沉默MFGE8对骨肉瘤细胞U2OS增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响

目的探讨乳脂肪球表皮生长因子8蛋白(MFGE8)在骨肉瘤细胞系中的表达及对骨肉瘤细胞(U2OS)增殖、凋亡、侵袭及迁移能力的影响。方法利用Western blot方法检测MFGE8蛋白在正常成骨细胞及骨肉瘤细胞系中的表达;GEO数据库分析MFGE8 mRNA表达与骨肉瘤患者预后的关系;下调MFGE8后检测其对U2OS细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。结果Western blot方法显示MFGE8蛋白在骨肉瘤细胞中的表达高于正常成骨细胞,且与骨肉瘤患者的预后呈负相关(均P<0.05);与sh-Ctrl(转染了空载组的U2OS细胞)组相比,sh-MFGE8(转染了sh-MFGE8的U2OS细胞)组U2OS细胞的愈合率及侵袭数均降低,增殖抑制率和凋亡率均升高,且差异均有统计学意义(P<0.05)。结论MFGE8在骨肉瘤细胞U2OS中高表达,下调MFGE8可以抑制U2OS的增殖、侵袭及迁移,诱导其凋亡。

Mfge8基因敲除纯合子小鼠的定向繁殖和鉴定及其与自身免疫疾病相关性分析

目的繁殖和鉴定Mfge8基因敲除C57BL/6小鼠,获取纯合子(Mfge8^(-/-))小鼠,并比较Mfge8^(-/-)小鼠血清学及组织学改变。方法对幼鼠剪尾抽提基因组DNA,用PCR法和琼脂糖凝胶电泳法鉴定幼鼠基因型;利用TUNEL法分别检测12周龄野生型(WT)和Mfge8^(-/-)小鼠肺组织中凋亡细胞;并且利用免疫荧光法分别检测36周龄WT和Mfge8^(-/-)小鼠血清中ANA和AECA含量。结果构建的基因敲除小鼠已成功繁育保种,并得到纯合基因缺失型小鼠。同时,12周龄Mfge8^(-/-)小鼠肺组织中凋亡细胞数量明显多于WT小鼠;36周龄Mfge8^(-/-)小鼠血清中ANA抗体及AECA抗体阳性,而WT小鼠血清中呈现阴性。结论 C57BL/6背景小鼠敲除Mfge8基因后,更易发生自身免疫疾病。

血清MFGE8与CA125、CEA对乳腺癌诊断价值探讨

目的:探讨血清中MFGE8水平及与乳腺癌诊断的关系。方法:收集62例乳腺癌患者(乳腺癌组)、49例乳腺良性肿瘤患者(良性组)及105例女性健康体检者(对照组)血清,用ELISA方法检测MFGE8水平,采用电化学发光法检测CA125和CEA水平,并对结果进行统计学分析。结果:乳腺癌组患者血清中MFGE8、CA125和CEA水平分别为(6638.5±3529.3)pg/ml、(34.58±31.26)U/ml和(4.39±3.25)ng/ml,MFGE8显著高于其他两组;乳腺癌组MFGE8、CA125和CEA的阳性率分别是65.4%、50.9%和30.3%,联合检测MFGE8、CA125和CEA,检出率可提高至85.3%。结论:血清MFGE8水平可以和CA125、CEA一同作为诊断乳腺癌的指标。

龙血竭凝胶对兔耳痤疮模型TNF-α、IL-6和MFGE8的影响

目的探讨龙血竭凝胶对兔耳痤疮模型TNF-α、IL-6和MFGE8的作用效果。方法24只新西兰家兔随机分为空白组4只和模型组20只,模型组以煤焦油涂抹和痤疮丙酸杆菌接种制备兔耳痤疮模型后,随机分为模型组、阳性药组、龙血竭凝胶高、中、低剂量组[根据对痤疮丙酸杆菌(P.acne)、金黄色葡萄球菌(S.aureus)、表皮葡萄球菌(S.epidermidis)的MIC确定],每组4只,涂抹给药,空白组和模型组给予空白凝胶基质,持续14 d。观察兔耳厚度及病理组织结构,ELISA法检测血清中TNF-α、IL-6含量,Western blot检测耳片组织中MFGE8表达。结果龙血竭凝胶对痤疮丙酸杆菌的MIC为62.5 mg/mL,对金黄色葡萄球菌的MIC为125 mg/mL,对表皮葡萄球菌的MIC为31.25 mg/mL。故以31.25、62.5、125 mg/mL为低、中、高剂量给药,14 d后发现,中、高剂量龙血竭凝胶可不同程度改善大鼠耳廓痤疮模表皮角化、减轻炎性细胞浸润及脓性丘疹。阳性对照组和龙血竭凝胶高剂量组兔耳厚度与模型相比均有降低(P<0.05),兔血清中TNF-α、IL-6水平与模型组相比均有降低(P<0.01),空白组、阳性对照组和高剂量组耳片组织中MFGE8表达高于模型组(P<0.01)。结论外用涂擦龙血竭125 mg/mL、62.5 mg/mL凝胶对兔耳痤疮有改善作用,这可能与其能够降低其血清中TNF-α、IL-6水平,恢复痤疮模型兔耳组织中MFGE8的表达有关。

猪乳脂肪球表面因子8的克隆与表达分布

基于电子延伸序列,本试验成功克隆了猪乳脂肪球表面因子8(MFGE8)基因(GenBank登录号:EU559724)并进行了序列分析,同时利用RT-PCR方法分析了MFGE8基因的组织分布规律。序列分析结果表明MFGE8开放读码框全长为1296 bp,编码431个氨基酸残基的多肽链,克隆的MFGE8基因与人、大鼠、小鼠、牛的同源性分别为71.9%、78.7%、79.1%、87.7%,推测的氨基酸序列的同源性分别为65.7%、74.0%、74.0%、84.5%。氨基酸序列N端含有Notch样"EGF"结构,C端含有FA58C结构域。构建的系统发育树显示猪与牛的亲缘关系最近。组织表达分析结果表明MFGE8在乳腺中表达最高,在大脑中表达量最低。

通腑消涤饮协定方保留灌肠联合血液净化治疗重症急性胰腺炎临床研究

目的:观察通腑消涤饮协定方保留灌肠联合血液净化治疗重症急性胰腺炎的临床效果及对患者肠黏膜屏障功能和血清因子的影响。方法:选取重症急性胰腺炎患者56例,按随机数字表法分为对照组和观察组各28例。2组患者均给予常规基础治疗,对照组患者在常规基础治疗上加用连续性血液净化,观察组在对照组基础上给予通腑消涤饮协定方治疗。治疗前后检测2组尿淀粉酶、血清脂肪酶、血清淀粉酶水平,测量小肠黏膜绒毛高度及陷窝深度,监测血清人乳脂球表皮生长因子8(MFG-E8)、D-乳酸、同型半胱氨酸(Hcy)水平。结果:治疗前,2组尿淀粉酶、血清脂肪酶、血清淀粉酶水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,2组尿淀粉酶、血清脂肪酶、血清淀粉酶均较治疗前降低,且观察组各项指标均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗前,2组小肠黏膜绒高度、陷窝深度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,2组小肠黏膜绒高度、陷窝深度较治疗前均有升高,且观察组患者的升高程度高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗前,2组MFGE8、D-乳酸、Hcy水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,2组MFG-E8水平较治疗前升高,D-乳酸、Hcy水平较治疗前降低;观察组MFG-E8水平高于对照组,D-乳酸、Hcy水平低于对照组;差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:通腑消涤饮协定方保留灌肠联合血液净化治疗重症急性胰腺炎效果良好,可有效恢复肠黏膜屏障功能,而调控MFG-E8、D-乳酸、Hcy三者水平是其起效的重要作用机制。