期刊文献+
共找到36篇文章
< 1 2 >
每页显示 20 50 100
MEPE/OF45蛋白的抗体制备与细胞内定位研究 被引量:3
1
作者 刘爽 魏巍 +1 位作者 高宁 胡宝成 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1017-1019,共3页
目的研究MEPE/OF45蛋白(Matrix Extracellular PhosphoglycoprotEin/Osteoblast/Osteocyte Factor 45,MEPE/OF45)的功能,制备MEPE/OF45蛋白抗体并检测其定位。方法通过分子克隆方法体外表达MEPE/OF45蛋白片段,获得大量纯蛋白后免疫小鼠... 目的研究MEPE/OF45蛋白(Matrix Extracellular PhosphoglycoprotEin/Osteoblast/Osteocyte Factor 45,MEPE/OF45)的功能,制备MEPE/OF45蛋白抗体并检测其定位。方法通过分子克隆方法体外表达MEPE/OF45蛋白片段,获得大量纯蛋白后免疫小鼠并得到抗体,利用抗体进行免疫荧光染色方法检测MEPE/OF45蛋白在细胞内定位情况。结果得到特异性较高的抗体,并观察到MEPE/OF45蛋白在辐射敏感细胞与抗辐射细胞内定位不同。结论MEPE/OF45蛋白不同辐射敏感型的细胞中定位不同,说明MEPE/OF45蛋白参与细胞辐射后DNA损伤修复过程。 展开更多
关键词 mepe/of45蛋白 抗体制备
下载PDF
人MEPE/OF45基因的克隆及序列分析 被引量:1
2
作者 张鸿声 高宁 +4 位作者 绳纪坡 于芳 张宏达 张勇 胡宝成 《生物技术通讯》 CAS 2008年第6期787-790,共4页
目的:克隆人MEPE/OF45全长基因,为进一步研究MEPE/OF45在DNA损伤应答中的作用及特异的信号通路奠定基础。方法:选取人宫颈癌细胞HeLa为靶细胞,从中提取总RNA,设计扩增人MEPE/OF45基因片段的特异引物,进行RT-PCR分析;用蛋白质合成抑制剂... 目的:克隆人MEPE/OF45全长基因,为进一步研究MEPE/OF45在DNA损伤应答中的作用及特异的信号通路奠定基础。方法:选取人宫颈癌细胞HeLa为靶细胞,从中提取总RNA,设计扩增人MEPE/OF45基因片段的特异引物,进行RT-PCR分析;用蛋白质合成抑制剂亚胺环己酮(CHX)对细胞进行处理,观察处理前后MEPE/OF45基因的表达情况。结果:在经CHX处理的HeLa细胞中扩增到了MEPE/OF45基因片段,随后利用重叠PCR方法获得了人MEPE/OF45全长基因,并经序列分析确证。结论:获得了人MEPE/OF45基因片段及全长基因,为阐明MEPE/OF45在细胞中复杂的功能提供了线索。 展开更多
关键词 mepe/of45基因 克隆 序列分析 亚胺环己酮 HELA细胞
下载PDF
Polymorphism of Intron 14 of Porcine CACNA2D1 Gene and Effects on Muscular pH_(45)
3
作者 李建华 吕帮玉 杨明生 《Animal Husbandry and Feed Science》 CAS 2009年第2期1-4,共4页
[ Objective] To detect polymorphism of intron 14 of porcine CACNA2Dt gene and thus provide conditions for the marker-assisted selec- tion of pork quality traits. [Method] The polymorphism of the exon 14 and intron 14 ... [ Objective] To detect polymorphism of intron 14 of porcine CACNA2Dt gene and thus provide conditions for the marker-assisted selec- tion of pork quality traits. [Method] The polymorphism of the exon 14 and intron 14 of porcine CACNA2D1 gene was detected in six breeds by PCR- SSCP. The genetic effects of different genotypes on the pH45 value of eye muscle and ham joint muscle were also analyzed. I-Result] There were three kinds of genotypes, namely, AA, AG and GG, in the intron 14 of porcine CACNA2 DI gene. The polymorphic locus ( G --~ A) was at the 1 145 nt of the sequence (GenBank Accepted No. FJ156361 ). The results of X2 test showed that the distribution of these three kinds of genotypes was significantly different in the six breeds (P〈0.05). The pH45 values of eye muscle and ham joint muscle were significantly different between geno- type AA and genotype AG of pigs in F2 generation from the Jianhua x Pietrain resource family ( P 〈 0.05). [Conclusion ] The polymorphism of the in- tron 14 of porcine CACNA2D1 gene has effects on the pH45 values of eye muscle and ham joint muscle. 展开更多
关键词 PIG CACNA2D1 gene PCR-SSCP pH45
下载PDF
p53基因突变对胶质母细胞瘤细胞Connexin45蛋白表达影响
4
作者 刘欣然 郇雪洁 +3 位作者 杜希恂 陈曦 焦倩 姜宏 《青岛大学学报(医学版)》 CAS 2024年第4期475-477,共3页
目的探究p53基因突变对胶质母细胞瘤细胞连接蛋白45(Connexin45)表达的影响。方法培养胶质母细胞瘤细胞U87细胞(p53野生型)和U251细胞(p53突变型),使用免疫印迹法检测两种细胞P53和Con-nexin45蛋白的表达。结果与U87细胞相比,U251细胞中... 目的探究p53基因突变对胶质母细胞瘤细胞连接蛋白45(Connexin45)表达的影响。方法培养胶质母细胞瘤细胞U87细胞(p53野生型)和U251细胞(p53突变型),使用免疫印迹法检测两种细胞P53和Con-nexin45蛋白的表达。结果与U87细胞相比,U251细胞中P53蛋白和Connexin45蛋白的表达均明显降低,差异均有统计学意义(t=6.054、4.199,P<0.05)。结论p53突变可能会引起胶质母细胞瘤细胞Connexin45蛋白的表达降低。 展开更多
关键词 基因 p53 突变 胶质母细胞瘤 细胞 连接蛋白45
下载PDF
The ethanol response gene Cab45 can modulate the impairment elicited by ethanol and ultraviolet in PC12 cells
5
作者 Yunfeng Zhu Quanli Wang +1 位作者 Wangru Xu Sha Li 《Journal of Genetics and Genomics》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第3期153-161,共9页
High consumption of ethanolic beverages facilitates neurodegeneration, but the mechanism of this process still remained elusive. Suppression subtractive hybridization (SSH) is a technique for detection of rare trans... High consumption of ethanolic beverages facilitates neurodegeneration, but the mechanism of this process still remained elusive. Suppression subtractive hybridization (SSH) is a technique for detection of rare transcripts. With SSH approach, we identified one ethanol response gene Cab45, which was down-regulated by ethanol with time-dependent manner in B104 cells. The full-length sequence of Cab45 gene was obtained by 5'-RACE (5'Rapid Amplification of cDNA Ends) for the first time in rat. Based on the sequence of deduced amino acid of rat Cab45, the alignment was conducted with its counterparts in different species and displayed a high conservation. Using different tissues in rat and cell lines, Cab45 was characterized by a ubiquitous expression and differentiation dependent down-regulation. Given that ethanol facilitates some cell differentiation, we hypothesize that Cab45 is involved in ethanol-mediated differentiation. With transient transfection, the function of Cab45 was investigated by up-regulation and down-regulation in PC12 cells. Ethanol treatment and UV exposure were conducted subsequently and cell proliferations were detected by MTT (Methyl Thiazolyl Tetrazolium) approach. It revealed that the up-regulation of Cab45 modulated the impairment elicited by ethanol and UV in transfected cells. As a member of new calcium binding protein family, the exact role of Cab45 still remains unclear. 展开更多
关键词 ETHANOL Cab45 calcium-binding protein gene identification subtractive hybridization
下载PDF
Molecular Markers for Leaf Rust Resistance Gene Lr45 in Wheat Based on AFLP Analysis
6
作者 ZHANG Na YANG Wen-xiang +4 位作者 YAN Hong-fei LIU Da-qun CHU Dong MENG Qing-fang ZHANG Ting 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2006年第12期938-943,共6页
Amplified fragment length polymorphism (AFLP) analysis was carried out in Thatcher, near isogenic lines (NILs) canting different genes conferring resistance against wheat leaf rust, and TcLr45 × Thatcher F2 p... Amplified fragment length polymorphism (AFLP) analysis was carried out in Thatcher, near isogenic lines (NILs) canting different genes conferring resistance against wheat leaf rust, and TcLr45 × Thatcher F2 progenies were used to develop markers for Lr45 gene. Sixty AFLP primer combinations were screened and most of them provided clear amplification products, 31 primer combinations displayed polymorphism of TcLr45 in 23 NILs. Two AFLP markers closely linked to the gene Lr45 were acquired: P-AGG/M-GAG261bp, which was found closely linked to the Lr45 locus at a distance of 0.6 cM on one side, and P-ACA/M-GGT105bp, which was found at a distance of 1.3 cM on the other side. The specific hands were cloned and subsequently sequenced. The 261-bp fragment produced by P-AGG/M-GAG showed 86% similarity with the sequence of Vulgate Hort I gene; the 105-bp fragment produced by P-ACA/M-GGT showed 96% similarity with the phosphatidylserine decarboxylase gene of the Triticum monococcum. Both included an open reading frame (ORF). 展开更多
关键词 wheat leaf rust AFLP Lr45 gene localization
下载PDF
45,X,der(Y)t(Y;13)不育男性患者的临床细胞和分子遗传学研究 被引量:9
7
作者 崔英霞 夏欣一 +7 位作者 卢洪涌 潘连军 邵永 姚兵 戈一峰 王国洪 李晓军 黄宇烽 《医学研究生学报》 CAS 2008年第11期1168-1171,I0015,共5页
目的:了解核型为45,X,der(Y)t(Y;13)(q11.1;q12),-13伴无精子症、双侧乳腺轻微发育和多发性皮下结节男性患者的分子遗传学特点。方法:进行常规染色体核型分析,用荧光原位杂交(FISH)进一步确定患者核型。用PCR-STSs以确定Yq上的断裂点。... 目的:了解核型为45,X,der(Y)t(Y;13)(q11.1;q12),-13伴无精子症、双侧乳腺轻微发育和多发性皮下结节男性患者的分子遗传学特点。方法:进行常规染色体核型分析,用荧光原位杂交(FISH)进一步确定患者核型。用PCR-STSs以确定Yq上的断裂点。用DNA多态性方法检测位于13q12上的BRCA 2基因拷贝数。对患者的睾丸和皮下结节进行活检。结果:细胞遗传学和FISH证实患者SRY基因和Y染色体着丝粒位于13号染色体上。因此,患者核型为45,X,der(Y)t(Y;13)(q11.1;q12),-13.ish der(Y)(SRY+,DYZ3+,wcp13+)。Y染色体长臂上的AZFa,b,和C区域全部丢失,断裂点位于sY82以下。BRCA2基因的多态性检测无拷贝数的丢失。睾丸活检结果为唯支持细胞综合征。皮下结节病理检查为血管脂肪瘤。结论:患者的男性表型是由于基因组中存在SRY基因。无精子症、睾丸体积小与病理结果一致,是由于Y染色体Yq11.1→Yqter片段丢失所致。但血管脂肪瘤的分子机制仍然不清楚。 展开更多
关键词 45 X男性 Y常/染色体易位 无精子症 SRY基因 血管脂肪瘤 不育男性患者 分子遗传学
下载PDF
电离辐射对人外周血淋巴细胞GADD45基因表达的影响 被引量:17
8
作者 徐丽昕 艾辉胜 +5 位作者 蒋本荣 姚波 余长林 郭梅 黄雅静 孙琪云 《辐射研究与辐射工艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期111-114,共4页
观察生长抑制和DNA损伤基因45(Growth arrest and DNA damage gene 45,GADD45)X射线照射后表达的改变,并研究其与照射剂量之间的关系。外周血给予0-5 GyX线照射后分离出单个核细胞并培养,在不同时间点上用反转录聚合酶链反应(Reverse tr... 观察生长抑制和DNA损伤基因45(Growth arrest and DNA damage gene 45,GADD45)X射线照射后表达的改变,并研究其与照射剂量之间的关系。外周血给予0-5 GyX线照射后分离出单个核细胞并培养,在不同时间点上用反转录聚合酶链反应(Reverse transcriptase-Polymerase clain reaction,RT-PCR)的方法测定 GADD45基因的相对表达量,分析该基因的剂量、效应关系。照射后GADD45基因在转录水平表达呈剂量依赖性增加,照射后4h达峰值,以后开始下降,但在24h仍未恢复到初始水平。 展开更多
关键词 研究生长抑制 DNA损伤基因45 生物剂量计 基因表达 反转录聚合酶链反应
下载PDF
血管形成抑制因子tumstatin_(45-132)的基因克隆、表达和生物学活性 被引量:3
9
作者 罗以勤 王梁华 +1 位作者 球谊 焦炳华 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期141-143,共3页
 目的: 克隆人tumstatin全长编码区基因及编码tum statin45-132的基因, 在大肠杆菌中表达。方法: 采用RT PCR从人胚肾细胞系 293细胞中克隆人的tumstatin全长编码基因, 继以PCR扩增tumstatin45-132 (45 -132位氨基酸 )编码基因, PCR产...  目的: 克隆人tumstatin全长编码区基因及编码tum statin45-132的基因, 在大肠杆菌中表达。方法: 采用RT PCR从人胚肾细胞系 293细胞中克隆人的tumstatin全长编码基因, 继以PCR扩增tumstatin45-132 (45 -132位氨基酸 )编码基因, PCR产物克隆到pBV220载体中, 测序证实后, 转化E.coliBL21, 于 42℃进行热诱导表达。用SDS -PAGE分析表达产物, 对重组蛋白纯化后用内皮细胞增殖试验测定其生物学活性。结果: RT- PCR扩增出tumstatin全长编码基因, 以PCR扩增出tumstatin45-132的编码基因, 经序列分析证实与GenBank中的序列完全一致。以含有tumstatin45-132编码基因的表达载体转化E.coliBL21后, 可表达出相对分子质量(Mr)为 9 600的重组蛋白。表达产物的蛋白量占菌体蛋白量的 10%, 纯化后能抑制内皮细胞的增殖。结论: 成功克隆全长tumstatincDNA, 并在大肠杆菌中表达重组tumstatin45-132蛋白, 证实其具有抑制内皮细胞增殖的活性。 展开更多
关键词 tumstatin45-132基因 表达 生物学活性
下载PDF
乳酸乳球菌Lactococcus lactis 1.2472 usp 45基因的克隆与原核表达 被引量:3
10
作者 叶飞 李昌 +4 位作者 任大勇 秦艳青 朱翯 杜寿文 金宁一 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2014年第7期36-38,41,共4页
从乳酸乳球菌Lactococcus lactis 1.2472基因组中PCR扩增usp 45基因,与pMD-18T载体连接获pT-usp 45质粒;酶切鉴定并测序正确后,将usp 45基因克隆入原核表达载体pET-28a,获重组质粒pET-28a-usp 45,转入E.coli BL21(DE3);经IPTG诱导表达... 从乳酸乳球菌Lactococcus lactis 1.2472基因组中PCR扩增usp 45基因,与pMD-18T载体连接获pT-usp 45质粒;酶切鉴定并测序正确后,将usp 45基因克隆入原核表达载体pET-28a,获重组质粒pET-28a-usp 45,转入E.coli BL21(DE3);经IPTG诱导表达及镍亲和层析纯化,由SDS-PAGE和Westren blot进行鉴定。结果表明,本试验获得1 371 bp长度的usp 45基因,构建pET-28a-usp 45质粒,诱导表达并纯化分子量约50 kDa的目的蛋白,为进一步研究usp 45蛋白奠定基础。 展开更多
关键词 乳酸菌 USP 45基因 分泌蛋白 原核表达
下载PDF
恶性疟原虫杂合45肽抗原与乙肝病毒表面抗原融合基因在酵母中表达 被引量:6
11
作者 陈爱社 管惟滨 +1 位作者 方振伟 王昌才 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 1997年第3期161-164,共4页
通过PCR扩增HBsAg基因的S片段,然后将S基因与恶性疟原虫杂合45肽基因连接并克隆到酵母表达质粒pYEUra3上。重组质粒被转化到酵母受体菌中。融合基因在酵母中获得表达,表达产物HBsAg/45肽,该融合蛋白经亲... 通过PCR扩增HBsAg基因的S片段,然后将S基因与恶性疟原虫杂合45肽基因连接并克隆到酵母表达质粒pYEUra3上。重组质粒被转化到酵母受体菌中。融合基因在酵母中获得表达,表达产物HBsAg/45肽,该融合蛋白经亲合层析后被纯化。电镜观察到HBsAg/45肽呈颗粒状。 展开更多
关键词 恶性疟原虫 融合基因 HBsAg/45 酵母表达
下载PDF
45S rDNA基因的不稳定性及其与转录的相关性 被引量:3
12
作者 黄敏 周玲 +2 位作者 黄婧 徐安莉 王平 《激光生物学报》 CAS 2017年第2期151-155,共5页
45S rDNA基因由串联重复序列构成,是遗传不稳定性的热点区域,易于发生DNA断裂和重组。以Hela和CHO细胞系为研究对象,运用荧光原位杂交技术检测有丝分裂不同时期的45S rDNA基因的不稳定性表型。结果表明,位点特异性的染色体浓缩失败是其... 45S rDNA基因由串联重复序列构成,是遗传不稳定性的热点区域,易于发生DNA断裂和重组。以Hela和CHO细胞系为研究对象,运用荧光原位杂交技术检测有丝分裂不同时期的45S rDNA基因的不稳定性表型。结果表明,位点特异性的染色体浓缩失败是其在中期染色体上不稳定性的主要表型。具有这种表型的染色体在后期可能会出现落后或粘连现象,甚至有可能引发断裂,形成卫星核。同时,免疫荧光双染色技术检测表明DNA双链断裂的标记蛋白(γH2AX)和RNA聚合酶I的上游结合因子(UBF)在有丝分裂的不同时期都存在共定位现象。该结果为探讨45S rDNA基因的不稳定性与转录的关系提供了直观的细胞学证据。 展开更多
关键词 45S RDNA基因 不稳定性 转录 荧光原位杂交技术 免疫荧光双染色技术
下载PDF
PPARγ激动剂对MKN-45胃癌细胞系增殖及MMP-7基因表达的影响
13
作者 江洁 刘顺英 《东南大学学报(医学版)》 CAS 2005年第4期247-249,共3页
目的:研究过氧化物酶增殖因子激活受体γ(peroxisomeproliferatorsactivatedreceptorγ,PPARγ)激活剂罗格列酮对人胃癌细胞系MKN45增殖和MMP7基因表达的影响。方法:不同浓度罗格列酮干预细胞后,用台盼蓝拒染法检测胃癌细胞株增殖活性,... 目的:研究过氧化物酶增殖因子激活受体γ(peroxisomeproliferatorsactivatedreceptorγ,PPARγ)激活剂罗格列酮对人胃癌细胞系MKN45增殖和MMP7基因表达的影响。方法:不同浓度罗格列酮干预细胞后,用台盼蓝拒染法检测胃癌细胞株增殖活性,用RTPCR法检测MMP7基因表达情况。结果:罗格列酮作用24h明显降低MKN45细胞的存活率,与对照组比较有显著差异(P<0.05),细胞存活率随着药物浓度增加而降低;MMP7基因表达随着药物浓度增加而下降。结论:在胃癌细胞株MKN45中,罗格列酮与PPARγ作用而激活下级信号传导,抑制胃癌细胞的增殖,且下调MMP7基因的表达。 展开更多
关键词 噻唑类 过氧化物酶类 细胞系 肿瘤 MKN-45细胞 MMP-7基因
下载PDF
实时定量聚合酶链反应法检测人周围血淋巴细胞受照后GADD45基因表达的改变 被引量:2
14
作者 刘莉 佘义 +4 位作者 赵卫东 李进 王芹 田丽丽 姜恩海 《中国职业医学》 CAS 北大核心 2008年第6期454-457,共4页
目的建立辐射诱导人淋巴细胞GADD45基因表达定量检测技术,探讨GADD45基因表达变化作为辐射生物剂量计的可行性。方法健康人周围血经X射线照射后分离淋巴细胞,提取总RNA,反转录成cDNA,利用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测GADD45基... 目的建立辐射诱导人淋巴细胞GADD45基因表达定量检测技术,探讨GADD45基因表达变化作为辐射生物剂量计的可行性。方法健康人周围血经X射线照射后分离淋巴细胞,提取总RNA,反转录成cDNA,利用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测GADD45基因经不同剂量照射(0~8 Gy)、2 Gy照后不同时间(0~72 h)的mRNA表达水平,以管家基因GAPDH为内参进行定量分析。结果照射后GADD45基因在转录水平表达呈剂量依赖性增加,4 Gy照射时达到峰值,8 Gy仍然保持在较高水平,GADD45基因表达改变存在线性剂量-效应关系,其线性回归方程为y^=3.408+1.528x,R2=0.787。2 Gy照射后GADD45基因mRNA表达在照射后1 h呈现上升趋势,在4 h时达峰值,照射后72 h基因表达仍未恢复到初始水平。结论实时荧光定量PCR检测GADD45基因表达方法具有良好的敏感性、重复性和剂量-效应关系,有可能成为新的辐射生物剂量计。 展开更多
关键词 GADD45基因 生物剂量计 基因表达 实时荧光定量RCR
下载PDF
干扰CTPS基因促进川楝素诱导的人胃癌MKN-45细胞凋亡 被引量:1
15
作者 罗海静 潘阳 +4 位作者 陈雯 张伟伟 邵淑丽 杨清竹 李铁 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期1126-1133,共8页
目的探讨干扰CTPS基因对川楝素诱导的胃癌MKN-45细胞凋亡的影响。方法通过生物信息学分析CTPS基因在人胃癌组织中的表达情况以及CTPS基因高表达的胃癌患者的总生存期。以人胃癌MKN-45细胞为实验材料,构建CTPS基因干扰载体,转染MKN-45细... 目的探讨干扰CTPS基因对川楝素诱导的胃癌MKN-45细胞凋亡的影响。方法通过生物信息学分析CTPS基因在人胃癌组织中的表达情况以及CTPS基因高表达的胃癌患者的总生存期。以人胃癌MKN-45细胞为实验材料,构建CTPS基因干扰载体,转染MKN-45细胞48 h后,采用qRT-PCR和Western blot检测CTPS基因mRNA和蛋白表达情况。用80 nmol/L的川楝素处理干扰CTPS基因的MKN-45细胞48 h,使用MTT实验法检测细胞存活率,激光共聚焦显微镜观察细胞形态,免疫荧光法检测γH2AX的表达。结果生物信息学分析发现CTPS在人胃癌组织中高表达,CTPS基因高表达的胃癌患者总生存期短。向MKN-45细胞中分别转染Sh-ctrl空载体和Sh-CTPS干扰载体,qRT-PCR和Western blot检测显示,与转染Sh-ctrl空载体相比,转染Sh-CTPS干扰载体的MKN-45细胞中CTPS mRNA和蛋白表达均降低,其中转染ShCTPS-3干扰效果最显著,分别降低了85.21%和53%(P<0.001)。检测细胞存活率及形态变化显示,与Sh-ctrl组相比,ShCTPS-3组细胞存活率降低(P<0.01),细胞皱缩,形态不规则,呈现凋亡特征,细胞凋亡率升高(P<0.05);在此基础上用80 nmol/L的川楝素处理转染Sh-ctrl和ShCTPS-3的MKN-45细胞48 h,与Sh-ctrl+川楝素组相比,ShCTPS-3+川楝素组细胞存活率降低(P<0.001),细胞出现凋亡小体,细胞凋亡率升高(P<0.05)。结论干扰CTPS基因促进川楝素诱导的胃癌MKN-45细胞凋亡。 展开更多
关键词 CTPS基因 川楝素 胃癌 MKN-45细胞
下载PDF
转录因子ATF3对大鼠Gadd45β/γ基因启动活性的影响及其可能的结合部位 被引量:2
16
作者 周梦雅 何风霞 +7 位作者 张婧 刘玉 虞天一 卢燕来 王璐璐 赵聃 邱文 王迎伟 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期26-32,共7页
目的 :构建大鼠生长阻滞及DNA损伤诱导基因45(growth arrest and DNA-damage-inducible gene 45,Gadd45)β/γ启动子(全长和截短)荧光素酶报告质粒,并观察在大鼠肾小球系膜细胞(glomerular messangial cells,GMCs)中过表达激活转录因子3... 目的 :构建大鼠生长阻滞及DNA损伤诱导基因45(growth arrest and DNA-damage-inducible gene 45,Gadd45)β/γ启动子(全长和截短)荧光素酶报告质粒,并观察在大鼠肾小球系膜细胞(glomerular messangial cells,GMCs)中过表达激活转录因子3(activating transcription factor 3,ATF3)后分别对大鼠Gadd45β/γ基因启动活性的影响。同时筛选其可能的ATF3结合位点。方法:采用PCR技术,将扩增出的大鼠Gadd45β基因启动子全长(-1 105^+236 nt)和Gadd45γ基因启动子全长(-913^+72nt)分别插入到荧光素酶报告基因载体p GL3-basic中,获得Gadd45β/γ基因启动子全长荧光素酶报告质粒(p GL3-Gadd45β/γ-FL),再将p GL3-Gadd45β/γ-FL分别与课题组前期构建的大鼠野生型ATF3过表达质粒(p IRES2/ATF3)共转染GMCs,检测其荧光素酶活性,以确定ATF3对Gadd45β/γ基因的启动作用。另用生物信息学软件预测Gadd45β/γ基因启动子上ATF3潜在的结合位点,并据此构建4个Gadd45β和3个Gadd45γ基因启动子截短片段的荧光素酶报告质粒。将Gadd45β/γ基因启动子全长和各截短片段的荧光素酶报告质粒与p IRES2/ATF3共转染GMCs,再行荧光素酶活性测定,以筛选ATF3的结合位点。结果:菌液PCR及核酸测序证实,大鼠Gadd45β/γ基因启动子(全长和截短)的荧光素酶报告质粒均构建成功。将p GL3-Gadd45β/γ-FL分别和p IRES2/ATF3共转染GMCs发现,Gadd45β/γ基因启动子活性均显著增加。而将Gadd45β启动子全长及4个截短质粒分别与p IRES2/ATF3共转染GMCs后显示,p GL3-Gadd45β-4的启动活性显著低于p GL3-Gadd45β-FL、p GL3-Gadd45β-1、p GL3-Gadd45β-2和p GL3-Gadd45β-3。提示ATF3可能结合在Gadd45β基因启动子的(-146^+23 nt)区域。同样,将Gadd45γ启动子全长及3个截短质粒分别与p IRES2/ATF3共转染GMCs后显示,p GL3-Gadd45γ-2、p GL3-Gadd45γ-3的启动活性显著低于p GL3-Gadd45γ-FL和p GL3-Gadd45γ-1。提示ATF3可能结合在Gadd45γ基因启动子的(-456^-61 nt)区域,且这段区域可能包含1个以上ATF3结合位点。结论:成功构建了大鼠Gadd45β/γ基因启动子全长及各截短片段荧光素酶报告质粒,并初步确定了ATF3在Gadd45β/γ基因启动子上的结合区域。 展开更多
关键词 生长阻滞和DNA损伤基因45(Gadd45) 激活转录因子3(ATF3) 荧光素酶报告质粒 启动子活性
下载PDF
The histone deacetylase inhibitor trichostatin A induces cell cycle arrest and rapid upregulation of gadd45β in LS174T human colon cancer cells
17
作者 Tomoyuki Taniguchi Jun Iwashita +2 位作者 Jun Murata Kenji Ueda Tatsuya Abe 《Advances in Biological Chemistry》 2012年第1期43-50,共8页
Histone deacetylase (HDAC) inhibitors are considered as promising therapeutic agents against several malignant diseases because they inhibit cancer cell proliferation. The stress sensor genes of the growth arrest and ... Histone deacetylase (HDAC) inhibitors are considered as promising therapeutic agents against several malignant diseases because they inhibit cancer cell proliferation. The stress sensor genes of the growth arrest and DNA damage-inducible protein (gadd45) family exhibit disordered expression in several types of malignant diseases and are thus a novel target for cancer therapy. However, there have been only few investigations of whether HDAC inhibitors affect the expression of gadd45 genes. We examined the effects of a HDAC inhibitor, trichostatin A (TSA), on the time-dependent expression of gadd45 genes in the human colon cancer cell line LS174T. Addition of TSA to LS174T cells induced inhibition of cell proliferation by arresting the cell cycle. We found that TSA treatment of LS174T cells induced rapid upregulation of gadd45β mRNA expression within 15 min, reaching a peak level at 3 h. Although the time-dependent expression pattern of gadd45β mRNA was similar to that of gadd45β mRNA, the peak level of gadd45β was lower than that of gadd45β. TSA treatment also upregulated the mRNA level of p21Waf1/Cip1, a prolif- eration inhibitor, after 3 h, but downregulated the mRNA levels of cyclin D1, a proliferation inducer, after 3 h, and of c-Myc after 1 h. TSA treatment induced a certain level of apoptosis, but the mRNA level of p53, a potent apoptosis inducer, was down-regulated after 3 h. These results suggest that the up-regulation of p21Waf1/Cip1 and apoptosis was independent of p53 and that the early upregulation of gadd45β gene, which precedes the upregulation of p21Waf1/Cip1 and the downregulation of cyclin D1, are important in TSA-treated LS174T cells. 展开更多
关键词 HISTONE DEACETYLASE Inhibitor GADD45 genes TRICHOSTATIN A LS174T Cells
下载PDF
Relationship between White-partridge Feather Trait and SLC45A2 Polymorphism in Wenchang Chicken
18
作者 He Yiping Chen Jie +1 位作者 Gao Xinfeng Xu Jiguo 《Animal Husbandry and Feed Science》 CAS 2020年第3期9-13,共5页
[Objective]The paper was to study the inheritance of white-partridge feather trait in Wenchang chicken and identify the related genetic variation,so as to provide references for the utilization of white-partridge popu... [Objective]The paper was to study the inheritance of white-partridge feather trait in Wenchang chicken and identify the related genetic variation,so as to provide references for the utilization of white-partridge population of Wenchang chicken and molecular marker-assisted selection of white-partridge feather trait.[Method]The inheritance of white-partridge feather trait was studied by reciprocal cross test.SLC45A2 was selected as a candidate gene based on the genetic characteristics of white-partridge feather and results of previous researches.The variation in the exon domain of SLC45A2 gene was analyzed by re-sequencing method.The relationship between missense mutation/nonsense mutation in the exon domain and white-partridge feather trait was verified.[Result]Reciprocal cross test showed that white-partridge feather trait was associated recessive inheritance compared with yellow-partridge feather.The amplification results indicated that there were five SNPs in SLC45A2 gene,in which three were located in exon domain,including two missense mutations(c.a74g and c.gll54c)and one synonymous mutation(c.c561t).The missense mutation was verified with Wenchang chicken Bawang chicken,Qingyuan partridge chicken,Xinghua chicken and red jungle fowl as materials.The results demonstrated that c.g1154c locus of SLC45A2 gene was completely linked with white-partridge feather trait.[Conclusion]The trait of white-partridge feathers showed recessive inheritance and c.g1154c locus might be the causation. 展开更多
关键词 Wenchang chicken White-partridge feather SLC45A2 gene Silver feather locus
下载PDF
脂联素基因多态性与新疆地区哈萨克族2型糖尿病的相关性研究 被引量:6
19
作者 康小龙 唐孝龙 何承辉 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期454-457,共4页
目的研究脂联素基因(APM-1)45T/G单核苷酸多态性(SNPs)与新疆地区哈萨克族人2型糖尿病(T2DM)的相关性。方法采用病例—对照研究方法,应用聚合酶链反应—限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,比较新疆地区哈萨克族人正常糖耐量组(N... 目的研究脂联素基因(APM-1)45T/G单核苷酸多态性(SNPs)与新疆地区哈萨克族人2型糖尿病(T2DM)的相关性。方法采用病例—对照研究方法,应用聚合酶链反应—限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,比较新疆地区哈萨克族人正常糖耐量组(NGT)和T2DM组APM-1 SNP45基因型与等位基因分布频率差异;比较不同基因型血清APM-1水平以及NGT组不同基因型体测与生化指标的差异。结果 NGT组与T2DM组相比较,APM-1 SNP45位点基因型与等位基因频率以及血清APM-1水平差异均无统计学意义(P>0.05);NGT组TG+GG基因型者体质指数(BMI)、腰围(WAIST)、腰臀比(WHR)及血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(CH)和低密度脂蛋白(LDL)水平显著高于TT基因型者(P<0.05),高密度脂蛋白(HDL)水平显著低于TT基因型者(P<0.01)。结论 APM-1 SNP45T/G多态位点可能与新疆地区哈萨克族T2DM无相关性。 展开更多
关键词 脂联素基因 单核苷酸多态性 2型糖尿病 哈萨克族
下载PDF
细胞外基质磷酸化糖蛋白基因启动子的构建及初步研究 被引量:1
20
作者 宫春梅 张娟娟 +1 位作者 夏天永 孙岩 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2015年第9期519-523,共5页
目的:研究细胞外基质磷酸化糖蛋白(MEPE)基因启动子在小鼠前成骨细胞中表达的调控机制。方法:利用软件分析小鼠的MEPE基因启动子,得到5条启动子候选序列后,设计引物进行不同长度MEPE基因启动子的构建,并分别将其转染小鼠前成骨细胞;然... 目的:研究细胞外基质磷酸化糖蛋白(MEPE)基因启动子在小鼠前成骨细胞中表达的调控机制。方法:利用软件分析小鼠的MEPE基因启动子,得到5条启动子候选序列后,设计引物进行不同长度MEPE基因启动子的构建,并分别将其转染小鼠前成骨细胞;然后利用双荧光素酶基因检测报告系统分析不同长度MEPE基因启动子在前成骨细胞中的转录活性,并同时观察BPM2对小鼠前骨细胞中不同长度MEPE基因启动子转录活性的影响及其时间效应。结果:成功构建了P-78^+66、P-140^+66、P-300^+66、P-500^+66、P-1 081^+66的MEPE基因启动子;分别转染小鼠前成骨细胞后,不同长度MEPE基因启动子的活性两两相比均有显著性差异(P<0.05),其中以P-500^+66的活性最强,推测-140^-500区域可能为MEPE转录表达的调控元件主要结合部位;BMP2作用于不同长度MEPE基因启动子后检测发现,BMP2在启动子-140^-500区域内可明显上调MEPE基因的转录活性(P<0.05)。结论:成功构建了MEPE基因启动子,并发现BMP2调控MEPE基因启动子的主要区域在-140^-500区域。 展开更多
关键词 细胞外基质磷酸化糖蛋白 基因克隆 骨形成发生蛋白2 双荧光素酶基因检测
下载PDF
上一页 1 2 下一页 到第
使用帮助 返回顶部