莪术醇修饰的肿瘤疫苗抗MFC效应的研究

目的:研究中药莪术提取的有效成分-莪术醇生物修饰构建的肿瘤细胞疫苗对荷瘤(MFC)小鼠的免疫功能变化及治疗效应。方法:用现代生物学技术修饰构建瘤苗,观察莪术醇-MFC细胞瘤苗体外激活脾淋巴细胞的能力,体内成瘤性变化及作为瘤苗对荷瘤胃癌的小鼠治疗作用。结果:莪术醇-MFC细胞瘤苗在体外能有效诱导免疫细胞活化增殖和特异性CTL活性的产生,体内的成瘤能力明显下降,免疫接种瘤苗后对荷瘤鼠胃癌小鼠有较好的治疗效果。结论:莪术醇修饰的肿瘤细胞瘤苗能明显增强其免疫原性、对荷瘤胃癌小鼠有较好的治疗效应。

藤珠胃康颗粒含药血清对小鼠胃癌MFC细胞增殖和凋亡的影响

目的研究藤珠胃康颗粒含药血清对小鼠胃癌MFC细胞增殖和凋亡的影响。方法 MFC细胞经不同浓度藤珠胃康颗粒含药血清处理后,采用MTT法检测藤珠胃康颗粒含药血清对细胞增殖的影响;采用倒置显微镜观察细胞形态变化;采用流式细胞仪及Annexin V/PI染色的方法检测对细胞凋亡的影响。结果与对照组比较,藤珠胃康颗粒含药血清中、高剂量组细胞增殖抑制率显著增高(P<0.05);显微镜下观察,贴壁细胞逐渐脱落、缩成圆形;与对照组比较,给药组细胞凋亡率均显著增高(P<0.05),并呈现剂量依赖性。结论藤珠胃康颗粒含药血清对小鼠胃癌MFC细胞增殖有抑制作用,并能诱导细胞凋亡。

褪黑素对小鼠MFC前胃癌细胞ERK、Akt及NF-κB表达的影响

目的探讨褪黑素对小鼠MFC前胃癌细胞ERK、Akt及NF-κB表达的影响。方法建立褪黑素在不同时间点干预胃癌细胞的体外模型,免疫印迹法观察褪黑素对小鼠MFC前胃癌细胞p-ERK/ERK、p-Akt/Akt,NF-κB表达的影响,CCK-8检测PI3K抑制剂Wortmannin对MFC细胞增殖的作用。结果①2mmol/L褪黑素作用24h、48h后明显下调MFC细胞ERK1/2、Akt的磷酸化,但对ERK1/2、Akt表达无影响;②Wortmannin明显抑制MFC细胞增殖活性,与MLT作用有明显协同效应;③褪黑素对NF-κB表达无影响。结论褪黑素可通过抑制ERK1/2、Akt的磷酸化从而抑制胃癌细胞增殖。

绞股蓝多糖对MFC胃癌荷瘤小鼠肿瘤生长抑制及免疫调节作用

目的探讨绞股蓝多糖对MFC胃癌荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制及免疫调节作用。方法MFC胃癌细胞接种于BALB/c小鼠右侧腋下,建立MFC胃癌荷瘤小鼠模型。将小鼠随机分为模型组、环磷酰胺组(25mg/kg)及绞股蓝多糖高、低剂量组(100、50mg/kg),每组10只,环磷酰胺组腹腔注射,绞股蓝多糖组灌胃给药,1次/d,给药周期12 d。检测抑瘤率及脏器指数,NK细胞杀伤活性、脾淋巴细胞增殖能力及腹腔巨噬细胞吞噬功能,ELISA检测IFN-γ、IL-2和TNF-α水平,流式细胞仪检测外周血淋巴细胞亚群。结果与模型组比较,各药物处理组小鼠瘤质量均明显降低(P<0.05);环磷酰胺组小鼠体质量明显降低(P<0.05),而绞股蓝多糖组小鼠体质量无明显差异(P>0.05);环磷酰胺组小鼠脾脏指数、胸腺指数、NK细胞杀伤活性、淋巴细胞增殖能力、巨噬细胞吞噬功能、IFN-γ、IL-2、TNF-α水平、CD4+、CD8+细胞水平及CD4+/CD8+比值均明显降低(P<0.05),而绞股蓝多糖各剂量组上述指标均明显增加(P<0.05)。结论绞股蓝多糖对MFC胃癌荷瘤小鼠的肿瘤生长具有抑制作用,该作用与免疫调节作用有关。

柠檬苦素对MFC胃癌荷瘤模型小鼠免疫功能及凋亡相关因子表达的影响

目的:研究柠檬苦素对MFC胃癌荷瘤模型小鼠免疫功能及凋亡相关因子表达的影响。方法:将MFC胃癌细胞接种于小鼠右侧腋下以复制MFC胃癌荷瘤模型,造模成功后分为模型组、环磷酰胺组(阳性对照,25 mg/kg)和柠檬苦素高、中、低剂量组(100、50、25 mg/kg),每组10只。除模型组小鼠灌胃0.5%羧甲基纤维素钠外,其余各组小鼠灌胃相应药物,每天1次,连续14天。小鼠给药前及末次给药后均测定体质量,并在末次给药后取脾、胸腺、肿瘤组织以计算脾指数、胸腺指数及抑瘤率;采用流式细胞术检测小鼠CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞百分数和CD4^(+)/CD8^(+)比值;采用酶联免疫吸附法检测小鼠血清中免疫功能相关指标[白细胞介素2(IL-2)、IL-10、干扰素γ(IFN-γ)]的表达水平;采用实时定量聚合酶链式反应法和Western blot法检测小鼠肿瘤组织中凋亡相关因子[细胞色素C(Cyt-C)、B淋巴细胞瘤2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)]的mRNA和蛋白的相对表达水平。结果:除环磷酰胺组小鼠体质量较模型组显著降低外(P<0.05),其余各组小鼠体质量的差异均无统计学意义(P<0.05)。环磷酰胺组和柠檬苦素高、中、低剂量组小鼠的抑瘤率分别为(58.16±7.07)%、(37.09±4.26)%、(27.30±3.64)%、(15.13±2.95)%。与模型组比较,环磷酰胺组小鼠脾指数、胸腺指数、CD4^(+)和CD8^(+)T淋巴细胞百分数、CD4^(+)/CD8^(+)比值、血清中IL-2和IL-10的表达水平、肿瘤组织中Bcl-2的mRNA和蛋白的相对表达水平以及柠檬苦素各剂量组的IL-10表达水平、Bcl-2的mRNA和蛋白的相对表达水平均显著降低(P<0.05);环磷酰胺组IFN-γ表达水平、Cyt-C和Bax的mRNA和蛋白的相对表达水平,以及柠檬苦素各剂量组的脾指数(低剂量组除外)和胸腺指数、CD4^(+)和CD8^(+)T淋巴细胞百分数、CD4^(+)/CD8^(+)比值、IL-2和IFN-γ的表达水平、Cyt-C和Bax的mRNA和蛋白的相对表达水平均显著升高(P<0.05)。结论:柠檬苦素能抑制MFC胃癌荷瘤模型小鼠肿瘤组织的生长,且毒副作用相对较小;其作用机制与提高免疫功能和诱导凋亡有关。

氟胞嘧啶/胞嘧啶脱氨酶自杀基因疗法结合热休克蛋白多肽复合物治疗小鼠胃癌

目的 :研究氟胞嘧啶 /胞嘧啶脱氨酶 (5 FC/CD)基因疗法与热休克蛋白 多肽复合物 (HSP70 PC)免疫疗法联合抗肿瘤效果。方法 :将携带CD基因的重组腺病毒注射到小鼠MFC瘤体内 ,腹腔注射 5 FC ,同时皮下接种HSP70 PC。结果 :经联合治疗后 ,70 %荷瘤小鼠肿瘤体积缩小 ,消退 ,小鼠存活期延长 ,细胞毒T淋巴细胞(CTL)杀伤活性增高 ,CD+ 4及CD+ 8T细胞浸润明显。结论 :5 FC/CD基因疗法结合HSP PC免疫疗法抗小鼠MFC瘤作用显著 ,具有临床应用前景。

褪黑素对小鼠胃癌细胞褪黑素膜受体MT1、MT2表达的影响

目的：探讨褪黑素对小鼠胃癌细胞褪黑素膜受体MT1、MT2表达的影响。方法：应用小鼠MFC前胃癌细胞建立荷胃癌小鼠模型，不同浓度褪黑素干预后，运用免疫组织化学、实时荧光定量PCR、免疫印迹定位定量检测MT1、MT2表达的变化。结果：移植瘤肿瘤细胞表达褪黑素膜受体MT1、MT2，褪黑素促进肿瘤组织膜受体MT1、MT2表达，并呈剂量依赖关系。结论：褪黑素上调褪黑素膜受体MT1、MT2的表达，说明褪黑素可能通过膜受体信号通路抑制胃癌生长。

负载胃癌新抗原肽和CD73抑制剂纳米粒子的中性粒细胞疫苗的制备和抗肿瘤效果评价

目的:制备负载胃癌细胞新抗原肽和CD73抑制剂的中性粒细胞(NEs)疫苗并表征,初步评价其在荷瘤615小鼠中的抗肿瘤效果。方法:通过Percoll梯度密度离心法分离纯化小鼠骨髓来源的NEs。分别制备仅负载胃癌细胞来源新抗原肽疫苗(DP-Ag-MFC-NEs),以及同时负载新抗原肽和CD73抑制剂纳米粒子的联合疫苗(DP-Ag-MFC-NEs+antiCD73+CpG),观察疫苗对荷瘤小鼠的治疗效果。结果:一只10周龄615小鼠可分离纯化到平均约1.5×10^(6)个NEs,细胞活性在95%以上,纯度在90%以上。和对照组相比,DP-Ag-MFC-NEs可显著抑制小鼠皮下肿瘤生长,使部分小鼠痊愈(CR),小鼠淋巴结中CD4^(+)、CD8^(+)阳性细胞比例显著增高(P<0.05)。CR小鼠再次接种MFC胃癌细胞,没有小鼠肿瘤复发。联合疫苗的治疗效果确切,小鼠存活率最高(75%,P=0.038)。结论:负载胃癌细胞来源的新抗原肽和CD73抑制剂的中性粒细胞疫苗对小鼠无明显毒性,可显著抑制肿瘤生长,甚至治愈小鼠。同时,该疫苗可在小鼠体内激活记忆型免疫应答。

大补脾汤联合奥沙利铂对胃癌荷瘤小鼠瘤组织TLR4/MyD88/NF-κB信号通路及下游相关分子的影响

目的:研究大补脾汤联合奥沙利铂对胃癌荷瘤小鼠瘤组织TLR4/MyD88/NF-κB信号通路及下游相关分子的影响,探讨其可能的作用机制。方法:采用昆明小鼠建立胃癌荷瘤模型,造模成功后将小鼠随机分为5组:模型组、奥沙利铂组(10 mg/kg)、大补脾汤高、中、低剂量(21.58、10.79、5.40 g/kg)联合奥沙利铂组,每组10只。造模成功后开始给药,连续给药14 d;末次给药后次日眼球取血,处死小鼠,摘取肿瘤组织称重,计算抑瘤率;采用苏木素-伊红(HE)染色后观察瘤组织形态,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)、免疫组化法(IHC)和Western blot分别检测小鼠肿瘤组织中Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)和核因子κB(NF-κB)mRNA和蛋白相对表达,采用RT-qPCR检测小鼠肿瘤组织中TNF-α和IL-6 mRNA相对表达。结果:奥沙利铂组、大补脾汤高、中、低剂量联合奥沙利铂组瘤质量均较模型组显著降低(P<0.01),抑瘤率分别为37.12%、49.48%、42.10%、40.65%,大补脾汤高剂量联合奥沙利铂组与奥沙利铂组相比差异具有统计学意义(P<0.05);HE结果显示:与模型组相比,各给药组能明显降低肿瘤细胞密度,引起肿瘤细胞坏死;与模型组相比,各给药组肿瘤组织中TLR4、MyD88、TRAF6和NF-κB p65 mRNA和蛋白相对表达均显著降低(P<0.01,P<0.05);与奥沙利铂组相比,大补脾汤高、中剂量联合奥沙利铂组肿瘤组织中TLR4、MyD88、TRAF6和NF-κB p65 mRNA和蛋白相对表达均显著降低(P<0.05);与模型组相比,各给药组肿瘤组织中TNF-α和IL-6 mRNA相对表达均显著降低(P<0.01);与奥沙利铂组相比,大补脾汤高剂量联合奥沙利铂组肿瘤组织中TNF-α和IL-6 mRNA相对表达均显著降低(P<0.05)。结论:大补脾汤可通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路下调下游炎症因子TNF-α和IL-6的表达,调节免疫微环境,发挥抗肿瘤作用,抑制胃癌发生发展。

猕猴桃多糖对前胃癌MFC细胞及其原位移植瘤细胞凋亡的影响

目的探索猕猴桃多糖对前胃癌(MFC)细胞及其原位移植瘤细胞凋亡的分子机制。方法采用MTT法检测猕猴桃多糖对MFC细胞增殖抑制率,Western blotting法检测MFC细胞Mcl-1、Bcl-2、Bak和Bcl-xl蛋白的表达;OB吻合胶粘贴法建立胃癌原位移植瘤模型,采用TUNEL法检测肿瘤组织中细胞凋亡情况,免疫组织化方法检测Bcl-2、Bax的表达情况。结果 MTT实验表明随着猕猴桃多糖质量浓度的增加对MFC细胞增殖的抑制作用增强,且随着作用时间的延长,其抑制作用增强;Western blotting实验表明猕猴桃多糖作用于MFC细胞24 h下调Mcl-1、Bcl-2、Bcl-xl蛋白的表达,上调Bak蛋白的表达;体内实验表明:与模型组比较,猕猴桃多糖中、高剂量组及5-氟尿嘧啶(5-Fu)阳性对照组中TUNEL检测细胞凋亡的平均阳性指数明显升高(P<0.01);各给药组均能够显著下调Bcl-2的表达、上调Bax的表达(P<0.01)。结论猕猴桃多糖能够诱导胃癌MFC细胞凋亡,下调MFC细胞Mcl-1、Bcl-2、Bcl-xl蛋白和上调Bax、Bak蛋白表达,提示猕猴桃多糖的抗肿瘤机制与其通过Bcl-2家族蛋白所参与的细胞凋亡途径有关。

人参皂苷Ro对胃癌细胞MFC增殖和凋亡的影响

目的探讨人参皂苷Ro对胃癌细胞MFC增殖和凋亡的影响。方法采用MTT染色法检测MFC细胞的增殖抑制率;流式细胞仪检测MFC细胞周期和凋亡情况;MFC移植瘤小鼠,经受试药物处理后,剥取瘤组织称量并计算抑瘤率。结果与对照组比较,人参皂苷Ro在6~96μg·m L^(-1)范围内对MFC细胞增殖的抑制率随浓度的增加而显著升高。与对照组比较,人参皂苷Ro高剂量组对MFC细胞G0/G1期和凋亡率明显升高,G2/M期,S期明显降低;人参皂苷Ro各剂量组均能显著抑制肿瘤生长,与模型组比较,各给药组肿瘤的质量明显降低,其中,高剂量组的抑瘤率为62.7%。结论人参皂苷Ro对MFC移植瘤具有抑制生长的作用,这可能与诱导MFC细胞凋亡和抑制增殖有关。

白花蛇舌草总黄酮对MFC胃癌荷瘤小鼠血清肿瘤标志物和免疫功能的影响

目的探讨白花蛇舌草总黄酮(TFHD)对MFC荷瘤小鼠血清肿瘤标志物和免疫功能的影响。方法用MFC细胞构建胃癌荷瘤模型。按照体重将造模成功小鼠随机分5组:模型组、对照组和低、中、高3个剂量实验组,每组10只。另设10只正常小鼠为正常组。实验组灌胃TFHD 200,100,50 mg·kg^(-1),对照组腹腔注射环磷酰胺25 mg·kg^(-1),模型组、空白组灌胃和腹腔注射生理盐水,1次/天,连续给药8 d。用酶联免疫吸附法检测血清中癌胚抗原(CEA)、糖类抗原72-4(CA72-4)、白细胞介素-2(IL-2)和白细胞介素-6(IL-6)含量;用免疫组化法检测肿瘤组织中Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核转录因子-κB(NF-κB)表达水平(单位面积平均光密度值)。结果正常组、模型组、对照组和低、中、高3个剂量实验组的CEA含量分别为(849.64±46.98),(1 076.81±75.87),(874.64±84.78),(1 025.00±68.22),(947.10±41.53)和(893.48±79.22) pg·mL^(-1);这6组CA72-4含量分别是(12.15±0.78),(15.99±0.91),(12.47±1.39),(15.14±1.15),(13.82±0.98)和(12.84±0.77) U·mL^(-1);这6组IL-2含量分别是(290.00±23.01),(224.94±23.06),(202.18±8.19),(237.44±27.48),(259.23±9.84)和(261.31±13.55) pg·mL^(-1);这6组IL-6含量分别是(91.57±7.62),(115.93±6.49),(95.44±6.79),(110.39±4.85),(101.02±8.13)和(98.45±6.17) pg·mL^(-1)。模型组、对照组和低、中、高3个剂量实验组的TLR4表达分别为0.32±0.02,0.24±0.01,0.30±0.03,0.25±0.02和0.21±0.02;这5组MyD88表达分别是0.63±0.02,0.32±0.11,0.54±0.09,0.43±0.08和0.38±0.05;这5组NF-κB表达分别是0.46±0.02,0.26±0.05,0.41±0.04,0.37±0.04和0.30±0.09。上述指标:模型组与正常组比较,差异均有统计学意义(均P <0.01);对照组和高、中2个剂量实验组与模型组比较,除NF-κB中剂量实验组外,差异均有统计学意义(均P <0.01)。结论 TFHD能够降低血清肿瘤标志物并调节小鼠免疫细胞因子,改善机体免疫功能,同时下调TLR4、MyD88、NF-κB的表达起到抗肿瘤作用。

地榆皂苷Ⅱ对MFC胃癌荷瘤小鼠的抗肿瘤作用及机制

目的研究地榆皂苷Ⅱ(ZiyuglycosideⅡ,ZYGⅡ)的体内抗肿瘤作用,并初步探究其可能的作用机制。方法利用BALB/c小鼠建立MFC胃癌荷瘤小鼠模型,将荷瘤小鼠按每组8只随机分为对照组(生理盐水治疗)、ZYGⅡ低、中、高剂量组(分别隔日腹腔注射10、20、40 mg/kg ZYGⅡ)和顺铂组(Cisplatin,DDP,隔日腹腔注射2 mg/kg)。连续治疗21天后摘眼球取血并处死小鼠,计算胸腺指数和脾指数,采用血细胞分析仪对小鼠外周血进行血常规分析,ELISA法检测外周血中TNF-α、IL-2和IL-6水平,RT-PCR法、Western blot法分别检测肿瘤组织中Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA和蛋白水平。结果与对照组相比,ZYGⅡ组荷瘤小鼠的瘤重明显降低(P<0.05),20、40 mg/kg的ZYGⅡ的抑瘤率分别为31%和40%,且胸腺指数和脾脏指数呈剂量依赖性升高(P<0.05);外周血白细胞(White blood cell,WBC)显著升高(P<0.05)、血小板(Platelet,PLT)无明显变化;TNF-α、IL-2和IL-6的分泌呈剂量依赖性增加(P<0.05),Bax、Caspase-3 mRNA水平和蛋白表达显著升高(P<0.05),Bcl-2 mRNA水平和蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论ZYGⅡ对MFC荷瘤小鼠具有良好的抗肿瘤活性,其机制可能与增强小鼠免疫功能、诱导肿瘤细胞凋亡有关。