MEG3a和MEG3基因与无功能性垂体腺瘤的研究进展

MEG3a是功能未知的母本印记基因MEG3的新型转录产物,研究表明MEG3a在正常垂体组织中高表达,而几乎在全部无功能性垂体腺瘤、大部分功能性垂体腺瘤中不表达。同时,该基因的异位表达能抑制许多癌细胞株的增殖,包括Hela细胞,MCF-7和H4组蛋白等,因而它可能是一种抑癌基因,其生物学功能与细胞增殖有关。本文就MEG3和MEG3a基因与无功能性垂体腺瘤的关系作简要综述。

应用焦磷酸测序法检测MEG3基因在急性髓系白血病中的甲基化状态

目的检测MEG3基因启动子区在急性髓系白血病(AML)患者骨髓细胞中的甲基化状态,并探讨其在AML中的临床意义。方法以54例初诊AML患者骨髓细胞标本为研究对象,11例缺铁性贫血患者骨髓细胞标本、10例健康人外周血标本为对照。常规提取DNA并用亚硫酸氢盐处理。然后用PCR扩增目标序列,采用焦磷酸测序法检测MEG3基因甲基化状态。结果 (1)MEG3基因的高甲基化状态与AML患者的年龄、性别、白细胞总数、血红蛋白量、血小板计数等指标及临床分型间均未发现显著相关性。(2)AML患者低甲基化5例,高甲基化49例,高甲基化的比例为90.7%(49/54);缺铁性贫血患者对照组低甲基化6例,高甲基化5例,高甲基化的比例为45.5%(5/11);而在正常人对照组低甲基化10例,无高甲基化者,高甲基化的比例为0%;AML患者甲基化状态明显高于另外两组,差异有统计学意义(P<0.05),缺铁性贫血患者对照组与正常人对照组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 MEG3基因启动子区的异常甲基化与急性髓系白血病的发生有关,对诊断、评价AML有一定意义。

5-氮杂脱氧胞苷对MCF7细胞中MEG3基因表达及细胞增殖活性的影响

背景与目的:MEG3(maternal expressed gene3)基因是一类印记基因,其转录缺失可能诱导多种肿瘤的发生发展。本研究通过检测乳腺癌MCF7细胞中MEG3基因mRNA的转录情况及细胞增殖活性,以探讨DNA甲基化抑制剂5-氮杂脱氧胞苷对MEG3基因转录的诱导作用及其对细胞增殖活性的影响。方法:以浓度为5μmol/L的5-氮杂脱氧胞苷分别作用MCF7细胞0、2、4和6d后,用RT-PCR及Northern blot技术检测MEG3基因mRNA的转录水平;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活性的变化。结果:与未处理组相比,5-氮杂脱氧胞苷分别作用2、4和6d后,MCF7细胞中MEG3基因mRNA表达显著增强,并呈现时间依赖性(P<0.01);MTT检测结果显示MCF7细胞的增殖活性受到抑制。与未处理组相比,药物作用2、4和6d的细胞增殖抑制率分别为(23.16±3.93)%、(49.39±2.38)%和(64.73±2.24)%,差异有显著性(P<0.01)。结论:MEG3基因可能具有抑制MCF7细胞生长的作用,其基因转录下调与DNA甲基化有关,可能参与了乳腺癌的发病机制。

延边黄牛lncRNA MEG3基因多态性及其与生长性状的关联分析

试验旨在研究长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)MEG3(maternally expressed gene 3)基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)及其与延边黄牛生长性状之间的关联性。通过DNA直接测序法和高分辨率熔解曲线技术(high resolution melting curve,HRM)分析了90头24月龄延边黄牛MEG3基因多态性,并结合胸宽、髋宽和腹围等13项生长性状进行关联分析。结果显示,MEG3基因第5外显子包含g.65745819 G>A和g.65745850 C>A 2处突变,均存在2个等位基因,分别为G、A和C、A,等位基因频率分别为0.661、0.339和0.778、0.222,产生3个基因型,分别为GG、GA、AA和CC、CA、AA,基因型频率分别为0.422、0.478、0.100和0.611、0.333、0.056;卡方适应性检验发现,2个位点均未偏离哈迪-温伯格平衡(P>0.05)。2个位点遗传纯合度、杂合度、有效等位基因数和多态信息含量(PIC)分别为0.552、0.448、1.812、0.348和0.286、0.346、1.528、0.286,均处于中度多态(0.25<PIC<0.5)。关联分析显示,g.65745819 G>A位点GA基因型胸宽显著高于AA基因型(P<0.05),AA基因型髋宽显著高于GG和GA基因型(P<0.05);g.65745850 C>A位点AA基因型腹围显著高于CA基因型(P<0.05),其余基因型各指标之间差异均不显著(P>0.05)。结果表明,lncRNA MEG3基因多态性与延边黄牛部分生长性状相关,可作为延边黄牛分子标记辅助育种的候选基因。

DNMT1蛋白通过沉默MEG3基因促进视网膜母细胞瘤增殖

目的探讨DNMT1蛋白是否通过沉默MEG3基因诱导视网膜母细胞瘤增殖。方法通过转染pcDNA-DNMT1或si-DNMT1上调或干扰DNMT1的表达水平;通过转染pcDNA-MEG3或si-MEG3上调或干扰MEG3的表达水平;用Western blot检测视网膜母细胞瘤细胞系中DNMT1蛋白表达量;用CCK-8法及EdU法检测细胞的增殖能力;用实时荧光定量PCR技术检测转染后的视网膜母细胞瘤细胞中MEG3表达量的变化;干扰DNMT1表达后,用甲基化特异性PCR检测MEG3基因启动子DNA甲基化水平的变化。结果视网膜母细胞瘤SO-RB50及HXO-RB44细胞中DNMT1蛋白表达量显著升高(P<0.05)。转染了pcDNA-DNMT1的HXO-RB44细胞中DNMT1蛋白表达增加,细胞增殖能力增加,MEG3表达量降低;转染了siRNADNMT1的SO-RB50细胞DNMT1蛋白表达减少,细胞增殖能力降低,MEG3表达量增加(P<0.05)。干扰DNMT1蛋白表达后,MEG3基因启动子DNA甲基化水平降低(P<0.05)。逆转DNMT1蛋白对MEG3基因的调控后,DNMT1蛋白调控RB细胞增殖的能力减弱(P<0.05)。结论在视网膜母细胞瘤细胞中,DNMT1蛋白表达的上调,诱导了MEG3基因启动子DNA甲基化失活,最终导致细胞异常增殖。

MEG3基因在骨肉瘤中的研究进展

骨肉瘤(osteosarcoma,OS)是最常见的一种骨组织原发性恶性肿瘤,其病变部位主要位于长骨干骺端,临床表现为持续性疼痛并伴有夜间加重。OS在年轻患者中发病率较高,根据美国国立卫生研究院统计,其发病率在10~19岁时达到峰值[1]。

肝细胞癌组织中MEG3基因启动子甲基化状态及其临床意义

目的探讨肝细胞癌组织中MEG3基因启动子的甲基化水平及其临床意义。方法利用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP），检测2014年12月至2016年12月山西省肿瘤医院58例肝细胞癌及20例正常肝脏石蜡包埋组织中MEG3基因启动子的甲基化水平，并分析甲基化状态与患者临床病理特征间的关系。结果肝细胞癌组织中MEG3基因启动子甲基化发生率为55.2%（32/58），高于正常肝脏组织中的25.0%（5/20），两者差异有统计学意义（χ^2=6.72，P=0.02）。不同年龄、性别、甲胎蛋白水平、肿瘤数量和分化程度患者的MEG3基因启动子甲基化发生率比较，差异均无统计学意义（均P〉0.05）；不同肿瘤直径、是否肝硬化、乙型肝炎表面抗原（HBsAg）是否阳性、不同TNM分期和有无远处转移患者的MEG3基因启动子甲基化发生率比较，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。结论MEG3基因启动子异常甲基化可能与肝细胞癌的发生相关，且与肿瘤直径、肝硬化、HBsAg、TNM分期和远处转移有关。

长链非编码RNA MEG3对头颈鳞状细胞癌增殖和侵袭的影响

目的探究长链非编码RNA母系表达基因3(lncRNA MEG3)对头颈鳞癌细胞增殖和侵袭的影响。方法体外培养头颈部鳞癌细胞系HN6转染MEG3,分为MEG3阴性对照组(MEG3对照组)、MEG3慢病毒过表达转染组(MEG3过表达组)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测MEG3 mRNA表达;CCK-8、transwell检测细胞增殖、侵袭耐力;蛋白免疫印迹法(western blottingWB)检测细胞中ZEB2、波形蛋白(vimentin)、E-钙黏着蛋白(E-cadherin)蛋白表达情况。结果在HN6细胞系中,与MEG3对照组相比,MEG3过表达组细胞中MEG3 mRNA表达升高(P<0.05)。与阴性对照组相比,MEG3过表达组细胞增殖、侵袭能力均降低(P<0.05)。与阴性对照组相比,MEG3转染组ZEB2、vimentin蛋白表达降低,E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05)。结论 MEG3表达升高后可抑制头颈鳞癌细胞的增殖、侵袭,其机制可能与抑制细胞上皮-间充质转化有关。

转录因子Kaiso下调人乳腺癌细胞系中lncRNA MEG3的表达

目的探讨转录因子Kaiso是否调节人母系表达基因3(MEG3)表达及其在乳腺癌的发生发展中发挥重要作用。方法RT-qPCR检测正常乳腺细胞系MCF-10A和多个乳腺癌细胞系MCF-7、BT-474、MDA-MB-435、MDA-MB-231中Kaiso和MEG3的表达;蛋白印迹检测Kaiso在各种细胞中的表达;免疫组织化学检测50例乳腺癌和癌旁组织中Kaiso表达;RT-qPCR检测过表达Kaiso对母系印记基因编码的长链非编码RNA(lncRNA MEG3)转录水平的影响。结果MCF-10A中lncRNA MEG3转录水平高于Kaiso的转录水平(P<0.001),在MCF-7、BT-474、MDA-MB-435、MDA-MB-231细胞中Kaiso明显上调,而lncRNA MEG3明显下调(P<0.001);MCF-10A中Kaiso表达水平较低,而在MDA-MB-231高转移性乳腺癌细胞中呈现出高表达状态(P<0.05)。Kaiso在乳腺癌旁组织中为低表达(P<0.001),而在癌组织中高表达于细胞质与细胞核中。另外在MCF-10A细胞中使Kaiso过表达后lncRNA MEG3的转录水平明显下调(P<0.01)。结论Kaiso调节lncRNA MEG3在乳腺癌组织细胞中的表达,在乳腺癌的发生发展中可能发挥重要作用。

湿性年龄相关性黄斑变性出血患者血清lncRNA MEG3和miR-138表达水平与预后的关系

目的:探讨湿性年龄相关性黄斑变性(ARMD)出血患者血清长链非编码RNA母系表达基因3(lncRNA MEG3)和微小RNA-138(miR-138)表达水平及其与患者预后的关系。方法:前瞻性研究。选取2018-01/2021-06收治的湿性ARMD出血患者90例为观察组,选择同期在我院进行健康体检人员78名作为对照组。采用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测所有受试者血清lncRNA MEG3、miR-138表达水平。观察组患者注射雷珠单抗进行治疗,每月1次,共3次。治疗后随访3mo,根据预后情况分为预后良好组和预后不良组,比较两组患者lncRNA MEG3、miR-138水平。Pearson相关性分析lncRNA MEG3与miR-138的相关关系。采用受试者工作特征曲线(ROC)分析湿性ARMD出血患者预后不良的判断价值。多因素Logistic回归分析湿性ARMD出血患者预后不良的影响因素。结果:与对照组相比,观察组患者血清lncRNA MEG3水平下降(1.13±0.37 vs 0.71±0.21),miR-138水平上升(1.05±0.29 vs 2.23±0.54)(均P<0.05)。湿性ARMD出血患者预后良好组患者血清lncRNA MEG3水平明显高于预后不良组(0.81±0.24 vs 0.49±0.14),而miR-138水平明显低于预后不良组(1.92±0.49 vs 2.87±0.63)(均P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,lncRNA MEG3与miR-138呈负相关(r=-0.381,P<0.05)。ROC曲线结果显示,血清lncRNA MEG3、miR-138表达水平对湿性ARMD出血患者发生预后不良AUC分别为0.859、0.828,截断值分别为0.635、2.455,敏感度分别为89.70%、75.90%,特异性分别为72.10%、82.00%。多因素Logistic回归分析显示lncRNA MEG3是湿性ARMD出血患者预后不良的保护因素,miR-138是危险因素(均P<0.05)。结论:血清lncRNA MEG3、miR-138在湿性ARMD出血患者中表达异常,且对湿性ARMD出血患者的预后不良具有一定的评估价值。

长链非编码RNA在肾细胞癌发生、发展中的作用研究进展

长链非编码RNA(lncRNA)是一类长度超过200个核苷酸、无蛋白质编码功能的RNA分子,是基因表达与细胞生长、增殖、分化等生理过程相互作用的重要调节因子,在表观遗传学、转录等水平发挥调控作用。肾细胞癌(RCC)是常见的泌尿系统恶性肿瘤,其发病率高,且预后不良。lncRNA的异常表达与RCC的发生、发展有密切关系,其中HOTAIR、MALAT1、SNHGs、ATB、GAS5、MEG3、H19等基因通过相关分子海绵机制介导不同的miRNA,通过激活不同信号传导途径和调节关键标志物表达调控RCC的发生、发展,其中HOTAIR、MALAT1、SNHGs、ATB基因起到促癌作用,GAS5、MEG3基因起到抑癌作用,H19基因则具有抑癌与致癌双重作用。

长链非编码RNA MEG3抑制肝癌细胞增殖及机制

目的探索人母系表达基因3(MEG3)在肝癌发生发展中作用及机制。方法实时定量PCR检测肝癌细胞系以及正常细胞系中MEG3表达;CCK-8检测细胞增殖;流式细胞术分析细胞凋亡;蛋白印记检测血管内皮生长因子(VEGFA)及其受体(VEGFR1)表达。结果与正常肝细胞HL-7702比较,肝癌细胞(MHCC97L、SMMC7721、MHCC97H、HepG2)中MEG3表达明显下降(P<0.01);与对照组LV-scramble比较,转染过表达载体LV-MEG3导致SMMC7721和MHCC97H细胞增殖倍数降低[SMMC7721由(5.8±0.4)倍降至(3.1±0.3)倍;MHCC97由(6.4±0.5)倍降至(3.4±0.3)倍],细胞凋亡率增加[SMMC7721由(2.8±0.4)%升至(12.4±0.6)%;MHCC97H由(2.2±0.4)%升至(13.5±0.5)%],VEGFA和VEGFR1表达下降(P<0.01)。结论长链非编码RNA MEG3可抑制肝癌细胞增殖、促进肝癌细胞凋亡,其机制可能与下调细胞内血管内皮生长因子及受体表达有关。