的关系。结果:在肿瘤组织中MED19的表达增加(W=1422,P<0.001),且MED19表达量与临床分期(stageⅡvs.stage I:W=5828,P<0.01,stageⅢvs.stage I,W=5707,P<0.01)、病理分级(G3 vs.G1:W=2656,P<0.05)和T分期(T2 vs.T1:W=6485,P<0.01,T3 vs.T1:W=5758,P<0.01,T4 vs.T1:W=770,P<0.05)相关。不同免疫亚型中MED19的表达存在差异,且MED19高表达引起基质得分减少(W=14363,P<0.01)。MED19高表达使肝癌患者生存率下降(χ^(2)=11.7,P<0.01),且是患者生存的独立危险因素(HR=1.123,P<0.01)。GSEA结果显示MDE19高表达组在癌症相关通路富集,此外MED19高表达组和低表达组差异基因的GO和KEGG分析表明,MED19高表达组中的上调表达基因也主要在细胞周期等相关通路富集。药物敏感性分析显示MED19在癌症中高表达与克拉屈滨(r=0.331,t=2.671,P=0.010)、白屈菜红碱(r=0.313,t=2.507,P=0.015)等药物的敏感性呈正相关。结论:MED19在肝癌中表达升高,且与肝癌的预后不良相关。

肺癌组织Med19和Ki-67蛋白表达临床意义的研究

目的:探讨肺癌组织中Med19蛋白表达的临床意义及其与Ki-67表达的关系。方法:应用免疫组织化学技术检测56例肺癌患者肺组织Med19和Ki-67蛋白的表达。结果:癌旁组织Med19蛋白表达的阳性表达率为1.8%(1/56)。癌组织Med19蛋白表达强度明显增加,以细胞核着色为主,阳性表达率为80.4%(45/56)。癌组织Med19阳性率显著高于癌旁组织,提示Med19蛋白表达与肺癌发生有关,P<0.05。Med19蛋白表达与肺癌患者临床分期和淋巴结转移有关,P<0.05;但与年龄、性别、病理类型和组织分级无关,P>0.05。统计分析结果显示,癌组织Med19蛋白与Ki-67表达正相关,P=0.008。结论:Med19与Ki-67表达呈正相关。Med19与肺癌发生、发展和增殖有关,可能作为潜在癌基因在肺癌进展中起一定作用,有望成为一个新的肿瘤治疗靶点。

非小细胞肺癌组织Med19蛋白表达与DNA倍体和SPF相关性分析

目的:探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织Med19蛋白表达与DNA倍体和S期比例(S phase fraction,SPF)的关系。方法:收集山东省肿瘤医院2010-02-01-2011-07-31手术治疗、临床病理资料完整的56例NSCLC组织,应用免疫组化技术检测56例NSCLC组织中Med19蛋白水平,应用流式细胞术检测癌组织DNA倍体和SPF。结果:56例NSCLC组织中Med19阳性45例,阴性11例,二倍体14例,异倍体42例。14例二倍体肿瘤中Med19蛋白表达阴性6例,阳性8例;42例异倍体肿瘤中Med19蛋白表达阳性37例,阴性5例,异倍体肿瘤Med19蛋白阳性表达显著高于二倍体肿瘤,χ2=6.373,P=0.012。27例低SPF的患者中Med19蛋白表达阴性9例,阳性18例;29例高SPF的患者中Med19蛋白表达阴性2例,阳性27例,高SPF的患者肿瘤组织Med19蛋白阳性表达显著高于低SPF患者,P=0.018。结论:Med19作为潜在癌基因在NSCLC细胞增殖和多倍体形成中起一定作用,有望成为一个新的肿瘤治疗靶点。