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MEK1表达载体的构建及其对肝癌细胞ERK通路活性的影响 被引量:1
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作者 梁容瑞 周蕊 +6 位作者 李宗芳 李宝华 陈昆仑 王志东 姬媛媛 杨军 黄辰 《西部医学》 2013年第10期1447-1450,共4页
目的构建pcDNA3.1(+)-MEK1真核表达载体,体外转染人肝癌MHCC97H细胞,观察MEK1在肝癌细胞中的表达及其对ERK通路活性的影响。方法应用RT-PCR扩增出MEK1基因插入pcDNA3.1(+)中,形成重组载体pcDNA3.1(+)-MEK1。经测序确认后,利用Lipofectam... 目的构建pcDNA3.1(+)-MEK1真核表达载体,体外转染人肝癌MHCC97H细胞,观察MEK1在肝癌细胞中的表达及其对ERK通路活性的影响。方法应用RT-PCR扩增出MEK1基因插入pcDNA3.1(+)中,形成重组载体pcDNA3.1(+)-MEK1。经测序确认后,利用LipofectamineTM 2000将重组载体转染MHCC97H肝癌细胞,使用含G418的培养基进行筛选;将肝癌细胞分为不转染组、转染空载体组和转染重组载体组,运用Western-blot方法检测MEK1、p-MEK1、ERK1/2、p-ERK1/2在各组细胞中的表达并绘制各组细胞的生长曲线对比其增殖能力。结果重组载体pcDNA3.1(+)-MEK1酶切鉴定电泳条带大小正确,测序结果经Blast比对与人MEK1基因开放性读码框100%吻合;重组载体载体转染肝癌细胞后MEK1表达水平较不转染及转染空载体载体组细胞显著升高,且磷酸化的MEK1及ERK1/2水平也明显升高,转染重组载体载体的肝癌细胞增殖能力得到显著增强。结论成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)-MEK1,过表达MEK1蛋白可提高肝癌细胞MAPK/ERK通路活性。 展开更多
关键词 mek1 肝癌 MHCC97H 基因表达
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胰腺癌细胞系PC1.0、PC-1、MEK1/2仓鼠模型的建立及成瘤特性的比较
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作者 孙洪利 韩冰 +1 位作者 程新华 马凯 《中国现代普通外科进展》 CAS 2014年第4期253-257,共5页
目的:观察不同肿瘤细胞系在仓鼠体内种植生长的差异,阐明不同胰腺癌细胞系的侵袭转移特性。方法:胰腺癌细胞系PC1.0、PC-1、MEK1/2行仓鼠胰腺原位种植、腹腔注射,建立不同的胰腺癌细胞侵袭动物模型。结果:高侵袭转移PC1.0组在肿瘤组织... 目的:观察不同肿瘤细胞系在仓鼠体内种植生长的差异,阐明不同胰腺癌细胞系的侵袭转移特性。方法:胰腺癌细胞系PC1.0、PC-1、MEK1/2行仓鼠胰腺原位种植、腹腔注射,建立不同的胰腺癌细胞侵袭动物模型。结果:高侵袭转移PC1.0组在肿瘤组织生长大小、腹水出现情况、肿瘤腹腔转移情况明显高于其他3组细胞;MEK1基因敲减组在胰腺种植、腹腔种植肿瘤组织生长比MEK2基因敲减组生长减小,腹膜及肝脏转移及周围脏器侵袭比MEK2基因敲减组增多。结论:PC1.0肿瘤生长旺盛且转移多;PC-1肿瘤生长一般且转移少;MEK1基因敲减肿瘤生长受抑制,但侵袭转移正常;MEK2基因敲减肿瘤生长不受抑制,但侵袭转移受抑制。 展开更多
关键词 胰腺肿瘤 PC1 0 细胞系 mek1 2 基因敲减 仓鼠
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增生性瘢痕中细胞外信号调节激酶及其激酶基因表达的变化 被引量:1
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作者 陈伟 付小兵 +5 位作者 孙晓庆 孙同柱 赵志力 周岗 杨银辉 盛志勇 《中国危重病急救医学》 CAS CSCD 2003年第4期200-203,共4页
目的 :探讨细胞外信号调节激酶 1/ 2 (extracellular signal regulated protein kinase,ERK1/ 2 )及其上游信号分子 MEK1/ 2在增生性瘢痕和正常皮肤中基因表达的变化。方法 :提取 8例增生性瘢痕和 8例正常皮肤组织的总 RNA后 ,分离 m R... 目的 :探讨细胞外信号调节激酶 1/ 2 (extracellular signal regulated protein kinase,ERK1/ 2 )及其上游信号分子 MEK1/ 2在增生性瘢痕和正常皮肤中基因表达的变化。方法 :提取 8例增生性瘢痕和 8例正常皮肤组织的总 RNA后 ,分离 m RNA,用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)法检测这 4种基因在不同组织中的表达变化规律。结果 :在正常皮肤组织中 ,MEK1、MEK2、ERK1和 ERK2基因表达较弱 ;而在增生性瘢痕中 ,这 4种基因表达明显增强 ,其 m RNA量的灰度比分别为正常皮肤的 1.1倍、1.2倍、2 .2倍和 2 .5倍。结论 :增生性瘢痕的发生可能与 MEK1/ 2和 ERK1/ 2基因表达升高有关。 展开更多
关键词 细胞外信号调节激酶1/2 mek1基因 MEK2基因 增生性瘢痕
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