LncRNA MEF2C-AS1对卵巢癌生物学功能的影响及机制研究

目的:探索LncRNA MEF2C-AS1在卵巢癌恶性表型中的生物学功能及机制。方法:RT-qPCR法检测LncRNA MEF2C-AS1在人卵巢癌细胞及卵巢上皮细胞株中的表达水平。用LncRNA MEF2C-AS1过表达慢病毒LV-MEF2C-AS1及阴性对照病毒LV-NC转染A2780细胞,将细胞分为LV-MEF2C-AS1、LV-NC组,分别通过CCK-8实验、克隆形成实验、Transwell侵袭实验、划痕实验及流式细胞术检测两组A2780细胞的增殖活力、克隆形成能力、侵袭能力、迁移能力及细胞的周期分布和凋亡情况。Western blot实验检测两组细胞中细胞周期相关蛋白CyclinD1和细胞凋亡相关蛋白Caspase 3、Bcl-2、Bax及GRB7水平。结果:卵巢癌SKOV3、OVCAR3和A2780细胞中LncRNA MEF2C-AS1水平显著低于卵巢上皮IOSE80细胞,在A2780细胞中表达最低(P<0.05);LV-MEF2C-AS1组的细胞增殖活力、克隆形成数、细胞迁移能力及侵袭能力均明显低于LV-NC组(P<0.05),凋亡细胞数、凋亡率显著高于LV-NC组(P<0.05);与LV-NC组相比,LV-MEF2C-AS1组处于S期和G2期的细胞百分比较高,而处于G1期细胞百分比较低(P<0.05);LV-MEF2C-AS1组卵巢癌A2780细胞中Bax和Caspase 3水平显著高于LV-NC组,而Bcl-2、CyclinD1和GRB7水平明显低于LV-NC组(P<0.05)。结论:LncRNA MEF2C-AS1在卵巢癌细胞中表达下调,过表达LncRNA MEF2C-AS1可显著抑制卵巢癌细胞的增殖、侵袭、迁移。过表达LncRNA MEF2C-AS1可降低GRB7表达水平,其可能通过下调GRB7水平抑制卵巢癌细胞的恶性生物学行为。

长链非编码RNA MEF2C-AS1对大鼠骨量的影响

目的探讨长链非编码RNA MEF2C-AS1是否通过下调去卵巢大鼠MEF2C和SOST表达,来影响大鼠骨量。方法将46只5月龄SD大鼠,随机分为假手术组(SHAM组)和去卵巢组(OVX组),每组各23只。术后12周,各组随机剖杀大鼠以验证骨质疏松模型是否成功。将假手术组剩下的16只大鼠随机分成2组,每组各8只,分别为假手术对照组(SHAM)、假手术+MEF2C-AS1组(SHAM+MEF2C-AS1);将去卵巢组剩下的16只大鼠随机分成2组,每组各8只,分别为去卵巢对照组(OVX)、去卵巢+MEF2C-AS1组(OVX+MEF2C-AS1)。然后对SHAM+MEF2C-AS1组和OVX+MEF2C-AS1组注射MEF2C-AS1慢病毒载体,对SHAM组和OVX组注射等量空慢病毒载体。8周后处死大鼠时收集大鼠股骨和血液行Western blot、ELISA分析和Micro-CT成像。结果术后12周,OVX组骨体积(bone volume,BV)、骨体积分数(bone volume fraction/total volume,BV/TV)、骨小梁数量(trabecular number,Tb.N)、骨小梁厚度(trabecular thickness,Tb.Th)、骨密度(bone mineral density,BMD)较SHAM组下降(P<0.05),而骨小梁分离度(Tb.Sp)较SHAM组升高(P<0.05),证实大鼠骨质疏松模型造模成功。慢病毒载体注射8周后,OVX+MEF2C-AS1组大鼠MEF2C蛋白和SOST蛋白相对表达量较OVX对照组下降(P<0.05),且OVX+MEF2C-AS1组大鼠骨体积(BV)、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁厚度(Tb.Th)及骨密度(BMD)均高于OVX对照组(P<0.05)。结论lncRNA MEF2C-AS1通过下调MEF2C表达,来抑制SOST蛋白表达量,改善去卵巢骨质疏松大鼠骨小梁相关骨微结构,促进骨形成,增加骨体积和骨密度,对骨质疏松有潜在的治疗意义。

长链非编码RNA MEF2C-AS1通过下调miR-3646的表达抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭的功能机制研究

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)MEF2C-AS1提高调控miR-3646表达对乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭的功能影响和机制。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测正常乳腺细胞HBL-100和4种乳腺癌细胞(MCF-7、MDA-MB-231、BT549、MDA-MB-468)中MEF2C-AS1和miR-3646的相对表达水平。以MCF-7细胞为研究对象,分别建立过表达MEF2C-AS1或抑制miR-3646表达的MCF-7细胞株,MTT法检测细胞活力,Transwell法检测细胞的迁移和侵袭能力,蛋白免疫印迹(Western blotting)检测增殖相关蛋白CDK1和迁移侵袭相关蛋白MMP-2的表达水平。双荧光素酶报告基因实验和qRT-PCR检测验证MEF2C-AS1和miR-3646的靶向关系。结果与正常乳腺细胞HBL-100相比,4种乳腺癌细胞中MEF2C-AS1的表达均显著下调,miR-3646的表达均显著上调(P<0.05)。过表达MEF2C-AS1或抑制miR-3646表达均可抑制MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭,抑制CDK1和MMP-2蛋白的表达。miR-3646是MEF2C-AS1的靶基因,MEF2C-AS1可负性调控miR-3646的表达。过表达miR-3646可逆转MEF2C-AS1对MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论MEF2C-AS1通过靶向下调miR-3646抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与抑制CDK1和MMP-2蛋白表达有关。