针刀对肌性斜颈模型兔胸锁乳突肌中calpain-1、CD45、MMP-2、TIMP-2蛋白表达的影响

目的:应用肌性斜颈兔动物模型,探讨针刀治疗肌性斜颈的作用机制及意义。方法:无水酒精注射制备动物肌性斜颈兔子模型后,选取模型兔子48只,随机分为正常组、模型组、针刀组、按摩组,每组12只。分别给予各组对应治疗,治疗2个月后各组分别取部分胸锁乳突肌制作标本,免疫组化法观察钙蛋白酶1(calpain-1)、分化抗原决定簇45(CD45)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶抑制因子2(tissue inhibitor of metalloproteinases-2,TIMP-2)在各组肌纤维中的表达情况。结果:与正常组比较,其余各组实验动物明显出现颈部活动受限、斜颈、头颈不对称症状,而治疗结束后,针刀组和按摩组实验动物颈部活动受限改善,无明显头颈不对称症状。calpain-1、CD45、TIMP-2的表达,与正常组比较,模型组、按摩组上调(P<0.01);与模型组比较,针刀组、按摩组下调(P<0.01);与针刀组比较,按摩组上调(P<0.01)。MMP-2表达,与正常组比较,模型组下调(P<0.01),与模型组比较,针刀组、按摩组上调(P<0.05)。结论:针刀治疗肌性斜颈效果显著,其作用机制可能与减少calpain-1、CD45、TIMP-2表达,增加MMP-2表达有关。

MEPE／OF45蛋白的抗体制备与细胞内定位研究

目的研究MEPE/OF45蛋白(Matrix Extracellular PhosphoglycoprotEin/Osteoblast/Osteocyte Factor 45,MEPE/OF45)的功能,制备MEPE/OF45蛋白抗体并检测其定位。方法通过分子克隆方法体外表达MEPE/OF45蛋白片段,获得大量纯蛋白后免疫小鼠并得到抗体,利用抗体进行免疫荧光染色方法检测MEPE/OF45蛋白在细胞内定位情况。结果得到特异性较高的抗体,并观察到MEPE/OF45蛋白在辐射敏感细胞与抗辐射细胞内定位不同。结论MEPE/OF45蛋白不同辐射敏感型的细胞中定位不同,说明MEPE/OF45蛋白参与细胞辐射后DNA损伤修复过程。

下调细胞分裂周期蛋白45基因表达对宫颈鳞癌细胞发展的影响

目的探究下调细胞分裂周期蛋白45(Cdc45)基因表达对宫颈鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法免疫组化法检测70例宫颈鳞癌患者和35例子宫脱垂患者的正常宫颈组织中Cdc45蛋白的表达,分析Cdc45蛋白表达与患者临床病理参数的关系。利用细胞转染技术下调宫颈鳞癌Hela细胞中Cdc45基因表达,采用CCK-8法、划痕实验及Transwell细胞侵袭实验分别检测下调Cdc45基因表达对Hela细胞增殖、迁移及侵袭能力的变化。结果宫颈鳞癌组织中Cdc45蛋白高表达率高于正常宫颈组织(χ^(2)=7.620,P=0.006),且低分化宫颈鳞癌组织中Cdc45蛋白高表达率高于高中分化宫颈鳞癌组织(χ^(2)=7.565,P=0.005)。与对照组比较,Cdc45-SiRNA-1组Hela细胞增殖受到抑制,迁移、侵袭能力下降(t=4.093,P=0.003;t=4.684,P=0.009;t=6.847,P=0.002)。结论Cdc45在宫颈鳞癌组织中表达高于正常宫颈组织,其可能作为致癌基因促进宫颈鳞癌细胞的增殖、迁移及侵袭。

TRIM45靶向IGF-1R抑制乳癌MCF-7细胞增殖和迁移的机制

目的探究三结构域蛋白45(TRIM45)通过靶向胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)抑制人乳癌MCF-7细胞增殖和迁移的作用机制。方法将人乳癌MCF-7细胞分为TRIM45过表达组、空载对照组及阴性对照组。通过细胞增殖实验及划痕实验进行细胞增殖及迁移能力检测,采用蛋白质免疫印迹(WB)法检测自噬相关蛋白p62、微管相关蛋白Ⅰ轻链3B(LC3B)、自噬相关蛋白8(ATG8)的表达,通过免疫沉淀实验分析TRIM45与IGF-1R的结合,采用WB法检测促增殖蛋白IGF-1R和簇集蛋白(CLU)的表达。结果与空载对照组相比较,TRIM45过表达组不同时间的细胞增殖率及迁移率均显著降低(F=19.87~177.91,P<0.05)。与空载对照组相比较,TRIM45过表达组细胞自噬相关蛋白p62的表达显著降低,LC3B和ATG8的表达显著增加(F=22.97~113.50,P<0.05)。TRIM45可以与IGF-1R结合,并且TRIM45过表达组细胞IGF-1R及CLU蛋白表达较空载对照组显著降低(F=51.06、30.45,P<0.05)。结论TRIM45可以与IGF-1R结合,抑制IGF-1R及CLU的表达,诱导乳癌细胞自噬,抑制乳癌细胞的增殖和迁移能力。

黄芪甲苷调控CD45 PTPase介导抗脓毒症免疫机制的研究

目的研究黄芪甲苷(Astragaloside IV,ASI IV)抗脓毒症效应及免疫学机制,为黄芪临床应用脓毒症治疗提供科学依据。方法采用盲肠结扎穿刺术(Cecal ligation and puncture,CLP)构建脓毒症小鼠模型,随机分为假手术组、模型组、黄芪甲苷组、Anti-CD45单抗组、Anti-CD45单抗+黄芪甲苷组。H&E染色检测肺组织病理损伤;流式细胞术检测脾脏Th1细胞表达水平;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测Th1细胞相关基因(IL-2、Tbet、STAT1和STAT4)mRNA的表达。结果与模型组比较,黄芪甲苷干预显著提高脓毒症模型小鼠生存率,减轻模型小鼠肺组织病理损伤。CD45抗体干预后,阻断了黄芪甲苷提高生存率和减轻肺组织病理损伤的作用。机制研究结果表明,黄芪皂苷显著增加模型小鼠Th1细胞(CD4+IFN-γ+)比例,上调Th1细胞相关基因(IL-2、T-bet、STAT1、STAT4)mRNA表达,CD45抗体干预后,减少了黄芪甲苷促脾淋巴细胞Th1细胞比例,阻断黄芪皂苷促Th1细胞相关基因。结论黄芪甲苷通过调控CD45分子,提高Th1细胞介导的免疫反应,介导抗脓毒症效应。

天花粉蛋白诱导胃癌细胞MKN-45凋亡的研究

目的 :研究天花粉蛋白（ trichosanthin,TCS）对胃癌细胞的作用，探讨其治疗胃癌的可能作用机制。方法 :采用生长曲线、集落形成实验、 MTT法、电镜、 TUNEL染色和流式细胞仪等技术，研究 TCS对胃癌细胞 MKN－ 45的增殖抑制和诱导凋亡作用。结果： TCS能够明显抑制胃癌细胞 MKN－ 45的生长和集落形成， 1μ g/ml和 0.1μ g/ml TCS作用 MKN－ 45后，细胞集落形成率分别为 (6.63± 1.31)％和 (14.68± 1.27)％，明显低于对照组的 (23.67± 2.76)％

强心复脉颗粒对损伤兔窦房结组织缝隙连接蛋白45表达的影响

目的通过观察中药复方强心复脉颗粒对损伤兔窦房结组织缝隙连接蛋白45(Cx45)表达的影响,探讨其治疗病态窦房结综合征的可能机制。方法 30只大耳白兔随机分为正常组,模型组,阿托品组,强心复脉颗粒高、中、低剂量组(以下简称高、中、低剂量组),每组5只。除正常组外,余各组均采用甲醛加压注射渗透法建立兔窦房结组织损伤模型,待模型稳定后各用药组灌胃给药7 d,免疫组织化学方法检测各组兔窦房结组织Cx45表达的变化。结果与正常组相比,模型组兔窦房结组织Cx45表达量显著降低(P<0.01);与模型组相比,高剂量组家兔窦房结组织Cx45表达量显著升高,且明显优于中、低剂量组及阿托品组(P<0.05或P<0.01);阿托品及中、低剂量组之间无明显差异(P>0.05)。结论窦房结组织损伤后Cx45表达量明显减少,强心复脉颗粒能上调损伤窦房结组织Cx45的表达,可能是其治疗病态窦房结综合征的分子机制之一。

天花粉蛋白诱导胃癌细胞MKN-45凋亡中P53、Bcl-2、c-myc蛋白表达变化

目的 选用对天花粉蛋白敏感的胃癌细胞株MKN 45 ,研究天花粉蛋白抗肿瘤机制。方法 免疫组化法测定凋亡相关基因 (P5 3、Bcl 2、c myc)的表达变化。 结果 胃癌细胞MKN 45经天花粉蛋白 (1μg/ml,2 4、48h)处理后 ,凋亡相关基因P5 3、Bcl 2、c myc表达未出现显著性改变。经 5 μg/ml的天花粉蛋白处理 2 4h后 ,得到相同结论。但当MKN 45细胞经 5 μg/ml的天花粉蛋白处理 48h后 ,发现野生型P5 3蛋白表达增加 ,而Bcl 2、c myc蛋白表达未出现显著性改变。 结论 天花粉蛋白可诱导MKN 45细胞凋亡 ,可能与上调野生型P5 3基因的表达有关。

间隙连接蛋白Cx43、Cx45在鼻咽癌组织中的表达

背景与目的:间隙连接在细胞间的营养物质、离子和细胞调节因子的交换中起重要作用。间隙连接异常,细胞间的物质交换障碍,往往导致细胞分裂失控。在有些癌组织和癌细胞中存在间隙连接的功能异常,恢复这些癌细胞的间隙连接功能,它们表现出正常细胞的生物学表型。因此,探讨细胞间隙连接蛋白在鼻咽癌中的表达,将有可能为临床诊断提供方法,为鼻咽癌的发病机理提供新思路。方法:采用免疫组化技术检测间隙连接蛋白Cx43、Cx45在鼻咽组织中的表达。结果:①Cx43、Cx45在鼻咽慢性炎症组织和鼻咽癌组织中有表达差异,在鼻咽癌中,Cx43、Cx45阳性率为44.8%、46.6%,与鼻咽慢性炎症柱状上皮细胞阳性率的86.5%和100%比较,显著性下降(P<0.01)。②鼻咽慢性炎症组织比鼻咽癌组织含鳞状细胞的百分率低(P<0.01),分别为29.7%和56.9%。③Cx43、Cx45在鼻咽癌旁柱状上皮细胞中的表达低于癌旁鳞状上皮细胞(P<0.001),高于癌细胞(P<0.01)。结论:Cx43、Cx45在鼻咽组织中的表达异常,可能与鼻咽组织鳞化和癌变有关。

低聚壳聚糖与银杏叶聚戊烯醇配伍对辐射损伤小鼠微核率及p53、Gadd45蛋白表达的影响

以低聚壳聚糖与不同浓度的银杏叶聚戊烯醇配伍,研究了其对受照小鼠30天存活率、存活时间、骨髓微核及脾脏p53、Gadd45蛋白的影响。结果表明,300 mg/kg低聚壳聚糖与5 mg/mg银杏叶聚戊烯醇配伍后能有效提高辐射损伤动物存活率和存活时间,降低损伤动物的微核率以及p53、Gadd45蛋白表达。说明低聚壳聚糖与银杏叶聚戊烯醇配伍具有一定的辐射损伤保护作用。

白癜风皮损黑素细胞HMB-45、酪氨酸酶及其相关蛋白1的免疫组化研究

目的:研究白癜风白斑处黑素细胞分布及酪氨酸酶(TYR)等标记分子的表达情况。方法:对吸疱法所取白斑皮肤以免疫组化染色识别TYR、酪氨酸酶相关蛋白1(TRP1)和HMB-45,以Mias99彩色图像分析软件定量图像分析阳性表达的强弱。结果:白斑处黑素细胞数目明显低于正常对照(P<0.01),患者非皮损处与正常人皮肤比较差异无显著性(P>0.05)。皮损处黑素细胞树突减少,平均为3.4个,低于对照组(P<0.05)。残留黑素细胞各抗体呈强阳性染色。白斑毛囊之间可见黑素细胞散在、呈围管样分布。白斑处阳性细胞HMB-45图像灰度值低于正常着色皮肤(P<0.05),而TRP1高于正常皮肤(P<0.01),TYR与正常皮肤无差异(P>0.05)。结论:白斑处仍然有黑素细胞。残存黑素细胞树突回缩、数目变少,而且黑素细胞中黑素细胞标记分子表达异常。

尿阿尔茨海默病相关神经丝蛋白与外周血CD45RA+T细胞亚群联合检测早期诊断阿尔茨海默病

目的探讨尿阿尔茨海默病相关神经丝蛋白(Alzheimer disease related neural thread protein,AD7cNTP)与外周血淋巴细胞CD45RA+T亚型联合检测在阿尔茨海默病(AD)早期诊断中的价值。方法根据Peterson制订的轻度认知功能障碍(MCI)诊断标准和美国精神障碍诊断与统计手册第4版(DSM-Ⅳ)有关AD的诊断标准,选取AD患者32例(AD组),MCI患者30例(MCI组),另选60例健康者作为对照组。对比各组尿AD7c-NTP与CD45RA+T细胞亚群变化及诊断价值。结果 1CD45RA+T蛋白表达水平在AD组和MCI组显著低于对照组(P<0.01);2CD45RA+T在AD组和MCI组中的相对表达水平较对照组显著降低(P<0.01),AD组与MCI组间差异无统计学意义(P>0.05);3尿AD7c-NTP在AD组和MCI组中的含量较对照组显著升高(P<0.01),AD组与MCI组间差异无统计学意义(P>0.05);4CD45RA+T与AD7c-NTP联合诊断具有较好的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值。结论 AD7c-NTP与CD45RA+T联合检测是诊断AD早期病变的较好指标,提升二者单独应用时的预测价值,为AD早期诊断及疗效监测提供参考。

人骨形态发生蛋白2和9对人胃癌MNK-45细胞增殖、凋亡和迁移的影响及其机制

目的:研究人骨形态发生蛋白2和9(BMP2和BMP9)对人胃癌MNK-45细胞增殖、凋亡和迁移的影响,并初步探讨其作用机制。方法:用重组腺病毒AdBMP2和AdBMP9感染MNK-45细胞,采用MTT法、Hoechst 33258染色、流式细胞术(FCM)、划痕愈合实验和Transwell小室检测BMP2和BMP9对MNK-45细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响,Western blotting检测总GSK-3β、磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)及β-catenin的表达水平。结果:(1)MTT显示AdBMP2和AdBMP9转染后,MNK-45细胞的增殖自第3 d开始被抑制并呈时间依赖性;(2)Hoechst 33258染色与FCM一致显示上调BMP2和BMP9表达可以促进MNK-45细胞的凋亡;(3)划痕愈合与Transwell迁移实验结果一致提示上调BMP2和BMP9表达均可抑制MNK-45细胞的迁移;(4)Westernblotting显示BMP2组和BMP9组的p-GSK-3β均较GFP组升高,但对β-catenin的表达量无明显影响(P>0.05);上述结果与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:上调BMP2和BMP9表达对MNK-45细胞的增殖具有抑制作用,其机制与β-catenin无明显关系。

胃泌素对人胃癌细胞MKN45增殖及骨桥蛋白表达的影响研究

目的探讨胃泌素(Gastin)对人胃癌细胞MKN45增殖及骨桥蛋白(OPN)表达的影响。方法人胃癌细胞MKN45依药物干预进行分组,共分为三组,浓度10^(-6)mol/L的胃泌素组、胃泌素(10^(-6)mol/L)+丙谷胺(10^(-2)mol/L)联合组、不加药物培养液的对照组,均培养24 h、48 h。培养结束后取其上清液,应用酶标仪检测光密度值,连续3次。采用放射免疫法(RIA)检测OPN的表达,应用MTT法测定人胃癌细胞MKN45增殖情况。结果浓度10^(-6)mol/L的胃泌素对人胃癌细胞MKN45的增殖较对照组及联合组有明显的促进作用,差异有显著性(P<0.05);在胃癌细胞株MKN45培养液中测出OPN,随着培养时间的增加,OPN表达也有所增加,胃泌素组较对照组及联合组比较,可明显增加MKN45中的OPN含量,差异有显著性(P<0.05)。结论胃泌素会促进人胃癌细胞MKN45增殖,并促使OPN的表达,提示胃泌素促人胃癌细胞MKN45作用与OPN表达有一定关系;而其受体拮抗剂丙谷胺则可以对这种促进作用产生明显抑制作用。

猪带绦虫六钩蚴45W-4B重组蛋白的免疫原性研究

目的观察猪带绦虫六钩蚴45 W-4B抗原对仔猪的免疫保护作用。方法用IPTG诱导表达融合蛋白GST-45W-4B,用GST柱进行纯化,以Montan ide ISA 206为佐剂制成疫苗免疫仔猪。间接ELISA检测仔猪血清抗45W-4B IgG抗体水平,MTT法进行外周血淋巴细胞殖试验。免疫1个月后全部实验组经口攻击感染25000枚/头猪带绦虫虫卵,攻虫3个月后剖检,计算减虫率及保护率。结果免疫组注射疫苗的第2周起,抗体为阳性,45W-4B组持续升高至第8周,淋巴细胞增殖明显高于未免疫感染组。用该抗原制备的疫苗获得了95%的减虫率和33%的保护率。结论该抗原对猪囊尾蚴病具有很好的免疫保护作用。

MITF、S-100蛋白、HMB45在黑素瘤以及色素痣中的表达及意义

黑素瘤的病理表现千变万化,免疫染色尤为重要。到目前为止,我们常用的黑素细胞的标记物有S-100蛋白和HMB45,S-100蛋白敏感性高,但缺乏特异性,除了黑素细胞以外,雪旺细胞、肌上皮细胞、脂肪细胞、软骨细胞、组织细胞以及郎格罕细胞均阳性。而HMB45特异性较强,

参仙升脉口服液对缓慢性心律失常大鼠缝隙连接蛋白Cx45的影响

目的观察参仙升脉口服液对缓慢性心律失常大鼠缝隙连接蛋白Cx45的影响，探讨其治疗缓慢性心律失常的机制。方法用普萘洛尔制备缓慢性心律失常大鼠模型，观察参仙升脉口服液对缓慢性心律失常大鼠缝隙连接蛋白Cx45的影响。结果治疗组大鼠心率比模型组大鼠心率明显提高（P〈0．01），大鼠心肌组织缝隙连接蛋白cx45的表达比模型组明显增高（P〈0．01）。结论参仙升脉口服液可明显提高缓慢性心律失常大鼠缝隙连接蛋白Cx45的表达，这可能是其治疗缓慢性心律失常的机制之一。

TcLr45凝集素类受体蛋白激酶基因克隆与序列分析

在小麦抗叶锈近等基因系TcLr45中,扩增出一条凝集素类受体蛋白激酶基因片段。以该序列为靶序列,进行3'和5'RCAE-PCR,获得该基因cDNA全长片段为2347 bp,该序列具有完整的开放阅读框,共编码730个氨基酸,命名为LecRK-LR45。经软件分析,LecRK-LR45具有典型的凝集素类受体蛋白激酶结构,属于L类型。聚类分析结果表明,LecRK-LR45与山羊草和小麦抗叶锈近等基因系TcLr34中的凝集素类受体蛋白激酶基因具有较近的亲缘关系,与玉米、拟南芥的亲缘关系较远。该基因的克隆为研究小麦中凝集素类受体蛋白激酶的功能奠定了基础。

人MEPE/OF45基因的克隆及序列分析

目的:克隆人MEPE/OF45全长基因,为进一步研究MEPE/OF45在DNA损伤应答中的作用及特异的信号通路奠定基础。方法:选取人宫颈癌细胞HeLa为靶细胞,从中提取总RNA,设计扩增人MEPE/OF45基因片段的特异引物,进行RT-PCR分析;用蛋白质合成抑制剂亚胺环己酮(CHX)对细胞进行处理,观察处理前后MEPE/OF45基因的表达情况。结果:在经CHX处理的HeLa细胞中扩增到了MEPE/OF45基因片段,随后利用重叠PCR方法获得了人MEPE/OF45全长基因,并经序列分析确证。结论:获得了人MEPE/OF45基因片段及全长基因,为阐明MEPE/OF45在细胞中复杂的功能提供了线索。

胃泌素及其受体拮抗剂对人胃癌细胞株MKN45中骨桥蛋白表达的影响

目的研究胃泌素及其受体拮抗剂对人胃癌细胞株MKN45中骨桥蛋白(OPN)表达的影响。方法人胃癌细胞MKN45根据药物干预分为联合组[胃泌素(10^(-6)mol/L)+丙谷胺(10^(-2)mol/L)]、胃泌素组[胃泌素(10^(-6)mol/L)]、对照组(不加药物培养液),培养24、48 h,获得上清液,采用酶标仪检测光密度值,并测定OPN水平和人胃癌细胞MKN45增殖水平。结果胃泌素组人胃癌细胞MKN45增殖OD值均明显高于联合组、对照组(P<0.05);在胃癌MKN45培养中检测出OPN,随着培养时间的延长,OPN表达增加,胃泌素组OPN水平明显高于联合组、对照组,联合组较对照组明显降低(均P<0.05)。结论胃泌素参与人胃癌细胞MKN45增殖过程,促使OPN表达,丙谷胺对此过程具有抑制作用,为胃癌治疗提供科学依据。