调经促孕方对胚胎着床障碍性不孕症小鼠子宫内膜容受性及AREG/EGFR/HIF-1α信号通路的影响

目的观察调经促孕方对胚胎着床障碍(EID)性不孕症小鼠子宫内膜容受性及AREG/EGFR/HIF-1α信号通路的影响,探讨其改善子宫内膜容受性的可能机制。方法80只昆明小鼠于妊娠第1日随机分为正常组、模型组、黄体酮组和调经促孕方组,每组20只,黄体酮组和调经促孕方组分别予相应药物灌胃。妊娠第4日,除正常组外,其余各组小鼠皮下注射米非司酮溶液(2.3 mg/kg)建立EID性不孕症模型,正常组皮下注射等体积丙二醇。妊娠第5日,每组随机取10只小鼠,剖腹取子宫,HE染色、Masson染色观察子宫内膜组织形态,扫描电镜观察子宫内膜胞饮突形态及数量,ELISA检测子宫内膜组织双调蛋白(AREG)含量,Western blot和免疫荧光检测子宫内膜组织表皮生长因子受体(EGFR)、p-EGFR、缺氧诱导因子(HIF)-1α表达。其余小鼠灌胃至妊娠第8日取材,记录平均胚胎着床点数。结果与正常组比较,模型组小鼠平均胚胎着床点数显著减少(P<0.01),子宫内膜腺体发育不良,胶原纤维增加,血管及胞饮突数量减少,子宫内膜组织AREG含量显著降低(P<0.01),p-EGFR、HIF-1α蛋白表达显著降低(P<0.05);与模型组比较,调经促孕方组小鼠平均胚胎着床点数显著增加(P<0.05),子宫内膜胶原纤维增生减少,间质内腺体、血管及胞饮突数量均明显增加,胞饮突发育饱满、均匀,子宫内膜组织AREG含量显著升高(P<0.01),p-EGFR、HIF-1α蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01),免疫荧光检测结果与Western blot一致。结论调经促孕方能促进子宫内膜腺体和血管发育,增加胞饮突数量,改善EID性不孕症小鼠子宫内膜容受性,利于胚胎黏附及植入,从而提高妊娠率,其机制可能与激活AREG/EGFR/HIF-1α信号通路,改善子宫内膜血流灌注,恢复子宫内膜相对缺氧环境有关。

PIK/Akt/mTOR信号通路在肺腺癌不同EGFR突变状态中的临床相关研究与预测价值

目的 探讨PIK/Akt/mTOR信号通路在肺腺癌不同表皮生长因子受体(EGFR)突变状态中与患者临床特征的相关性与预测价值。方法 采用二代基因测序法(NGS)检测342例2010-2019年于本院明确诊断肺腺癌的患者,其中DNA总量不少于150 ng, DNA降解程度≥C级,根据是否有EGFR突变将患者分为阳性组与阴性组,比较两组在肺腺癌患者不同临床病理特征中的分布差异;根据PIK/Akt/mTOR信号通路在342例肺腺癌患者中的分布情况,分析PIK/Akt/mTOR信号通路与EGFR不同突变状态和淋巴结转移的相关性,以及PIK信号通路在EGFR不同突变状态中的分布差异及与T790M突变状态的相关性。使用多元Logistic回归分析影响EGFR基因突变的因素。结果 (1)60岁以下的肺腺癌患者更易发生EGFR突变;(2)磷脂酰肌醇-4,5-双磷酸3-激酶催化亚基α(PIK3CA)、磷脂酰肌醇3-激酶(PIK3CG)表达阳性的患者EGFR的突变频率更高;(3)PIK3CA突变阳性患者更易诱导T790M耐药突变;(4)PIK3CB、mTOR表达阳性的肺腺癌患者更易发生淋巴结转移。(5)年龄、PIK3CA、PIK3CG表达水平是预测EGFR突变的危险因素(P<0.05)。结论 肺腺癌EGFR突变在60岁以下的患者中更常见,PIK3CA、PIK3CG的表达与EGFR基因突变具有相关性,PIK3CA的阳性表达可能参与调节T790M耐药突变的发生,PIK3CB、mTOR表达阳性会增加肺腺癌患者淋巴结转移的风险,年龄、PIK3CA、PIK3CG是预测EGFR突变的危险因素。

基于网络药理学和动物实验探讨慈菇消脂方对非酒精性脂肪性肝炎“炎癌”转化中EGFR/PI3K/AKT信号通路的干预研究

目的基于网络药理学研究慈菇消脂方(Cigu Xiaozhi decoction,CXD)的主要活性成分、关键靶点及通路,分析其对非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)“炎癌”转化的作用机制,并进行动物实验验证。方法基于网络药理学预测得到CXD治疗NASH“炎癌”转化的潜在作用靶点和信号通路。采用蛋氨酸-胆碱缺乏饮食(MCD)诱导小鼠NASH模型,给予CXD及表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂干预28 d,干预结束后处死小鼠,苏木精-伊红法(HE)观察各组小鼠肝脏组织形态学变化;Western blot检测各组小鼠肝组织EGFR、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)及蛋白激酶B(AKT)蛋白相对表达量;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组小鼠血清中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;结果经网络药理学筛选得到CXD潜在活性成分284个、潜在治疗靶点159个及关键靶点20个。CXD可影响细胞增殖、炎症反应等多个生物过程,涉及肿瘤、PI3K/AKT等多个信号通路。动物实验验证结果表明CXD能够降低NASH小鼠血清中IL-6、IL-1β、TNF-α的水平;降低肝组织中PI3K、AKT蛋白相对表达量,升高EGFR蛋白的相对表达量。结论CXD可通过参与细胞增殖和炎症反应等生物过程,调控EGFR/PI3K/AKT信号通路,改善NASH小鼠的肝组织损伤。

基于HIF-1α/EGFR/MAPK1信号通路探讨龟鹿二仙胶对少弱精子症大鼠的保护作用

目的探讨龟鹿二仙胶调控缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)/表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)/和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase 1,MAPK1)信号通路对少弱精子症(oligoasthenozoospermia,OAS)大鼠的保护作用。方法将48只SD雄性大鼠随机分为正常组,模型对照组,龟鹿二仙胶低剂量(0.65 g/kg)组、中剂量(1.25 g/kg)组、高剂量(2.5 g/kg)组和左卡尼汀组,每组8只。除正常组外,其他组均采用腺嘌呤灌胃给药进行造模。造模成功后进行灌胃给药进行干预,连续给药4周,记录大鼠一般情况,给药4周后进行取材处理。腹主动脉采血,ELISA法检测血清睾酮(testosterone,T)、雌二醇(estradiol,E2)、促卵泡激素(follicle-stimulating hormone,FSH)、促黄体生成激素(luteinizing hormone,LH)和催乳素(prolactin,PRL);分离肾组织,计算肾指数;分离右侧附睾,运用自动精子分析仪检测各组大鼠精子浓度和精子活力;HE染色观察睾丸组织病理改变;用试剂盒检测大鼠睾丸组织活性氧(reactive oxygen species,ROS)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)水平;免疫组化检测大鼠睾丸组织HIF-1α、EGFR和MAPK1的蛋白表达。结果与模型对照组相比,不同剂量的龟鹿二仙胶均可显著增加大鼠的体质量(P<0.01),降低大鼠的肾指数(P<0.01),提高精子浓度和精子活力(P<0.01),改善大鼠的精子质量,并能有效减轻模型大鼠睾丸组织损伤程度,其中与龟鹿二仙胶低剂量组相比,龟鹿二仙胶高剂量组大鼠体质量、精子密度和精子活力均显著上升(P<0.05)。ELISA结果显示,与模型对照组相比,不同剂量龟鹿二仙胶能显著升高T和E2水平(P<0.05),且显著降低FSH、LH和PRL水平(P<0.05)。ROS、SOD和GSH-Px检测结果显示,与模型对照组相比,龟鹿二仙胶低、中、高剂量组ROS水平显著降低(P<0.05),龟鹿二仙胶中、高剂量组和左卡尼汀组SOD和GSH-Px活性显著升高(P<0.05)。免疫组化结果显示,与模型对照组相比,龟鹿二仙胶中、高剂量组和左卡尼汀组大鼠睾丸组织HIF-1α、EGFR、MAPK1水平显著降低(P<0.05)。结论龟鹿二仙胶可能是通过HIF-1α/EGFR/MAPK1信号通路调节氧化应激来改善OAS。

黄芩苷通过调控MET/EGFR通路对肝癌细胞增殖的影响

目的考察黄芩苷通过调控MET/EGFR通路对肝癌细胞增殖的影响。方法HepG-2细胞以0、25、5、75、10、125μg/mL黄芩苷分别处理12、24、48 h,CCK-8法筛选黄芩苷最适质量浓度、作用时间。将HepG-2细胞分为对照组、黄芩苷组(125μg/mL)、克唑替尼组(1μmol/L)、黄芩苷+克唑替尼组(125μg/mL+1μmol/L)、吉非替尼组(1μmol/L)、黄芩苷+吉非替尼组(125μg/mL+1μmol/L)、克唑替尼+吉非替尼组(1μmol/L+1μmol/L)、黄芩苷+克唑替尼+吉非替尼组(125μg/mL+1μmol/L+1μmol/L),给药处理48 h后,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期,Western blot法检测细胞MET/EGFR通路蛋白表达。结果与对照组比较,各给药组细胞增殖抑制率、凋亡率、G1期细胞比例升高(P<005),p-MET、p-EGFR蛋白表达降低(P<005);与吉非替尼组比较,黄芩苷+吉非替尼组细胞增殖抑制率、凋亡率、G1期细胞比例升高(P<005),p-MET、p-EGFR蛋白表达降低(P<005);与克唑替尼组比较,黄芩苷+克唑替尼组细胞增殖抑制率、凋亡率、G1期细胞比例升高(P<005),p-MET、p-EGFR蛋白表达降低(P<005);与克唑替尼+吉非替尼组比较,黄芩苷+克唑替尼+吉非替尼组细胞增殖抑制率、凋亡率、G1期细胞比例升高(P<005),p-MET、p-EGFR蛋白表达降低(P<005)。结论黄芩苷可能通过抑制MET/EGFR信号通路蛋白进而抑制增殖、凋亡,并影响细胞周期。

结肠癌中NGX6抑制EGFR/K-ras/JNK/c-Jun/cyclin D1信号通路的研究

候选抑瘤基因NGX6具有抑制结肠癌增殖和转移的作用,研究表明其为表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的负性调控因子,并可下调JNK通路中重要分子MADD(MAP-kinase activating death domain)的表达,其抑瘤机制是否与抑制EGFR介导的JNK信号通路的活性有关?在已建立的转染NGX6的细胞模型基础上,借助蛋白质印迹(Western blot)和免疫组化方法在细胞和组织水平检测NGX6转染前后EGFR/K-ras/JNK/c-Jun/cyclin D1信号通路中重要蛋白质的表达.结果表明,NGX6转染后结肠癌细胞HT-29在裸鼠体内成瘤明显受抑,差异有统计学意义.Western blot结果显示,在结肠癌细胞中NGX6可明显下调EGFR、K-ras、p-JNK、c-Jun和cyclin D1的表达;进一步采用Western blot和免疫组化法验证NGX6在体内对上述关键分子表达的影响,发现NGX6可抑制裸鼠移植瘤组织中EGFR、K-ras、p-JNK、c-Jun和cyclin D1的表达,与体外结果一致.上述研究表明,NGX6在结肠癌中主要通过抑制EGFR介导的JNK通路的活性而发挥其抑瘤作用,该研究为深入探讨NGX6的机制提供了重要的实验依据.

肺癌中凋亡信号途径及其与EGFR通路的关系

肺癌是目前发病率和病死率最高的恶性肿瘤,其中约80%为非小细胞肺癌（non small cell lung cancer,NSCLC）。目前,肺癌可以简单分为：EGFR突变型、K-RAS突变型、ALK融合型及其他型。对于前3种肺癌亚型目前均有相应的靶向药物治疗。第四型约占肺癌的25%,

miR-130a-3p通过HGF/MET信号通路抑制乳腺癌细胞MCF-7侵袭

目的:探究miR-130a-3p通过HGF/MET信号通路调控上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)影响乳腺癌细胞侵袭转移的分子机制。方法:收集承德医学院附属医院2018年1月至10月收治的22例乳腺癌患者癌组织和配对癌旁组织标本,乳腺癌细胞系(MCF-7、MDA-MB-231和MDA-MB-453)和正常乳腺上皮细胞MCF10A来自承德医学院基础研究所,然后采用q PCR检测组织和细胞系中miR-130a-3p的表达情况;将实验分为对照组、miR-130a-3p mimics组、miR-130a-3p inhibitor组、PHA665752(MET小分子抑制剂)转染组及共转PHA665752+miR-130a-3p inhibitor组,然后采用CCK-8法和Transwell实验分别检测MCF-7细胞增殖活力、侵袭和迁移能力;WB实验检测MCF-7细胞EMT和HGF/MET信号通路相关蛋白的表达情况;此外,采用双荧光素酶报告基因检测miR-130a-3p与MET之间的靶向关系。结果:miR-130a-3p在乳腺癌组织和细胞系中呈低表达;过表达miR-130a-3p可抑制MCF-7细胞增殖、侵袭、迁移和EMT;而抑制miR-130a-3p出现相反的结果。双荧光素酶报告基因结果证实miR-130a-3p靶向下调MET的表达水平,且miR-130a-3p负调控HGF/MET信号通路的表达;进一步实验证明,miR-130a-3p通过阻断HGF/MET信号通路抑制MCF-7细胞增殖、侵袭、迁移和EMT。结论:miR-130a-3p通过阻断HGF/MET信号通路抑制MCF-7细胞EMT过程,进而抑制MCF-7细胞侵袭转移。

姜黄素对口腔鳞癌SCC-25细胞EGFR信号通路表达的影响

目的:探讨姜黄素对口腔鳞癌SCC-25细胞EGFR信号通路表达的影响及其相关的分子机制。方法:不同浓度姜黄素作用细胞24 h,MTT法检测姜黄素对细胞增殖作用的影响,Transwell实验检测EGF和姜黄素共同作用下细胞侵袭能力的变化,Western blot检测姜黄素对SCC-25细胞EGFR活性及下游信号分子(Akt、ERK1/2和STAT3)表达的影响。结果:不同浓度姜黄素作用SCC-25细胞24 h后,均可抑制SCC-25细胞增殖,亦可以抑制EGF诱导的细胞侵袭转移。Western blot结果显示姜黄素对SCC-25细胞总EGFR表达无影响,但可以剂量依赖性抑制SCC-25细胞p-EGFR表达,同时可以剂量依赖性抑制EGFR信号通路下游转录因子Akt、ERK1/2和STAT3磷酸化。结论 :姜黄素可剂量依赖性抑制SCC-25细胞EGFR磷酸化活性及其下游信号通路分子(Akt、ERK1/2、STAT3)的磷酸化。

EGFR信号通路影响Caco-2细胞黏附和侵袭的分子机制

目的:探讨EGFR信号通路对人结肠癌Caco-2细胞增生、黏附和侵袭的影响及其分子机制. 方法:应用细胞培养技术培养Caco-2细胞;以MTT法检测EGF,AG1478和PD98059对Caco-2细胞增生和生长的影响:Matrigel黏附实验、侵袭实验和RT-PCR技术检测EGF,AG1478和PD98059对Caco-2细胞黏附力、侵袭力和MMP-2,MMP-9,TIMP-1和TIMP-2基因转录的影响;Western blot蛋白免疫印迹法检测EGF和AG1478对Caco-2细胞P-EGFR蛋白表达的影响. 结果:外源性EGF(10μg/L)可明显地促进Caco-2细胞的增生和生长,24 h细胞生长率提高了23.4%(P<0.01); 而AG1478(20μmol/L)和PD98059(40 μmol/L)则明显地抑制细胞的增生和生长,其抑制作用没有时间效应关系,AG1478最强抑制时间为第48 h,细胞生长率下降了45.7%(P<0.01),PD98059最强抑制时间为第72 h, 细胞生长率下降了54.6%(P<0.01).Matrigel黏附实验、侵袭实验揭示了,EGF(10 μg/L)提高EGFR活性后能明显地增加Caco-2细胞的体外黏附力(P<0.05)和侵袭力(P-0.001);而且AG1478和PD98059分别阻断EGFR和ERK1/2后能使EGF的促细胞黏附力和侵袭力的作用消失(P<0.01).RT—PCR测定显示,EGF能增加Caco-2细胞MMP-2,MMP-9 mRNA的表达, 同时也能减少TIMP-1和TIMP-2 mRNA的表达;而AG1478和PD98059均能逆转EGF对Caco-2细胞基因的影响,使MMP-2和MMP-9mRNA的表达下降,TIMP-1 和TIMP-2 mRNA的表达上升,结果MMP-2/TIMP-2 比值和MMP-9/TIMP-1比值均下降(P<0.00 1). 结论:EGFR信号可能通过下游MAPK通路传递信息, 改变MMP-2,MMP-9,TIMP-1和TIMP-2基因功能,从而有助于结肠癌Caco-2细胞的侵袭与转移.

紫铆因靶向EGFR和AuroraA/B信号通路抑制非小细胞肺癌的研究

紫铆因抗多种肿瘤的生物学活性已被广泛研究,但其抑制非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的分子机制还不清楚。研究中,通过MTS和软琼脂集落实验检测紫铆因对非小细胞肺癌细胞停泊依赖和停泊非依赖增殖的影响,利用免疫印迹检测紫铆因处理后非小细胞肺癌表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)信号通路的磷酸化状态,同时采用流式细胞术检测紫铆因对非小细胞肺癌细胞周期演进的影响。研究发现紫铆因剂量依赖性抑制A549和H1650细胞增殖,在抑制EGFR信号通路磷酸化活化的同时下调EGFR总蛋白及EGFR在胞膜和胞核的表达,而且紫铆因下调AuroraA/B和H3-S10磷酸化,促进A549细胞G2/M期阻滞。结果表明紫铆因可通过靶向EGFR和AuroraA/B信号通路抑制非小细胞肺癌。

HGF/c-Met信号传导通路与晚期非小细胞肺癌关系的研究进展

肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)/c—Met信号传导通路在晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的发生、发展中起重要调控作用,并与表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂的继发性耐药密切相关。针对该通路的分子靶向治疗为晚期NSCLC提供了新的思路,现已成为近年研究的热点:本文就HGF/c—Met的结构、功能及其在晚期NSCLC中的治疗进展等作一综述。

JAK-STAT3与EGFR-STAT3信号通路在非小细胞肺癌演进中的作用

JAK-STAT3信号通路和EGFR-STAT3信号通路在非小细胞肺癌(NSCLC)中呈过度激活状态,增加了癌细胞的恶性表型。通过对这两条信号通路的抑制可逆转或减慢癌细胞的恶性转化进程,以它们为治疗靶点的药物已在临床中取得一定疗效,相关的研究将会进一步深入。本文将对这两条信号通路在NSCLC演进中的作用做一综述。

脑胶质瘤中miR-7与EGFR/PI3K信号通路相关基因蛋白表达的关系

目的观察脑胶质瘤组织、U251细胞中miR-7、EGFR/PI3K信号通路相关基因蛋白(EGFR、PI3K和AKT2)的表达关系。方法 42例脑胶质瘤患者,手术切除取肿瘤组织,其中8例选取癌旁正常脑组织。培养脑胶质瘤U251细胞,分为空白对照组(仅加入脂质体)、无义序列组(加入无义序列和脂质体)、miR-7转染组(转染miR-7基因片段)。采用RT-PCR法检测脑胶质瘤组织、各组U251细胞中的miR-7;免疫组化法检测胶质瘤组织中的EGFR、PI3K和AKT蛋白,RT-PCR和Western blotting法分别检测各组U251细胞EGFR、PI3K、AKT2 mRNA和蛋白。结果脑胶质瘤和正常脑组织中的miR-7 mRNA表达分别为1.47±0.27和3.47±0.15,两者比较,P<0.05。随着脑胶质瘤WHO级别的增加,miR-7表达逐渐减少,EGFR、PI3K和AKT2表达增加(P均<0.05)。脑胶质瘤组织中miR-7与EGFR、PI3K、pAKT表达呈负相关(r分别为-0.754、-0.528、-0.467,P均<0.05)。U251细胞转染miR-7后EGFR、PI3K和AKT表达降低(P均<0.05)。结论脑胶质瘤组织中miR-7表达减少,与EGFR/PI3K通路成员表达呈负相关;U251细胞转染miR-7后EGFR、PI3K和AKT表达降低。EGFR/PI3K通路可能是miR-7调控胶质瘤发生发展的重要机制之一。

c-Met信号通路及其抑制剂的研究进展

c-Met和肝细胞生长因子(HGF)在很多肿瘤细胞组织中高表达。c-Met信号通路的活化引起一系列的信号级联放大反应,导致了肿瘤细胞的生长、增殖、侵袭和凋亡减少。HGF是c-Met的配体,参与并影响肿瘤微环境的形成。该文就HGF如何活化c-Met及其下游的信号通路、c-Met与其他受体介导的信号通路间的串话对耐药性的影响以及针对HGF和c-Met信号通路的抑制剂的研究进展进行综述。

芦荟大黄素通过EGF/EGFR/HER2信号通路对乳腺癌内分泌耐药的作用

目的 探讨芦荟大黄素对乳腺癌内分泌耐药的影响以及对表皮生长因子(EGF)/表皮生长因子受体(EGFR)/人类表皮生长因子受体2(HER2)信号通路的调节作用。方法 建立MCF-7/TAM耐药细胞株,不同浓度芦荟大黄素处理检测细胞增殖活性,单独使用EGF或EGF和芦荟大黄素联合处理MCF-7/TAM细胞,检测细胞增殖和凋亡情况,以及EGF、p-EGFR、EGFR和HER2蛋白表达情况。结果 成功建立MCF-7/TAM耐药细胞株,且细胞存活率随芦荟大黄素浓度的升高而降低。与对照组比较,EGF组细胞凋亡率以及Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达量降低,B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、p-EGFR和HER2蛋白表达量升高(P<0.05)。与对照组比较,芦荟大黄素组细胞存活率、Ki67、Bcl-2、p-EGFR和HER2蛋白表达量降低,细胞凋亡率和Bax蛋白表达量升高(P<0.05);与芦荟大黄素组比较,芦荟大黄素+EGF组细胞存活率、Ki67、Bcl-2、p-EGFR和HER2蛋白表达量升高,细胞凋亡率和Bax蛋白表达量降低(P<0.05)。结论 芦荟大黄素可降低乳腺癌内分泌耐药,其可能是通过调节EGF/EGFR/HER2信号通路发挥作用。

EGFR介导的信号通路影响肺癌细胞增殖与转移的机制

目的探讨EGFR介导的信号通路对肺癌细胞增殖与转移的影响,并分析其潜在的机制。方法收集正常人肺组织石蜡块12例和非小细胞肺癌(NSCLC)癌组织石蜡块34例,其中17例为EGFR突变肺癌组织。免疫组织化学法检测其中DDX59的阳性率。采用重组EGF干预人正常肺上皮细胞,Western Blot法检测干预后细胞中DDX59蛋白的表达。采用不同的MAPK途径阻断剂干预EGFR突变的人肺癌细胞系H1975,检测DDX59蛋白的表达。将慢病毒载体介导的靶向DDX59的shRNA转染入H1975细胞中,MTT法和划痕实验检测sh-DDX59对H1975细胞增殖率和迁移率的影响。结果正常肺组织DDX59阳性率为0%(0/12),肺癌组织为55.9%(19/34),EGFR突变肺癌组织为70.6%(12/17),对比差异具有统计学意义(χ2=15.341,P<0.05)。重组EGF干预正常人肺上皮细胞可显著增加DDX59蛋白的表达(P<0.05)。与DMSO对比,Ras抑制剂、Raf抑制剂、MEK抑制剂和MAPK抑制剂均可显著降低p-ERK和DDX59的蛋白表达(P<0.05),对ERK蛋白的表达无显著影响。与sh-RNA对比,sh-DDX59-1和sh-DDX59-2可显著降低DDX59蛋白表达、细胞增殖率和细胞迁移率(P<0.05)。结论EGFR介导的DDX59蛋白上调参与肺癌的发生过程,DDX59受MAPK途径的调控。

GTPBP4基因沉默介导EGFR/PI3K/AKT信号通路对顺铂诱导的胃癌细胞凋亡的调控机制

目的:探讨GTP结合蛋白4(GTPBP4)基因介导EGFR/PI3K/AKT信号通路对顺铂诱导的胃癌细胞凋亡的调控机制。方法:选取人胃癌细胞株MGC-803、NCI-N87、SGC-7901、MKN-45及人胃黏膜上皮细胞株GES-1,筛选癌细胞中GTPBP4表达最高的细胞株并分为6组:Blank组(胃癌细胞不做处理)、阴性对照组(转染含有无关序列的重组质粒)、GTPBP4 shRNA组(转染含有GTPBP4 shRNA的重组质粒)、GTPBP4过表达组(转染含有GTPBP4片段的重组质粒)、EGFR/PI3K/AKT inhibitor组(EGFR/PI3K/AKT通路抑制剂处理细胞)、Combined treatment组(EGFR/PI3K/AKT通路抑制剂联合GTPBP4 shRNA处理细胞),分别给予顺铂处理。qRT-PCR和Western blot检测EGFR/PI3K/AKT信号通路和凋亡相关基因的mRNA和蛋白表达水平。MTT法检测各组细胞的增殖活力。Transwell检测各组细胞侵袭情况。流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果:与人胃黏膜上皮细胞相比,胃癌细胞株中GTPBP4表达显著上调(P<0.05)。给予顺铂处理后,胃癌细胞GTPBP4表达下调。与Blank组相比,GTPBP4 shRNA组及EGFR/PI3K/AKT inhibitor组Bax表达上调,Bcl-2、EGFR、PI3K、AKT、p-PI3K和p-AKT表达均下调,细胞增殖、侵袭能力降低,凋亡率上升(P<0.05),且Combined treatment组各指标变化趋势更为明显(P<0.05)。GTPBP4过表达组与GTPBP4 shRNA组、EGFR/PI3K/AKT inhibitor组及Combined treatment组变化呈相反趋势(P<0.05)。Blank组和NC组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:GTPBP4基因沉默可抑制EGFR/PI3K/AKT信号通路激活,抑制胃癌细胞的增殖、侵袭能力,促进顺铂诱导的胃癌细胞凋亡。

恶性胶质瘤中EGFR信号通路及靶向治疗药物

恶性胶质瘤（glioblastoma，GBM）是人类颅脑肿瘤中最常见、恶性程度最高，占胶质瘤的51％，发病率在3．19／10万，两年生存率约25％，五年生存率仅为10％［1］。 GBM 在脑实质中呈浸润性生长，具有高侵袭性、术后复发快、病死率高等特点。目前针对 GMB 的治疗方法主要为外科手术切除结合放疗、化疗等综合方案，但疗效不乐观。随着分子生物学技术发展，分子靶向治疗应用于临床，现就分子靶向治疗有关知识做一介绍。

芍药苷通过影响EGFR/RhoA通路在非小细胞肺癌A549细胞中的抗肿瘤活性

目的:探究基于生信靶点和基础实验研究芍药苷(PF)对人非小细胞肺癌细胞(A549)的潜在抗肿瘤活性机制。方法:分别采用CCK-8实验、平板克隆实验、细胞划痕实验及流式细胞术实验检测PF对NSCLC细胞系A549生长、迁移和凋亡的影响;利用SwissTargetPrediction、PharmMapper和ChEMBL数据库检索PF的相关靶点,通过GeneCards、DisGeNET和OMIM数据库中检索NSCLC的靶点,使用STRING和DAVID数据库进行蛋白质-蛋白质分析与富集分析,运用SYBYL软件对排名前10靶点对应的蛋白质与PF进行分子对接,应用Western blot检测PF对p-AKT和p-EGFR和RhoA蛋白表达。结果:CCK-8和平板克隆实验表明PF能有效抑制肺癌细胞生长。50μmol/L和100μmol/L的PF在24 h对A549细胞的迁移率分别为22.89%、13.78%,低于空白组的55.85%(P<0.05)。PF在24 h对A549细胞的凋亡率高于对照组(P<0.05)。基因靶点预测与验证结果显示:PF与NSCLC的核心靶点为32个,对NSCLC富集分析发现,包含PI3K-AKT、MAPK、Ras、Rap1、雌激素、FoxO和VEGF信号通路等7条潜在作用通路。分子对接结果显示,与PF作用排名前三的蛋白质分别为RhoA、AKT和EGFR。与对照组相比,PF干预A549细胞后p-AKT和p-EGFR和RhoA的表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:PF可能通过调控EGFR/RhoA通路抑制非小细胞肺癌A549细胞生长、迁移并促进其凋亡。