黄精多糖对MFC胃癌荷瘤小鼠抑瘤及免疫调节作用

目的探讨黄精多糖对MFC胃癌荷瘤小鼠抑瘤及免疫调节作用。方法用BALB/c小鼠建立MFC胃癌荷瘤小鼠模型,随机分为对照组、模型组、环磷酰胺组(20 mg/kg)及黄精多糖高、低(400、100 mg/kg)剂量组,灌胃给药21 d。检测抑瘤率,脏器指数,采用MTT法和乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定脾淋巴细胞增殖刺激指数及NK细胞活性,ELISA检测血清TNF-α、IL-2、IL-6水平,RT-PCR法检测脾脏TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达。结果与模型组比较,黄精多糖高、低剂量组瘤重降低(P<0.05),脾脏指数、脾淋巴细胞增殖刺激指数、NK细胞活性均增加(P<0.05);除黄精多糖低剂量组小鼠血清TNF-α、IL-6水平无变化外(P>0.05),其余各组TNF-α、IL-2、IL-6水平均增加(P<0.05);黄精多糖高、低剂量组小鼠脾脏TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达均降低(P<0.05)。结论TLR4/NF-κB信号通路的激活受阻可能是黄精多糖在MFC胃癌荷瘤小鼠体内发挥抑瘤作用及免疫调节作用的潜在机制。

益气复生方对MFC胃癌荷瘤小鼠肿瘤生长抑制作用及相关机制

目的探讨益气复生方对MFC胃癌荷瘤小鼠肿瘤生长的影响及初步探讨可能的作用机制。方法建立MFC胃癌荷瘤小鼠模型,随机分为5组:模型组(0.9%NaCl溶液),益气复生方低剂量组2.53g/kg,益气复生方中剂量组5.06g/kg,益气复生方高剂量组10.12g/kg,阳性对照组400mg/kg(卡培他滨)。每日1次,灌胃给药28d。给药后处死小鼠取材,观察各组小鼠肿瘤生长情况,计算抑瘤率以及肝脏、胸腺和脾脏指数,用Western blot法检测Ras/Raf信号通路上关键蛋白表达。结果(1)从第1周开始,随着喂养小鼠的体重逐渐增加,第2周、第3周、第4周各分组小鼠体重与第1周相比有统计学差异(P<0.05);第4周对小鼠脾脏、胸腺、肝脏分离称重计算脏器指数后发现与模型组相比益气复生方和卡培他滨对脏器指数的影响均没有统计学差异(P>0.05)。(2)在抑瘤率方面,益气复生方高剂量组与模型组相比,有统计学差异(P<0.05)。(3)与模型组相比,卡培他滨组减少MMP-2、VEGF、MEK1/2、ERK1/2的蛋白表达(P<0.05);与模型组相比,益气复生方中剂量和高剂量组降低MMP-2蛋白表达(P<0.05),益气复生方高剂量组降低ERK1/2,MEK1/2蛋白表达(P<0.05);与模型组相比,益气复生方和卡培他滨组均无减少MMP-9蛋白表达(P>0.05)。结论益气复生方可以抑制MFC胃癌荷瘤小鼠的肿瘤生长情况,其作用机制可能是通过降低了MMP-2、MEK1/2、ERK1/2蛋白的表达。

绞股蓝多糖对MFC胃癌荷瘤小鼠肿瘤生长抑制及免疫调节作用

目的探讨绞股蓝多糖对MFC胃癌荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制及免疫调节作用。方法MFC胃癌细胞接种于BALB/c小鼠右侧腋下,建立MFC胃癌荷瘤小鼠模型。将小鼠随机分为模型组、环磷酰胺组(25mg/kg)及绞股蓝多糖高、低剂量组(100、50mg/kg),每组10只,环磷酰胺组腹腔注射,绞股蓝多糖组灌胃给药,1次/d,给药周期12 d。检测抑瘤率及脏器指数,NK细胞杀伤活性、脾淋巴细胞增殖能力及腹腔巨噬细胞吞噬功能,ELISA检测IFN-γ、IL-2和TNF-α水平,流式细胞仪检测外周血淋巴细胞亚群。结果与模型组比较,各药物处理组小鼠瘤质量均明显降低(P<0.05);环磷酰胺组小鼠体质量明显降低(P<0.05),而绞股蓝多糖组小鼠体质量无明显差异(P>0.05);环磷酰胺组小鼠脾脏指数、胸腺指数、NK细胞杀伤活性、淋巴细胞增殖能力、巨噬细胞吞噬功能、IFN-γ、IL-2、TNF-α水平、CD4+、CD8+细胞水平及CD4+/CD8+比值均明显降低(P<0.05),而绞股蓝多糖各剂量组上述指标均明显增加(P<0.05)。结论绞股蓝多糖对MFC胃癌荷瘤小鼠的肿瘤生长具有抑制作用,该作用与免疫调节作用有关。

柠檬苦素对MFC胃癌荷瘤模型小鼠免疫功能及凋亡相关因子表达的影响

目的:研究柠檬苦素对MFC胃癌荷瘤模型小鼠免疫功能及凋亡相关因子表达的影响。方法:将MFC胃癌细胞接种于小鼠右侧腋下以复制MFC胃癌荷瘤模型,造模成功后分为模型组、环磷酰胺组(阳性对照,25 mg/kg)和柠檬苦素高、中、低剂量组(100、50、25 mg/kg),每组10只。除模型组小鼠灌胃0.5%羧甲基纤维素钠外,其余各组小鼠灌胃相应药物,每天1次,连续14天。小鼠给药前及末次给药后均测定体质量,并在末次给药后取脾、胸腺、肿瘤组织以计算脾指数、胸腺指数及抑瘤率;采用流式细胞术检测小鼠CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞百分数和CD4^(+)/CD8^(+)比值;采用酶联免疫吸附法检测小鼠血清中免疫功能相关指标[白细胞介素2(IL-2)、IL-10、干扰素γ(IFN-γ)]的表达水平;采用实时定量聚合酶链式反应法和Western blot法检测小鼠肿瘤组织中凋亡相关因子[细胞色素C(Cyt-C)、B淋巴细胞瘤2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)]的mRNA和蛋白的相对表达水平。结果:除环磷酰胺组小鼠体质量较模型组显著降低外(P<0.05),其余各组小鼠体质量的差异均无统计学意义(P<0.05)。环磷酰胺组和柠檬苦素高、中、低剂量组小鼠的抑瘤率分别为(58.16±7.07)%、(37.09±4.26)%、(27.30±3.64)%、(15.13±2.95)%。与模型组比较,环磷酰胺组小鼠脾指数、胸腺指数、CD4^(+)和CD8^(+)T淋巴细胞百分数、CD4^(+)/CD8^(+)比值、血清中IL-2和IL-10的表达水平、肿瘤组织中Bcl-2的mRNA和蛋白的相对表达水平以及柠檬苦素各剂量组的IL-10表达水平、Bcl-2的mRNA和蛋白的相对表达水平均显著降低(P<0.05);环磷酰胺组IFN-γ表达水平、Cyt-C和Bax的mRNA和蛋白的相对表达水平,以及柠檬苦素各剂量组的脾指数(低剂量组除外)和胸腺指数、CD4^(+)和CD8^(+)T淋巴细胞百分数、CD4^(+)/CD8^(+)比值、IL-2和IFN-γ的表达水平、Cyt-C和Bax的mRNA和蛋白的相对表达水平均显著升高(P<0.05)。结论:柠檬苦素能抑制MFC胃癌荷瘤模型小鼠肿瘤组织的生长,且毒副作用相对较小;其作用机制与提高免疫功能和诱导凋亡有关。

褪黑素对小鼠MFC前胃癌细胞ERK、Akt及NF-κB表达的影响

目的探讨褪黑素对小鼠MFC前胃癌细胞ERK、Akt及NF-κB表达的影响。方法建立褪黑素在不同时间点干预胃癌细胞的体外模型,免疫印迹法观察褪黑素对小鼠MFC前胃癌细胞p-ERK/ERK、p-Akt/Akt,NF-κB表达的影响,CCK-8检测PI3K抑制剂Wortmannin对MFC细胞增殖的作用。结果①2mmol/L褪黑素作用24h、48h后明显下调MFC细胞ERK1/2、Akt的磷酸化,但对ERK1/2、Akt表达无影响;②Wortmannin明显抑制MFC细胞增殖活性,与MLT作用有明显协同效应;③褪黑素对NF-κB表达无影响。结论褪黑素可通过抑制ERK1/2、Akt的磷酸化从而抑制胃癌细胞增殖。

氟胞嘧啶/胞嘧啶脱氨酶自杀基因疗法结合热休克蛋白多肽复合物治疗小鼠胃癌

目的 :研究氟胞嘧啶 /胞嘧啶脱氨酶 (5 FC/CD)基因疗法与热休克蛋白 多肽复合物 (HSP70 PC)免疫疗法联合抗肿瘤效果。方法 :将携带CD基因的重组腺病毒注射到小鼠MFC瘤体内 ,腹腔注射 5 FC ,同时皮下接种HSP70 PC。结果 :经联合治疗后 ,70 %荷瘤小鼠肿瘤体积缩小 ,消退 ,小鼠存活期延长 ,细胞毒T淋巴细胞(CTL)杀伤活性增高 ,CD+ 4及CD+ 8T细胞浸润明显。结论 :5 FC/CD基因疗法结合HSP PC免疫疗法抗小鼠MFC瘤作用显著 ,具有临床应用前景。

褪黑素对小鼠胃癌细胞褪黑素膜受体MT1、MT2表达的影响

目的：探讨褪黑素对小鼠胃癌细胞褪黑素膜受体MT1、MT2表达的影响。方法：应用小鼠MFC前胃癌细胞建立荷胃癌小鼠模型，不同浓度褪黑素干预后，运用免疫组织化学、实时荧光定量PCR、免疫印迹定位定量检测MT1、MT2表达的变化。结果：移植瘤肿瘤细胞表达褪黑素膜受体MT1、MT2，褪黑素促进肿瘤组织膜受体MT1、MT2表达，并呈剂量依赖关系。结论：褪黑素上调褪黑素膜受体MT1、MT2的表达，说明褪黑素可能通过膜受体信号通路抑制胃癌生长。

四君子汤对胃癌细胞植入小鼠术后复发细胞内VEGF及生存期的影响

目的观察四君子汤对胃癌细胞植入小鼠术后复发肿瘤细胞血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法将MFC胃癌细胞接种于昆明小鼠右前肢皮下,10 d后切除原发瘤,再随机分为模型对照组(灌胃生理盐水)及四君子汤大、中、小剂量组,灌胃15 d,将肿瘤组织进行免疫组织化学染色,检测VEGF表达情况及小鼠生存期情况。结果四君子汤中、大剂量组能显著抑制小鼠MFC胃癌肿瘤组织中VEGF的过度表达;中、大剂量组小鼠术后生存期及中位生存期明显延长。结论四君子汤可能通过抑制VEGF的表达起到抑制肿瘤血管生成的作用,并能延长小鼠生存期。

大补脾汤联合奥沙利铂对胃癌荷瘤小鼠瘤组织TLR4/MyD88/NF-κB信号通路及下游相关分子的影响

目的:研究大补脾汤联合奥沙利铂对胃癌荷瘤小鼠瘤组织TLR4/MyD88/NF-κB信号通路及下游相关分子的影响,探讨其可能的作用机制。方法:采用昆明小鼠建立胃癌荷瘤模型,造模成功后将小鼠随机分为5组:模型组、奥沙利铂组(10 mg/kg)、大补脾汤高、中、低剂量(21.58、10.79、5.40 g/kg)联合奥沙利铂组,每组10只。造模成功后开始给药,连续给药14 d;末次给药后次日眼球取血,处死小鼠,摘取肿瘤组织称重,计算抑瘤率;采用苏木素-伊红(HE)染色后观察瘤组织形态,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)、免疫组化法(IHC)和Western blot分别检测小鼠肿瘤组织中Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)和核因子κB(NF-κB)mRNA和蛋白相对表达,采用RT-qPCR检测小鼠肿瘤组织中TNF-α和IL-6 mRNA相对表达。结果:奥沙利铂组、大补脾汤高、中、低剂量联合奥沙利铂组瘤质量均较模型组显著降低(P<0.01),抑瘤率分别为37.12%、49.48%、42.10%、40.65%,大补脾汤高剂量联合奥沙利铂组与奥沙利铂组相比差异具有统计学意义(P<0.05);HE结果显示:与模型组相比,各给药组能明显降低肿瘤细胞密度,引起肿瘤细胞坏死;与模型组相比,各给药组肿瘤组织中TLR4、MyD88、TRAF6和NF-κB p65 mRNA和蛋白相对表达均显著降低(P<0.01,P<0.05);与奥沙利铂组相比,大补脾汤高、中剂量联合奥沙利铂组肿瘤组织中TLR4、MyD88、TRAF6和NF-κB p65 mRNA和蛋白相对表达均显著降低(P<0.05);与模型组相比,各给药组肿瘤组织中TNF-α和IL-6 mRNA相对表达均显著降低(P<0.01);与奥沙利铂组相比,大补脾汤高剂量联合奥沙利铂组肿瘤组织中TNF-α和IL-6 mRNA相对表达均显著降低(P<0.05)。结论:大补脾汤可通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路下调下游炎症因子TNF-α和IL-6的表达,调节免疫微环境,发挥抗肿瘤作用,抑制胃癌发生发展。