猪COPG2和MEST克隆、印记状况和组织表达分析

【目的】为了在猪中找到更多新的候选印记基因并分析它们在哺乳动物之间的保守性,以期为猪分子遗传育种提供基础分子生物学信息和分子标记。【方法】以长白与荣昌猪杂交F1代一月龄个体为研究对象,通过比较生物学的方法,克隆COPG2和MEST全长cDNA,并分析基因的序列特点,然后利用IMpRH(法国农业科学院的辐射杂种克隆板)分析COPG2和MEST在猪染色体上定位信息。通过RT-PCR产物直接测序方法分析了这些基因在一月龄F1代个体11个不同组织(心、胃、肌肉、肾脏、肺、肝、小肠、膀胱、舌头、脾和脂肪)的印记状况,并进一步利用Real-timePCR方法,分析其在一月龄F1代个体11个不同组织的表达情况。【结果】克隆得到2817bp COPG2和2219bp MEST序列。其中COPG2包括2616bp完整CDS(coding sequenc,编码序列)区域,分析表明其编码含871个氨基酸的蛋白质,MEST包括981bp完整CDS区域,编码326个氨基酸的蛋白质。IMpRH分析结果表明,猪COPG2和MEST都位于猪18号染色体上并且与标记CL365941紧密连锁,LOD值分别为14.32和8.5。印记分析表明COPG2在11个组织中呈双等位表达,MEST在心脏、胃、肌肉、肾、肺、膀胱、舌头和脂肪中表达父方等位基因,但在肝脏、小肠和脾脏中呈双等位表达。荧光定量结果显示COPG2和MEST总的表达量在一月龄个体各组织间存在着显著性差异(P<0.01),其中COPG2和MEST在肾脏中表达量均高于其它各组织(P<0.01)。【结论】在哺乳动物之间,COPG2序列较为保守但是印记状况却缺乏保守性;MEST序列和印记状况均较为保守,但MEST在猪中印记状况具有组织特异性。此外,染色体定位信息和印记状况证实了在猪的18号染色体上有由COPG2和MEST构成的新的印记域。

中医专家系统生成工具MEST

MEST是我们用micro-prolog语言在IBM-PC机及兼容机上开发的中医专家系统生成工具。本文介绍了MEST的设计与实现的特点,探讨了中医专家辩证施治的数学模型以及适合中医专家系统通用性工具的知识表示,推理机制,知识库设计。我们用MEST实现了著名老中医、沈阳市中医研究所刘绍勋主任医师咳喘诊断专家系统,证明了该工具是完全行之有效的。

Igf2r及Mest印迹基因在供核细胞中的表达及意义

目的:探讨细胞传代培养对胰岛素样生长因子Ⅱ受体(insulin-like growth factor Ⅱ receptor,Igf2r)和Mest基因表达的影响,以及它们在不同部位来源的成纤维样细胞(fibroblast-like cells)中的表达。方法:利用实时定量PCR法检测印迹基因Igf2r和Mest在来源于鼠耳和尾尖的成纤维样细胞中的表达。结果:在鼠尾成纤维样细胞的传代培养中,随着培养代数的增加,Igf2r的表达减弱,Mest的表达无明显变化;Igf2r在鼠尾成纤维样细胞中的表达高于鼠耳。结论:传代培养影响Igf2r基因的表达,Igf2r在不同部位来源的成纤维样细胞中的表达具有差异,为供核细胞的选择及后续的基因印迹研究奠定了基础。

菜单接口的专家系统开发工具MEST

本文介绍了我们正在进行设计研宄的专家系统开发工具MEST的结构和使用的关键技术:人工智能理论和数据库技术的结合.用户通过典型专家系统实例的学习,利用菜单回答侍开发专家系统的类似问题.MEsT系统自动完成一个专家系统所必须的知识表达、获取、推理、控制等主要机制和菜单显示形式、算法及结果输出形式等功能模块的选择.MEST系统可以成为各个领域的专家自己开发专家系统的方便友好的工具。

miR-145-5p靶向MEST抑制胃癌上皮细胞增殖侵袭转移的研究

目的探究miR-145-5p、MEST在胃癌上皮细胞的调控机制。方法生信分析miR-145-5p及MEST的表达情况、两者相关性以及靶向位点;利用qRT-PCR和Western blot检测miR-145-5p及MEST的表达;双荧光素酶实验检测miR-145-5p和MEST的靶向关系;采用细胞增殖实验、克隆形成实验、划痕实验以及Transwell实验检测胃癌上皮细胞的增殖、转移和侵袭能力。结果相比正常胃上皮细胞,胃癌上皮细胞中的miR-145-5p低表达,而MEST高表达;miR-145-5p和MEST之间存在靶向关系;过表达miR-145-5p能减弱MEST对癌细胞增殖、转移和侵袭的促进作用。结论miR-145-5p在胃癌上皮细胞中低表达,MEST在胃癌上皮细胞中高表达;miR-145-5p可以通过靶向下调MEST,从而抑制胃癌细胞的增殖、转移和侵袭能力。

中华大蟾蜍Mest基因的cDNA克隆和表达分析(英文)

Mest基因是一种印记基因,在人、小鼠以及其他的哺乳动物和有花植物中都有研究报道。为了更好地研究该基因的功能和进化特点,利用RACE法获得了中华大蟾蜍Mest基因(BgMest)的cDNA全长序列(1 325 bp),它包含一个完整的ORF,可编码326个氨基酸的多肽(GenBank登陆号:ABQ10905)。多肽链中包含一个典型的α/β水解酶折叠结构域,其在氨基酸水平上与热带爪蟾和一些哺乳动物分别存在86%和70%～80%的相似性。进化树分析显示Mest基因为单系起源。RT-PCR显示,BgMest基因在精巢、卵巢、肝、肾、脑、胃和肺中都有表达,并且该基因在序列、表达模式以及蛋白产物的高级结构的高度保守性都说明它在两栖类生物中是保守的。但是在对哺乳动物以及一些脊椎动物的印记基因进行进化分析时,发现它们具有不同的起源。

二至天癸颗粒和右归丸对肾虚小鼠卵细胞Snrpn和Peg1/Mest甲基化状态的影响

目的探讨二至天癸颗粒和右归丸改善体外受精-胚胎移植结局的疗效机制。方法将175只雌性小鼠随机分为正常组(生理盐水0.5ml灌胃)、肾阴虚模型组(甲状腺片按300mg/kg灌胃,连用10天)、肾阴虚治疗组(造模同时每天予二至天癸颗粒0.5ml灌胃)、肾阳虚模型组(氢化可的松注射液按25mg/kg肌肉注射,连用10天)、肾阳虚治疗组(造模同时每天予右归丸0.5ml灌胃),每组35只。实验至第11天进行超排卵,每组30只小鼠取卵,观察卵细胞印迹基因Snrpn和Peg1/Mest甲基化状态,另5只雌鼠和5只雄鼠合笼后取受精卵,观察受精卵数目、卵裂率、成胚率。结果正常组小鼠卵细胞Snrpn和Peg1/Mest基因完全甲基化;肾阴虚、肾阳虚模型组小鼠卵细胞Snrpn和Peg1/Mest基因发生了明显的去甲基化;肾阴虚、肾阳虚治疗组小鼠卵细胞Snrpn和Peg1/Mest基因的去甲基化状态得到了部分纠正。肾阴虚、肾阳虚模型组受精卵数目、卵裂率、囊胚形成率明显低于正常组(P<0.05),肾阴虚、肾阳虚治疗组受精卵数目、卵裂率、囊胚形成率均高于相应的模型组(P<0.05)。结论肾虚可致卵细胞印迹基因Snrpn和Peg1/Mest发生异常去甲基化,二至天癸颗粒和右归丸可防止印迹丢失的发生,改善肾虚小鼠的卵裂率、囊胚形成率,从而发挥补肾治疗不孕症作用。

非小细胞肺癌MEST基因的表达及印迹状态

目的探讨中胚叶特异性转录子(又名父源表达基因-1)(MEST)的基因印迹在非小细胞肺癌发生发展中的作用。方法利用聚合酶链反应(PCR)技术结合限制性片段长度多态性(PFLP)技术,分析32例非小细胞肺癌及其对应的癌周正常肺组织中MEST基因的表达及其印迹状态。结果 11例MEST杂合子信息样本中,9例(81.8%)肺癌组织发生了印记缺失(LOI),其中6例为低等级、低发展阶段的肿瘤,而与之对应的癌周组织除1例为弱的双等位基因表达之外,均为单等位基因表达。同时11份MEST杂合子信息样本肺癌组织中MEST的平均表达水平是癌旁组织的1.5倍,且二者表达量差异有显著性(P<0.01)。结论 MEST基因的印迹缺失参与了非小细胞肺癌的发生发展过程。

MEST基因在正常人前列腺移行带和外周带基质成纤维细胞中的mRNA表达差异及其与DNA甲基化水平的关系

目的:探讨正常人的前列腺移行带(PZ)和外周带(TZ)基质成纤维细胞中MEST(mesoderm specific transcript)基因的甲基化水平变化和表达差异,及DNA甲基化抑制剂(5-Aza-CdR)对其表达水平的影响。方法:用硫化测序PCR(bisulfite sequencing PCR,BSP)和实时荧光定量PCR方法分别检测5-Aza-CdR处理前、后在前列腺PZ和TZ原代成纤维细胞中MEST基因的甲基化水平和相应的mRNA表达。结果:MEST基因在PZ成纤维细胞中为低甲基化高表达,在TZ成纤维细胞中为高甲基化低表达。加入5-Aza-CdR后,MEST在PZ和TZ成纤维细胞中都为去甲基化,而表达水平上升,但是TZ成纤维细胞表达水平的改变比PZ成纤维细胞大。结论:MEST基因的DNA甲基化差异可能是前列腺外周带和移行带成纤维细胞生物学行为差异的分子基础。

隐孔菌多糖成分对致敏大鼠气道高反应性和炎症细胞的影响

目的 :研究隐孔菌多糖成分对大鼠气道高反应性的影响 ,初步探索其作用机制。方法 :采用卵白蛋白致敏雾化吸入攻击制备大鼠哮喘模型 ,隐孔菌多糖成分 A、B(5 mg/ kg、2 0 mg/ kg)和酮替芬 (5 mg/ kg)及溶媒对照(等量生理盐水 )灌胃 10 d。用甲酰胆碱激发气道高反应性后 ,行支气管肺泡灌洗和腹腔灌洗 ,计数支气管肺泡灌洗液中细胞总数并分类 ,和腹腔灌洗液中脱颗粒肥大细胞及白细胞分类。结果 :隐孔菌多糖成分 A、B均能明显抑制致敏大鼠抗原攻击后气道阻力的增加及肺顺应性的下降 ;减少支气管肺泡灌洗液中白细胞总数 ,降低嗜酸细胞的数目 ,以多糖 B作用更明显 ;多糖 A和多糖 B也明显抑制腹腔肥大细胞脱颗粒及腹腔嗜酸性粒细胞的渗出。结论 :隐孔菌多糖 A、B成分抑制大鼠的气道高反应性 ,其作用可能与稳定肥大细胞膜、抑制嗜酸细胞炎症和趋化有关。

气化熔融焚烧工艺与城市生活垃圾热解特性的适应性研究

城市生活垃圾气化熔融技术以其无害化、减量化和资源化优势,成为极具发展潜力的新一代废弃物处理技术。为开发该技术在我国应用的适宜工艺,采用TG-DSC热分析仪,研究了不同终温、升温速率、气氛和含水率下我国城市生活垃圾典型有机混合物的热解特性。研究结果显示,我国采用该技术处理城市生活垃圾,气化温度应控制在600℃-650℃;升温速率、实际空气量与理论燃烧空气量的当量比以及物料含水率是该技术工艺的重要影响参数,应合理控制,以期获得较高的气化效率。

肾混合性上皮间质肿瘤10例临床病理分析

目的探讨肾混合性上皮间质肿瘤(MEST)的临床病理学特点、免疫组化及诊断与鉴别诊断。方法收集10例MEST临床资料,应用光镜对HE染色和免疫组化染色组织进行观察,并复习相关文献。结果10例MEST中,以女性为主,平均发病年龄为42岁。临床多无明显症状,偶有腰痛或血尿等症状。肿瘤平均直径5.4 cm,边界清,切面呈囊实性。镜下肿瘤由腺样或囊状扩张的上皮成分与束状或编织状排列的梭形细胞混合组成。免疫组化:上皮细胞CK(10/10)、EMA(8/10)(+);梭形细胞vimentin(10/10)、ER(8/10)、PR(8/10)、SMA(7/10)(+)。随访1~5年,10例均未发现肿瘤复发或转移。结论MEST是一种罕见的肾良性混合性肿瘤,具有独特的组织病理学特点,应与肾其他囊性、双向分化的肿瘤相鉴别。

双向圆弧齿轮的理论研究

本文运用共轭曲面原理对双向圆弧齿轮与其基本齿条之间的共轭运动进行了理论探讨，推导出了啮合函数、瞬时接触线、齿面法矢和相对运动速度等计算公式，建立了齿面的通用方程式，同时在ＡＤ０１１０计算机上绘制出了齿面的形状。

浅析MeSH叙词法及叙词变化

The theory of MeSH thesaurus method is analyzed.MeSH thesaurus is highly conceptual and coordinative.It expresses the content of a document through MeSH descriptor concept.

控制性超促排卵对小鼠胎盘功能基因表达及胎鼠体质量的影响

背景辅助生殖技术是治疗不孕症的主要手段,全球通过辅助生殖技术出生的婴儿已经超过800万。辅助生殖技术存在多种不良妊娠结局,影响着子代近期和远期的健康。目的探讨控制性超促排卵对小鼠胎盘功能基因表达及胎儿体质量的影响。方法将自然妊娠小鼠囊胚移植入自然交配假孕鼠(NC组,n=8)及超促排卵后假孕鼠(COH组,n=8)子宫内,以消除控制性超促排卵对卵母细胞、体外受精和体外胚胎培养等的影响,单独研究子宫内环境对胎盘功能基因及胎儿体质量的影响,并于妊娠18.5 d取胎鼠及胎盘称重,采用q-PCR技术检测胎盘生长相关印记基因的表达,采用Luminex液相悬浮芯片技术检测胎盘生长相关细胞因子变化。结果与NC组比较,控制性超促排卵组小鼠胎鼠体质量降低,胎盘重量降低,胎盘效率降低(P<0.05)。控制性超促排卵组小鼠胎盘生长相关印记基因Igf-2、Peg3、H19、Mest、Cdkn1c、Mash2、Cd81、Plagl1、Zim1、Ube3a表达水平降低(P<0.05)。控制性超促排卵组小鼠胎盘生长相关细胞因子VEGF、PIGF-2、PDGF-BB、MMP-2、MMP-9、VEGFR2表达水平降低(P<0.05)。结论控制性超促排卵可以降低小鼠胎盘生长相关印记基因的表达水平,降低胎盘生长相关细胞因子表达水平,降低胎鼠体质量。

兰州市肉与肉制品微生物污染状况的研究

目的:了解兰州市定点屠宰场生猪屠宰加工产品的卫生质量以及肉与肉制品致病菌污染状况。方法:2003-2006年,应用国标法对2个定点生猪屠宰场300份生猪胴体样品进行了菌落总数、大肠菌群和沙门氏菌检验;采用随机采样法对兰州市不同酒店和超市的生猪肉、牛肉、羊肉、禽肉100份,熟肉制品1 200份进行了常见致病菌的检验。结果:生猪胴体体表和肉样沙门氏菌检出率分别为7.5%和14%;生肉检出致病菌阳性20份,总检出率为20%;熟肉制品检出致病菌阳性39份,阳性率为3.25%。生肉中以猪肉致病菌阳性率最高,为20%。结论:兰州市生猪胴体的卫生质量急需提高,屠宰生产加工水平亟待改善。

Ni-Ti网状记忆合金支架治疗BPH远期疗效观察

目的:观察Ni-Ti网状记忆合金支架治疗BPH的远期疗效。方法:分析Ni-Ti网状记忆合金支架治疗BPH患者182例的临床资料,其中国产支架139例,进口支架43例。结果:182例患者中有94例远期效果良好,有效率达51.6%(其中国产组38.1%,进口组95.4%)。结论:Ni-Ti网状记忆合金支架治疗BPH远期疗效尚可,可以做为高危且预计生存期相对较长患者的一种安全可靠的治疗方法,进口支架效果尤佳。

基于MSET诊断技术锅炉受热面泄漏预测算法建模及实践

火电厂锅炉受热面泄漏事故不仅发生几率高、普遍性强,而且影响较大,直接影响接带电量及经营目标的完成;另外在脱硝SCR投运后,若不及时发现炉膛内部受热面泄漏,当泄漏量较大烟气含水率提高后将会导致SCR催化剂中毒的严重后果,所以如何根据现有DCS数据进行受热面泄漏预测,将变得非常有意义。本文以某单位1000MW机组锅炉屏过受热面为研究对象,研究基于MSET诊断技术锅炉屏过受热面泄漏预测算法建模,通过受热面泄漏关联因素因素分析,最终确定了以屏过受热面壁温作为模型输入因素,经过模型训练,成功了预测了锅炉屏过受热面泄漏事故,验证了通过该预测算法模型预测屏过受热面泄漏的可行性。

基于WMN技术的道路交通检测的研究

该文采用组合车辆定位法，详尽分析了城市交通量检测中交通流量、车速和车型、车辆占有率、交通密度和排队长度等各种指标，提出了采用无线网状网（WMN）来设计城市交通检测系统的研究方案，同时对其可行性进行了论证。